羧甲基纖維素鈉對(duì)4℃保存藏豬精液指標(biāo)的影響

尼 瑪，晉美多吉，賴 可，陳曉英，譚占坤，任子利

（1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏 拉薩 850009；2.西藏自治區(qū)達(dá)孜縣農(nóng)牧局，達(dá)孜 850100；3.西藏自治區(qū)日喀則市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，日喀則 857000；4.西藏農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，林芝 860000）

仔豬生產(chǎn)

羧甲基纖維素鈉對(duì)4℃保存藏豬精液指標(biāo)的影響

尼 瑪1，晉美多吉2，賴 可3，陳曉英1，譚占坤4，任子利4

（1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏 拉薩 850009；2.西藏自治區(qū)達(dá)孜縣農(nóng)牧局，達(dá)孜 850100；3.西藏自治區(qū)日喀則市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，日喀則 857000；4.西藏農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，林芝 860000）

試驗(yàn)旨在研究羧甲基纖維素鈉（CMC）對(duì)藏豬精液4℃保存效果的影響，采用電刺激法采集健康藏豬精液，在改進(jìn)的豬精液低溫稀釋液為基礎(chǔ)液中，添加不同濃度的CMC（0、6、12、18和24 μmol/L），將藏豬種公豬新鮮精液稀釋后于4℃環(huán)境保存至第5天，以藏豬精子活力、精子畸形率和精子頂體完整率為評(píng)價(jià)精液品質(zhì)指標(biāo)，探討CMC對(duì)藏豬精液4℃保存效果的影響。結(jié)果顯示：12 μmol/L CMC添加組藏豬精子活力、精子畸形率、精子頂體完整率均極顯著好于其他試驗(yàn)組（P＜0.01）?？傊?，在改進(jìn)的豬精液稀釋液中添加CMC 12 μmol/L可明顯改善4℃環(huán)境保存藏豬精液品質(zhì)，該試驗(yàn)研究為今后藏豬精液低溫保存的生產(chǎn)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

羧甲基纖維素鈉（CMC）；藏豬；4℃環(huán)境；精液品質(zhì)

4℃低溫保存，精子代謝活動(dòng)水平低，脂質(zhì)過(guò)氧化程度低，保存時(shí)間比常溫更長(zhǎng)，同時(shí)可應(yīng)用普通冰箱保存，經(jīng)濟(jì)方便。任子利等[1]研究了維生素C對(duì)藏豬精液4℃保存及其精子全基因組DNA甲基化的影響，陳曉英等[2-4]先后研究了紅景天多糖、維生素E及不同稀釋液對(duì)藏豬精液4℃保存效果的影響，為藏豬精液低溫保存的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

羧甲基纖維素鈉（Carmellose Sodium,CMC）又稱羧甲基纖維素鈉鹽。具有黏合、增稠、增強(qiáng)、乳化、保水、懸浮等作用[5]。在食品應(yīng)用中不僅是良好的乳化穩(wěn)定劑、增稠劑，而且具有優(yōu)異的凍結(jié)、溶化穩(wěn)定性，并能延長(zhǎng)貯藏時(shí)間。在稀釋液中添加一定量的CMC可減緩精子沉降速度，延長(zhǎng)沉淀時(shí)間，為使用前減少了搖勻次數(shù)，進(jìn)而提高精液保存質(zhì)量。張家慶等[6]研究表明在稀釋液中添加CMC 16 μmol/L，可明顯提高低溫液態(tài)保存后豬的精液品質(zhì)。本試驗(yàn)旨在探討CMC對(duì)生活在高海拔環(huán)境的藏豬精液4℃保存的效果，以提高藏豬種公豬精液在4℃保存后的質(zhì)量。以期為藏豬精液4℃保存提供更多的精液保護(hù)劑選擇方案。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)地點(diǎn) 試驗(yàn)藏豬為3～5歲健康種公豬6頭。試驗(yàn)時(shí)間為2017年5月，試驗(yàn)地點(diǎn)為西藏拉薩市達(dá)孜縣某藏豬養(yǎng)殖專業(yè)合作社、西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所和西藏農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院。

