EGFR基因突變與腫瘤標(biāo)志物表達(dá)的關(guān)聯(lián)性及其對(duì)原發(fā)性肺癌的診斷價(jià)值

鄒傳偉，王小拍，周麗霞

(廣州市第一人民醫(yī)院普通內(nèi)科1、病理科2、心胸外科3，廣東廣州510000)

EGFR基因突變與腫瘤標(biāo)志物表達(dá)的關(guān)聯(lián)性及其對(duì)原發(fā)性肺癌的診斷價(jià)值

鄒傳偉1，王小拍2，周麗霞3

(廣州市第一人民醫(yī)院普通內(nèi)科1、病理科2、心胸外科3，廣東廣州510000)

目的探討原發(fā)性肺癌患者EGFR基因突變及系列腫瘤標(biāo)志物表達(dá)狀況，為肺癌的預(yù)防、預(yù)測(cè)、診斷和治療提供依據(jù)。方法選擇2014年3月至2015年12月期間廣州市第一人民醫(yī)院收治的160例原發(fā)性肺癌患者，取新鮮病理組織標(biāo)本，用廈門(mén)艾德核酸提取試劑提取體細(xì)胞DNA，采用擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)熒光PCR(ARMS-PCR)技術(shù)檢測(cè)EGER基因突變，采取外周靜脈血用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清系列腫瘤標(biāo)志物，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果160例肺癌患者中，EGER基因野生型比率為47.56%(78/164)，EGER基因突變型比率為52.44%(86/164)，突變型中21L858R點(diǎn)突變占23.17%(38/164)，19Del突變占22.56%(37/164)。所檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物按陽(yáng)性率高低排序?yàn)椋篊YFRA21-1(351/537，65.36%)、CEA(346/532，65.04%)、CA125(203/361，56.23%)、CA153(137/358，38.27%)、CA724(116/365，31.78%)、CA199(71/366，19.40%)、NSE(84/536，15.67%)、SCC(47/535，8.79%)、AFP(31/364，8.52%)。EGER基因21L858R突變肺癌患者較19Del突變肺癌患者腫瘤標(biāo)志物CEA陽(yáng)性率高(71.97%和64.86%)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；隨著CEA濃度梯度遞增，EGER基因突變率也遞增。結(jié)論肺癌致病與EGER基因突變、腫瘤標(biāo)志物高表達(dá)關(guān)系密切，通過(guò)系列腫瘤標(biāo)志物和EGER基因突變檢測(cè)，將有助于肺癌的診斷和鑒別診斷，并為肺癌治療手段選擇提供依據(jù)。

肺惡性腫瘤；EGFR基因；基因突變；腫瘤標(biāo)志物

肺癌長(zhǎng)期來(lái)位居國(guó)內(nèi)惡性腫瘤發(fā)病率和死因構(gòu)成中的首位，肺癌是嚴(yán)重影響國(guó)人健康、威脅生命的惡性疾病[1]。長(zhǎng)期的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)已經(jīng)證明，肺癌與工業(yè)排污、大氣污染、吸煙相關(guān)聯(lián)。抑制以上有害因素影響，并研究與肺癌致病相關(guān)影響因素，以加強(qiáng)肺癌的預(yù)防、預(yù)測(cè)、早期診斷和治療，已引起社會(huì)各界高度關(guān)注與重視。本研究以160例原發(fā)性肺癌患者為樣本，通過(guò)手術(shù)切除或纖支境等活檢技術(shù)獲取新鮮病理組織標(biāo)本，并經(jīng)病理組織細(xì)胞形態(tài)和免疫組化診斷技術(shù)確診為肺癌，然后采用肺癌新鮮病理組織提取體細(xì)胞DNA，使用擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)熒光PCR(ARMS-PCR)法，對(duì)160例標(biāo)本行EGER基因突變檢測(cè)，并采取外周靜脈血用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)系列腫瘤標(biāo)志物，從基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)角度對(duì)肺癌致病進(jìn)行研究，旨在探討肺癌患者中EGER基因突變情況、以及其與系列腫瘤標(biāo)志物表達(dá)的關(guān)系，為肺癌的預(yù)防、預(yù)測(cè)、診斷和治療提供依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料160例原發(fā)性肺癌患者來(lái)自2014年3月至2015年12月共22個(gè)月期間在廣州市第一人民醫(yī)院呼吸科、心胸外科、腫瘤科住院的患者，其中男性89例，女性71例；年齡35～86歲，平均(62.12± 1.82)歲。所有患者均根據(jù)臨床癥狀和影像學(xué)檢查(包括胸部X光照片和胸部CT)作出肺癌初步臨床診斷。