1.1.2 主要設(shè)備與試劑 動(dòng)物電刺激采精儀（MDW-1，成都華智開物科技有限公司），倒置熒光顯微鏡（IX73，奧林巴斯），電熱恒溫水槽（DKB-450A，上海森信），變頻冰箱（BCD-649WDVC，海爾），-80℃冰箱（MDF-U33V，合肥榮事達(dá)三洋電器股份有限公司）。

食品級(jí)羧甲基纖維素鈉（上海申光使用化學(xué)品有限公司）、考馬斯亮藍(lán)（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、Diff-Quik Stain染液（北京普博斯）、亞衛(wèi)精液稀釋粉（丹麥）、速眠新Ⅱ（吉林省敦化市圣達(dá)動(dòng)物藥品有限公司）。

新鮮藏豬精液由西藏拉薩市達(dá)孜縣某藏豬養(yǎng)殖專業(yè)合作社提供。

1.2 試驗(yàn)方法與內(nèi)容

1.2.1 改進(jìn)的低溫稀釋液配制 參照孫時(shí)軍等[7]的試驗(yàn)結(jié)果，使用亞衛(wèi)牌精液稀釋劑作為基礎(chǔ)稀釋劑，在稀釋后的精液中加入1%乙二醇作為低溫保護(hù)劑。

1.2.2 精液采集及處理 采用速眠新Ⅱ（0.1 mL/kg）肌內(nèi)注射麻醉健康藏豬種公豬，用動(dòng)物電刺激采精儀于3 V、50 mA條件下電刺激法采集健康藏豬精液。

將每頭藏豬種公豬精液（精子活力0.8以上）均做4倍稀釋，用6層以上紗布包裹后放入培養(yǎng)箱中，17℃平衡2 h后，放入冰箱4℃保存。

1.2.3 精子質(zhì)量評(píng)價(jià) 精子活力和精子畸形率兩項(xiàng)精液常規(guī)性狀參照世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)（WHO）[8]的方法測(cè)定，具體方法如下。1）精子活力：精液過(guò)濾后立即在顯微鏡下觀察精子活力，采用百分制法，直線前進(jìn)精子數(shù)占總精子數(shù)的百分比為精子活力。2）精子畸形率：采用龍膽紫酒精溶液染色法，將精子涂片染色，在400倍顯微鏡下觀察，計(jì)算不同視野500個(gè)精子中畸形精子占比例即為畸形率。3）精子頂體完整率參照文獻(xiàn)[9]考馬斯亮藍(lán)R250染色法進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)用6頭藏豬種公豬隔2 d采精1次，共采精7次。每次每頭藏豬種公豬精液分5組，每組3個(gè)重復(fù)。在改進(jìn)的豬精液低溫稀釋液為基礎(chǔ)液中，按0 μmol/L、6 μmol/L、12 μmol/L、18 μmol/L和24 μmol/L添加CMC，將每頭藏豬種公豬精液均做4倍稀釋后于4℃保存到第5天時(shí)以藏豬精子活力、精子畸形率、精子頂體完整率和質(zhì)膜完整率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，探討CMC對(duì)4℃保存藏豬精液品質(zhì)的影響。每頭藏豬種公豬精液均做3個(gè)重復(fù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所得試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel進(jìn)行前期處理，再用SPSS 11.5軟件進(jìn)行One-Way ANOVA方差分析，并進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，檢驗(yàn)誤差為5%和1%。

2 結(jié)果與分析

由表1可以看出，每頭藏豬種公豬精液4℃保存到第5天時(shí)，12 μmol/L CMC添加組的精子活力極顯著優(yōu)于其他組（P＜0.01）；精子畸形率12 μmol/L CMC添加組極顯著小于其他組（P＜0.01）；精子頂體完整率12 μmol/L CMC添加組極顯著高于其他組（P＜0.01）。