1.2 研究方法

1.2.1 檢測(cè)儀器設(shè)備EGER基因突變檢測(cè)儀器使用美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的ABI7500PCR儀，DNA提取試劑(型號(hào)：FFPE DNA,Cat NO.ADx-FF01)和人類(lèi)EGER基因突變熒光PCR檢測(cè)試劑盒由廈門(mén)艾德醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所提供。測(cè)定提取樣本DNA濃度和純度的紫外分光光度計(jì)型號(hào)Nanodrop2000。腫瘤標(biāo)志物系列檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光法，檢測(cè)儀器使用德國(guó)羅氏Cobas e 602分析儀。

1.2.2 標(biāo)本處理160例原發(fā)性肺癌患者通過(guò)手術(shù)切除或纖支境檢查等活檢技術(shù)獲取新鮮病理組織標(biāo)本，離體標(biāo)本30 min內(nèi)放入商品化的10%中性福爾馬林溶液固定。溶液與標(biāo)本體積大于10:1，手術(shù)標(biāo)本固定時(shí)間為6～12 h，活檢標(biāo)本為4～8 h。病理組織標(biāo)本處理程序包括標(biāo)本收取、石蠟包埋、切片、HE染色、病理組織細(xì)胞形態(tài)、免疫組化檢查評(píng)估等，從而明確肺癌病理診斷。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)需空腹采取靜脈血標(biāo)本5 mL送檢。

1.2.3 DNA提取與檢測(cè)從新鮮病變組織中取樣應(yīng)確定至少含有30%肺癌病變組織，將石蠟包埋病理組織或切片樣品厚度切成5 μm，取3～8片，選用廈門(mén)艾德生物醫(yī)藥科技公司的核酸提取試劑提取人類(lèi)基因組DNA，所提樣本DNA需用紫外分光光度計(jì)測(cè)定濃度和純度，DNA純度的OD260/280比值為1.8～2.0，提取完的DNA建議立即進(jìn)行檢測(cè)，否則置于-20℃以下保存。人類(lèi)EGER基因突變檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方法操作流程按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者臨床資料及組織病理學(xué)分類(lèi)160例肺癌患者中，男性89例(55.62%)，女性71例(44.38%)。89例男性患者中，吸煙者56例(62.92%)，無(wú)吸煙33例(37.08%)；56例男性吸煙者中，按吸煙指數(shù)(每天吸煙支數(shù)×吸煙年數(shù))計(jì)數(shù)為：400以下者11例，400～600者20例，700～800者19例，800以上者6例。71例女性患者中吸煙者2例(2.82%)，其吸煙指數(shù)均在200以下；無(wú)吸煙69例(97.18%)。160例肺癌患者按組織細(xì)胞形態(tài)和免疫組化檢測(cè)結(jié)果分類(lèi)，主要分為腺癌142例(88.75%)、鱗癌10例(6.25%)、其他8例(5%)等類(lèi)別，其他類(lèi)中包括腺磷癌、類(lèi)癌、肉瘤樣癌等。

2.2 EGER基因突變檢測(cè)情況160例肺癌患者中，EGER基因野生型為78人次(47.56%)，EGER基因突變型為86人次(52.44%)，突變型中21L858R點(diǎn)突變?yōu)?8人次(23.17%)，19Del突變?yōu)?7人次(22.56%)。在89例男性肺癌患者中，共有4例患者EGER基因同時(shí)檢測(cè)到存在兩個(gè)位點(diǎn)突變。其EGER基因突變?cè)敿?xì)情況，見(jiàn)表1。

表1160 例原發(fā)性肺癌患者EGFR基因突變檢測(cè)結(jié)果

2.3 腫瘤標(biāo)志物表達(dá)情況腫瘤標(biāo)志物系列檢測(cè)包括細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、鱗狀上皮癌相關(guān)抗原(SCC)、神經(jīng)元特異烯醇(NSE)、糖類(lèi)抗原-125 (CA125)、糖類(lèi)抗原-153(CA153)、糖類(lèi)抗原-199 (CA199)、糖類(lèi)抗原-724(CA724)、癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)。在明確肺癌病理診斷后，將160例肺癌患者每一例在住院過(guò)程中歷次腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果匯總做縱向統(tǒng)計(jì)，將超過(guò)正常參考值的作為陽(yáng)性，計(jì)算其陽(yáng)性率。所檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物按陽(yáng)性率高低排序?yàn)椋篊YFRA21-1為65.36%(351/537)、CEA為65.04% (346/532)、CA125為56.23%(203/361)、CA153為38.27%(137/358)、CA724為31.78%(116/365)、CA199為19.40%(71/366)、NSE為15.67%(84/536)、SCC為8.79%(47/535)、AFP為8.52%(31/364)。EGER基因21L858R突變肺癌患者較19Del突變肺癌患者腫瘤標(biāo)志物CEA陽(yáng)性率高(71.97%和64.86%)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表2。

2.4 肺癌患者EGER基因突變與腫瘤標(biāo)志物CEA、CYFRA21-1濃度梯度關(guān)聯(lián)性從以上119例具備完整腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)系列的原發(fā)性肺癌患者中剔除4例雙位點(diǎn)突變患者后余115例，按腫瘤標(biāo)志物CEA、CYFRA21-1首診檢測(cè)結(jié)果以濃度梯度分層，結(jié)果見(jiàn)表3和表4。

表2 原發(fā)性肺癌患者EGFR基因突變與腫瘤標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性率(%)

表3 115例原發(fā)性肺癌患者EGFR基因突變與CEA濃度梯度的關(guān)聯(lián)性(例)

表4 115例原發(fā)性肺癌患者EGFR基因突變與CYFRA21-1濃度梯度的關(guān)聯(lián)性(例)

3 討論

表皮生長(zhǎng)因子受體(EGER)是原癌基因(erbB1/ HER1也即EGER基因)的表達(dá)產(chǎn)物[2]，定位于細(xì)胞膜上，EGER由胞外的配體結(jié)合區(qū)、疏水跨膜結(jié)合域和胞內(nèi)的蛋白酪氨酸激酶區(qū)三部分組成[3]。EGER主要通過(guò)兩條途徑將信號(hào)傳遞至細(xì)胞核，一條是Ras-Raf-MAPK途徑，另一條是PI3K-PKC-IKK途徑，當(dāng)信號(hào)傳導(dǎo)至細(xì)胞核后，引起核內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄水平的增加，使細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化，EGER信號(hào)傳導(dǎo)的異常是包括原發(fā)性肺癌等多種腫瘤發(fā)生的原因。EGER基因位于人類(lèi)7號(hào)染色體的短臂上，由188 307個(gè)堿基組成，包括28個(gè)外顯子，其酪氨酸激酶功能區(qū)由外顯子18-24編碼，研究發(fā)現(xiàn)一些患者EGER基因的編碼區(qū)，主要是在外顯子18～21上發(fā)生突變，而這些突變與表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGER-TKI)如吉非替尼、厄洛替尼藥物反應(yīng)性有關(guān)。