表1 CMC對(duì)4℃保存藏豬精液品質(zhì)的影響（n=42）

3 討論

隨著現(xiàn)代化藏豬養(yǎng)殖生產(chǎn)技術(shù)的提高，為有效控制疫病傳播、降低飼養(yǎng)公豬的費(fèi)用、提高豬群品質(zhì)、解決藏豬精液的妥善保存問(wèn)題，人工授精技術(shù)服務(wù)于藏豬產(chǎn)業(yè)發(fā)展已迫在眉睫。在藏豬精液稀釋液中添加有效保護(hù)劑于4℃低溫保存時(shí)間比常溫更長(zhǎng)，同時(shí)可應(yīng)用普通冰箱保存，經(jīng)濟(jì)方便。CMC是一種良好的乳化穩(wěn)定劑和增稠劑在食品中廣泛應(yīng)用，且能有效延緩貯藏時(shí)間[6]。本研究參考張家慶等[6]研究結(jié)果，試將CMC添加到高海拔地區(qū)特有的藏豬種公豬精液稀釋液中，探討對(duì)藏豬精液4℃保存至第5天時(shí)精子質(zhì)量的影響發(fā)現(xiàn)，精液稀釋液中添加CMC 12 μmol/L時(shí)，精子活力、精子頂體完整率最高，精子畸形率最低，添加量略低于張家慶等[6]研究結(jié)果，可能與高海拔環(huán)境氧分壓低、精子體外運(yùn)動(dòng)能力略差有關(guān)。

CMC的乳化穩(wěn)定和增稠作用減緩了精子沉降速度、延長(zhǎng)了沉淀時(shí)間，提高了藏豬精液4℃環(huán)境保存質(zhì)量。其具體保護(hù)機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

在改進(jìn)的豬精液稀釋液中添加CMC 12 μmol/L可明顯改善4℃環(huán)境保存藏豬精液品質(zhì)，本試驗(yàn)研究為今后藏豬精液低溫保存的生產(chǎn)增加一種精液保護(hù)劑選擇方案。

[1]任子利，趙彥玲，王建洲，等.維生素C對(duì)藏豬精液4℃保存及其精子全基因組DNA甲基化的影響 [J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，47（5）：1057-1061.

[2]陳曉英，馬金英，宋天增，等.紅景天多糖對(duì)藏豬精液4℃保存效果的研究[J].養(yǎng)豬，2016（6）：33-36.

[3]陳曉英，馬金英，宋天增，等.維生素E對(duì)4℃保存藏豬精液品質(zhì)和抗氧化保護(hù)作用的影響[J].養(yǎng)豬，2016（6）：37-40.

[4]陳曉英，馬金英，宋天增，等.不同稀釋液對(duì)藏豬精液4℃保存效果的影響[J].畜牧與飼料科學(xué)，2016，37（10）：22-24.

[5]羧甲基纖維素鈉 [EB/OL].http://baike.baidu.com/link?url= T3GvzaGxwCFOKcmVEZXPOtB4TGmi3TGN-d0pOTtvlTKiwCSfJdlIRZdNeOir2c6-_dyBR_1RuzknP-IxhXOhdOYEs－DEFDqmmzuRhUWI61OPwqVtsaimCii_Hdkk0hM4QJccL5BrNcPI-76QPdS6yT4RzqeY9kaa5Gi8PxAmW0Vm.

[6]張家慶，陳東峰，王獻(xiàn)偉，等.羧甲基纖維素鈉對(duì)豬精液常溫保存效果的影響[J].家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2017，38（2）：33-38.

[7]孫時(shí)軍，朱華鴻，陳曉峰，等.低溫保護(hù)劑對(duì)4℃保存豬精液活率的影響[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2012（4）：28-29.

[8]WHO.Laboratory test handbook about the interaction between semen and cervical mucus[M].PressⅢ.Beijing:Scientific Editor,1994:9-13.

[9]胡傳活，許春榮，陸媚，等.黃芪多糖對(duì)豬精液低溫保存的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2015，35（1）：150-154.

（編輯：郭玉翠）

為何減肥食品大多不奏效

【美國(guó)斯里爾利斯特網(wǎng)站1月12日?qǐng)?bào)道】題：大部分減肥食品不奏效的驚人原因

大部分減肥食品之所以注定不奏效至少有一個(gè)明顯原因，那就是它們不會(huì)給人帶來(lái)樂(lè)趣。

但這個(gè)解釋并未描繪出減肥究竟有多難的完整情形。例如，為什么有人有毅力堅(jiān)持嚴(yán)格的飲食而減掉一半體重，而其他人堅(jiān)持同樣的飲食計(jì)劃反而增重了？

和生活中的大多數(shù)事情一樣，這個(gè)問(wèn)題的答案是復(fù)雜的。這就是為什么減肥專家開始把肥胖看作一組疾病，而非單一的問(wèn)題，就像醫(yī)生看待癌癥一樣。