根據(jù)“二次打擊學(xué)說(shuō)”[4]，肺癌是親代遺傳獲得易感變異基礎(chǔ)上，環(huán)境致癌因素長(zhǎng)期作用，支氣管黏膜上皮細(xì)胞EGER、KRAS、BRAF等基因突變積累形成。對(duì)于一個(gè)特定個(gè)體來(lái)說(shuō)，其體內(nèi)所有類(lèi)型的細(xì)胞均含有同樣一套基因組，而人類(lèi)各個(gè)體基因組存在大量的變異和多態(tài)性，這種基因序列差異(包括單核苷酸多態(tài)性SNP、短串聯(lián)重復(fù)序列STR和拷貝數(shù)目變異CNV)構(gòu)成不同個(gè)體對(duì)疾病易感性和對(duì)藥物、環(huán)境因素等不同反應(yīng)的分子基礎(chǔ)。在本研究中，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，89例男性肺癌患者中吸煙者占比62.92%(56/89)，非吸煙者占比37.08%(33/89)；71例女性肺癌患者中吸煙者占比2.82%(2/71)，非吸煙者占比97.18%(69/ 71)。說(shuō)明環(huán)境因素(如吸煙)是否致肺癌，存在著個(gè)體易感性差異區(qū)別?！岸未驌魧W(xué)說(shuō)”就是對(duì)以上實(shí)踐現(xiàn)象貼切的理論解釋。如何通過(guò)對(duì)人群中由親代遺傳而來(lái)的胚系細(xì)胞肺癌易感基因的檢測(cè)，從而從分子水平上開(kāi)展肺癌致病的早期“精準(zhǔn)預(yù)測(cè)”與“精準(zhǔn)預(yù)防”，值得研究者進(jìn)一步思考、探索與挖掘。有關(guān)肺癌組織病理學(xué)分類(lèi)方面，160例肺癌患者中腺癌占大部分，占比88.75%(142/160)，鱗癌占比6.25%(10/160)，其他類(lèi)別占比5.00%(8/160)，其他類(lèi)別包括腺磷癌、類(lèi)癌、肉瘤樣癌等。

腫瘤起源于一些未分化或微分化的干細(xì)胞，上皮細(xì)胞作為干細(xì)胞自我更新的組織和細(xì)胞類(lèi)型，更容易發(fā)生癌變，據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前人類(lèi)腫瘤90%以上是上皮源性[5]。通過(guò)本試驗(yàn)原發(fā)性肺癌患者支氣管黏膜上皮細(xì)胞EGER基因突變檢測(cè)，從基因組學(xué)角度，可以發(fā)現(xiàn)經(jīng)病理診斷確診的160例原發(fā)性肺癌病例中，EGER基因突變型占比52.44%(86/164)，主要是21L858R點(diǎn)突變(占23.17%，38/164)和19Del突變(占22.56%，37/164)，突變率和突變情況與其他研究結(jié)果相近[6-8]，說(shuō)明肺癌致病與EGER基因突變明確相關(guān)[9]。有占比47.56% (78/164)的患者EGER基因未發(fā)生突變，表現(xiàn)為野生型，是否存在其他基因突變，情況尚不明確。而18G719X、20T790M、20S768I、20Ins、21L861Q等位點(diǎn)突變頻率較低，均屬于低頻突變。以上160例原發(fā)性肺癌EGER基因突變情況，為以后的肺癌基因診斷提供了依據(jù)。

根據(jù)分子生物學(xué)中心法則，遺傳信息從DNA傳遞給RNA，再?gòu)腞NA傳遞給蛋白質(zhì)，即完成遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程。在確診的160例原發(fā)性肺癌病例中，已發(fā)現(xiàn)EGER驅(qū)動(dòng)基因高頻突變。那么，從蛋白質(zhì)組學(xué)角度，腫瘤標(biāo)志物系列檢測(cè)也發(fā)現(xiàn)有顯著高表達(dá)。經(jīng)大樣本檢測(cè)統(tǒng)計(jì)，所檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物按陽(yáng)性率高低排序?yàn)椋篊YFRA21-1(351/537，65.36%)、CEA(346/ 532，65.04%)、CA125(203/361，56.23%)、CA153(137/ 358，38.27%)、CA724(116/365，31.78%)、CA199(71/366，19.40%)、NSE(84/536，15.67%)、SCC(47/535，8.79%)、AFP(31/364，8.52%)，說(shuō)明原發(fā)性肺癌發(fā)病與腫瘤標(biāo)志物表達(dá)存在明確正相關(guān)，腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)有助于原發(fā)性肺癌的診斷，但只能起輔助診斷作用，而無(wú)確診價(jià)值。腫瘤標(biāo)志物CYFRA21-1、CEA陽(yáng)性率較高，反映肺癌疾病的一致性較好，說(shuō)明其檢測(cè)靈敏度、診斷價(jià)值較高，但易于出現(xiàn)假陽(yáng)性，在有關(guān)肺部良性腫塊腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)研究中，兩者都有10%以上假陽(yáng)性率[10-11]。相反，腫瘤標(biāo)志物SCC陽(yáng)性率較低，反映肺癌疾病的一致性較差，說(shuō)明其檢測(cè)靈敏度、診斷價(jià)值較低，易出現(xiàn)假陰性。同時(shí)將同一患者住院期間歷次腫瘤標(biāo)志物系列檢測(cè)做比較，發(fā)現(xiàn)前后結(jié)果比較有極好的連貫性。提示對(duì)臨床中常碰到的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性病例，而對(duì)其診斷意義有疑問(wèn)時(shí)，可通過(guò)動(dòng)態(tài)檢測(cè)、觀察來(lái)厘清。在臨床工作中，腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果的解讀，除觀察是否超過(guò)正常參考值，作陰陽(yáng)性判別外，其數(shù)值高低對(duì)提示診斷也有價(jià)值。一般來(lái)說(shuō)，數(shù)值越高、偏離正常參考值越多、越具有肯定診斷價(jià)值。160例肺癌病例中，具備以上完整腫瘤標(biāo)志物系列檢測(cè)組合的119例患者的首診檢測(cè)結(jié)果按同時(shí)陽(yáng)性個(gè)數(shù)做橫向比較，發(fā)現(xiàn)全部陰性共有4例，占比3.36%(4/119，P＜0.05)，屬小概率事件。單個(gè)腫瘤標(biāo)志物陽(yáng)性占比19.32%(23/119)，多個(gè)腫瘤標(biāo)志物陽(yáng)性占比77.32%(92/119)，其中同時(shí)三個(gè)腫瘤標(biāo)志物陽(yáng)性占比最高(28/119，23.53%)。以上結(jié)果說(shuō)明，腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)在原發(fā)性肺癌診斷中有明確的價(jià)值。而且，如果進(jìn)行單個(gè)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)，將存在極高漏診率，通過(guò)腫瘤標(biāo)志物系列檢測(cè)組合進(jìn)行檢測(cè)，可提高肺癌診斷準(zhǔn)確性，降低漏診率。

如上所述，在原發(fā)性肺癌中，大約2/3患者腫瘤標(biāo)志物CEA存在陽(yáng)性表達(dá)。表3所示在74例陽(yáng)性表達(dá)患者中，5 ng/mL≤CEA＜20 ng/mL占37.84%(28/74)，CEA＞20 ng/mL占62.16%(46/74)，說(shuō)明CEA表達(dá)濃度較高。分子生物學(xué)理論上有“一個(gè)基因一種多肽”假說(shuō)，那么一個(gè)基因中不同位點(diǎn)突變又會(huì)有何種影響？有關(guān)EGER基因不同突變位點(diǎn)與腫瘤標(biāo)志物CEA表達(dá)的關(guān)聯(lián)方面，表2中，EGER基因21L858R突變肺癌患者CEA陽(yáng)性率為71.97%(95/132)，19Del突變肺癌患者CEA陽(yáng)性率為64.86%(72/111)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。EGER基因21L858R突變肺癌患者CEA陽(yáng)性率為74.07%(20/27)，19Del突變肺癌患者CEA陽(yáng)性率為57.69%(15/26)，差異未統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，計(jì)算方法不同，但結(jié)論一致。說(shuō)明CEA表達(dá)濃度差異較小，屬于微調(diào)，而非決定性的。但兩種計(jì)算方法均顯示EGER基因21L858R突變肺癌患者較19Del突變肺癌患者CEA陽(yáng)性表達(dá)率高，是否提示EGER基因21L858R位點(diǎn)突變，促使調(diào)控序列包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子功能上調(diào)，使EGER基因編碼序列作用加強(qiáng)，從而與腫瘤標(biāo)志物CEA高表達(dá)存在某種內(nèi)在聯(lián)系，尚未能下定論。其次，有關(guān)CEA濃度梯度與EGER基因突變關(guān)聯(lián)方面，發(fā)現(xiàn)隨著CEA濃度梯度的遞增，EGER基因突變率也遞增。有研究認(rèn)為EGER基因突變率隨著術(shù)前血清CEA的升高而增加，在沒(méi)有條件獲得EGER基因突變的情況下，對(duì)于CEA表達(dá)水平增高的NSCLC患者，認(rèn)為其有較高EGER基因突變率，可以嘗試使用EGER-TKI，會(huì)有生存獲益[12]。但如上所述，在本研究中未能獲得足夠、可靠的依據(jù)支持該結(jié)論。

有關(guān)腫瘤標(biāo)志物CYFRA21-1的表達(dá)方面，腫瘤標(biāo)志物CYFRA21-1陽(yáng)性率較高，在表2總樣本中CYFRA21-1陽(yáng)性率為65.36%(351/537)，表4中CYFRA21-1陽(yáng)性率為69.57%(80/115)，數(shù)值接近。但其表達(dá)濃度較低，表4中80例陽(yáng)性表達(dá)患者，CYFRA21-1＜20 ng/mL占80.00%(64/80)，CYFRA21-1＞20 ng/mL占20.00%(16/80)。其中50 ng/mL＜CYFRA21-1＜200 ng/m者只有5例。有關(guān)EGER基因不同突變位點(diǎn)與腫瘤標(biāo)志物CYFRA21-1表達(dá)的關(guān)聯(lián)方面，表2中，EGER基因21L858R突變肺癌患者CY-FRA21-1陽(yáng)性率為70.77%(92/130)，19Del突變肺癌患者CYFRA21-1陽(yáng)性率為57.66%(64/111)，兩者間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表4中，EGER基因21L858R突變肺癌患者CYFRA21-1陽(yáng)性率為70.37%(19/27)，19Del突變肺癌患者CYFRA21-1陽(yáng)性率為69.23%(18/26)，CYFRA21-1陽(yáng)性率兩者基本相同。有關(guān)CYFRA21-1濃度梯度與EGER基因突變關(guān)聯(lián)方面，發(fā)現(xiàn)CYFRA21-1各濃度梯度之間EGER基因突變率甚為接近，各分層之間EGER基因突變率幾乎無(wú)差別?？傮w來(lái)說(shuō)，EGER基因21L858R與19Del不同位點(diǎn)突變的肺癌患者，其腫瘤標(biāo)志物表達(dá)有些微差別，但不顯著，其內(nèi)在調(diào)控因素、關(guān)聯(lián)比較復(fù)雜。因此，有關(guān)EGER基因不同位點(diǎn)突變與腫瘤標(biāo)志物表達(dá)的關(guān)聯(lián)，仍需要進(jìn)一步探索、研究。

本試驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)肺癌病理組織支氣管黏膜上皮體細(xì)胞DNA中EGER基因突變，現(xiàn)階段其檢測(cè)目的主要是為肺癌的分子靶向治療提供依據(jù)，但也存在技術(shù)局限，檢測(cè)的靶基因?yàn)閱蝹€(gè)基因，實(shí)驗(yàn)所使用的ARMS-PCR技術(shù)，可以檢出10 ng DAN樣品中含量低至1%的基因突變[13]，但只能檢測(cè)已知位點(diǎn)突變。而下一代測(cè)序(NGS)技術(shù)可以檢出突變豐度在0.01%～0.1%的突變[14]，檢測(cè)靈敏度更高。同時(shí)既可檢測(cè)已知位點(diǎn)突變，也可檢測(cè)未知位點(diǎn)突變。一般認(rèn)為，肺癌是多基因異常引起的惡性疾病，通過(guò)多基因檢測(cè)更能反映疾病的全貌。因此從肺癌致病與基因突變關(guān)聯(lián)分析，從診斷的角度，更趨向于進(jìn)行多基因突變檢測(cè)，甚至是全外顯子組或全基因組檢測(cè)。其次，從檢測(cè)標(biāo)本的采取著眼，通過(guò)高效的富集、捕獲技術(shù)檢測(cè)外周血微量循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)或循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CtCs)，即所謂的液體活檢技術(shù)來(lái)進(jìn)行腫瘤體細(xì)胞多基因突變檢測(cè)、診斷，是當(dāng)前的發(fā)展趨勢(shì)和研究熱點(diǎn)[15-16]。通過(guò)以上研究有望提供簡(jiǎn)便的、有創(chuàng)新性的檢測(cè)技術(shù)、手段和方法應(yīng)用于臨床，對(duì)臨床影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)肺部占位疑難病例，通過(guò)液體活檢技術(shù)進(jìn)行基因突變檢測(cè)，同時(shí)進(jìn)行肺癌腫瘤標(biāo)志物系列檢測(cè)，以輔助臨床診斷，確認(rèn)或排除肺癌，并為進(jìn)一步治療手段的選擇提供依據(jù)。從而從分子病理學(xué)角度來(lái)推動(dòng)肺癌的精準(zhǔn)預(yù)防、預(yù)測(cè)、基因診斷和治療。

綜上所述，原發(fā)性肺癌患者中存在高頻EGER基因突變和系列腫瘤標(biāo)志物高表達(dá)，EGER基因突變型中，以21L858R和19Del占大多數(shù)，突變型中女性多于男性。通過(guò)EGER基因突變和系列腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)，將為肺癌的診斷和治療方法的選擇提供依據(jù)。

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Association of EGFR gene mutation with tumor marker expression and its value in the diagnosis of primary lung cancer.

ZOU Chuan-wei1,WANG Xiao-pai2,ZHOU Li-xia3.Department of General Internal Medicine1,Department of Pathology2,Department of Cardio-Thoracic Surgery3,Guangzhou First People's Hospital,Guangzhou 510000,Guangdong, CHINA

ObjectiveTo investigate the association of epidermal growth factor receptor(EGER)gene mutation with the expression of tumor markers in patients with primary lung cancer,and to provide evidence for the prevention,prediction,diagnosis and treatment of lung cancer.MethodsThe fresh pathological tissue specimens were collected from 160 patients with primary lung cancer who admitted to Guangzhou First People′s Hospital from March 2014 to December 2015.Somatic cell DNA were extracted with Xiamen AmoyDx?DNA and RNA Extraction Kits.Then ARMS-PCR technique was used to detect EGER gene mutations.The series of tumor markers were detected by taking the peripheral venous blood with chemiluminescence method,then the data were analyzed statistically.ResultsIn 160 primary lung cancer patients,EGER gene wild type rate was 47.56%(78/164),and EGER gene mutation type rate was 52.44%(86/164)．For EGER gene mutation type,the proportion of 21L858R mutation was 23.17%(38/164),and that of 19Del mutation was 22.56%(37/164)．The detection of tumor markers sorted by positive rate as followes:65.36%(351/ 537)of CYFRA21-1,65.04%(346/532)of CEA,56.23%(203/361)of CA125,38.27%(137/358)of CA153,31.78% (116/365)of CA724,19.40%(71/366)of CA199,15.67%(84/536)of NSE,8.79%(47/535)of SCC,8.52%(31/364)of AFP．Tumor markers CEA positive rate in lung cancer patients of EGER gene 21L858R mutations was 71.97%,which was higher than 64.86%in patients with 19Del mutations(P＞0.05).As the CEA concentration gradient increasing,EGFR gene mutation rate was also increasing.ConclusionLung cancer pathogenesis is closely related to EGER gene mutation and tumor marker overexpression.The detection of series of tumor markers and EGER mutation will contribute to the diagnosis and identification of lung cancer,and provide the basis for lung cancer treatment．

Pulmonary malignant tumor;Epidermal growth factor receptor(EGER)gene;Gene mutation;Tumor markers

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.15.005

R734.2

A

1003—6350（2017）15—2426—05

2017-05-03)

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：2012B31800327)

鄒傳偉。E-mail：zcw.cz@163.com