馬薩諸塞綜合醫(yī)院肥胖、新陳代謝和營(yíng)養(yǎng)研究所主任李·卡普蘭博士對(duì)英國(guó)《泰晤士報(bào)》記者說(shuō)，他估計(jì)可能有多達(dá)59種不同類型的肥胖。59種！因此，對(duì)一種類型的肥胖有效的療法可能對(duì)另一種類型的肥胖就無(wú)效，而且即便找到一種對(duì)多種類型的肥胖都有效的可能性也相當(dāng)?shù)汀?/p>

與癌癥進(jìn)行類比是思考肥胖問(wèn)題的一個(gè)有用方式。你不會(huì)切除肺癌患者的乳房，除非你是個(gè)不具備基本解剖知識(shí)卻不知何故獲準(zhǔn)從醫(yī)學(xué)院畢業(yè)的外科醫(yī)生。

此外，還有30多個(gè)基因可能與肥胖有關(guān)，但研究人員仍難搞清到底哪些遺傳和環(huán)境因素與肥胖最有關(guān)聯(lián)。我們?nèi)灾跎俚氖?，這些基因究竟如何相互作用并與環(huán)境發(fā)生關(guān)聯(lián)從而致人肥胖。而如果無(wú)法搞清原因，治療肥胖就會(huì)變得更加困難。

了解家族史有一定幫助，但它當(dāng)然不會(huì)決定你的命運(yùn)。波士頓醫(yī)療中心營(yíng)養(yǎng)和體重管理部門負(fù)責(zé)人卡羅琳·阿波維安博士說(shuō)：“父母或家庭成員肥胖的人并不注定會(huì)超重，但知道你的基因可能對(duì)高糖和高飽和脂肪食物尤其敏感將有助于了解個(gè)性化需求。那些帶有容易使自己增重的基因的人會(huì)在充斥著廉價(jià)和不健康食品的環(huán)境中增重?！?/p>

雖然減肥的一般原則—健康飲食、經(jīng)常鍛煉、睡眠充足—都是對(duì)的，但吃多少和“健康飲食”具體意味著什么，是因人而異的。遺憾的是，治療通常是一個(gè)試錯(cuò)過(guò)程，直到人們發(fā)現(xiàn)究竟是什么對(duì)他們減肥有效。

例如，卡普蘭博士對(duì)《紐約時(shí)報(bào)》記者說(shuō)，他對(duì)肥胖患者試用40種療法，包括不同的飲食、有氧運(yùn)動(dòng)、加強(qiáng)睡眠和幾十種藥物。

此外，即使有些人一開始體重減輕了，但能保持下去才是關(guān)鍵。大部分體重減輕的人會(huì)反彈，這令對(duì)肥胖采取綜合療法變得更加困難。

找到可持續(xù)的減肥方案并不容易，但在合適的方案、成套技巧和心態(tài)的幫助下，這是有可能做到的，只是可能需要比預(yù)期更長(zhǎng)的時(shí)間才能找到對(duì)你奏效的方法。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2017-01-18）

Effect of Cysteamine on Tibetan Boar Semen Preserved at 4℃ and Antioxidative

Ni Ma1,Jinmei Duoji2,LAI Ke3,CHEN Xiaoying1,TAN Zhankun4,REN Zili4
(1.Institute of Animal Science,Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences,Lhasa 850009, China;2.Animal Husbandry Bureau,Tibet Dagzê County,Dagzê 850100,China;3.Animal Disease Control and Prevention Center,Tibet Shigatse City,Shigatse 857000,China;4.Faculty of Animal Science,Tibet Agricultural and Animal Husbandry College,Nyingchi 860000,China)

This study was conducted to investigate the effects of Carmellose Sodium on Tibetan boar semen preserved at 4℃ and antioxidative.The semen was collected from Tibetan boar by electrical stimulation.Add Carmellose Sodium 0 μmol/L,6 μmol/L,12 μmol/L,18 μmol/L,24 μmol/L,in the improvement of pig semen low temperature dilution liquid.Save to fifth days at 4℃ after dilution of fresh semen.Body integrity and membrane integrity rate of the top Tibetan pig sperm activity,sperm abnormal rate and semen quality evaluation index,to investigate the effect of Carmellose Sodium on the quality of semen quality at 4℃.The results show that,the sperm motility,sperm deformity rate,sperm motility rate and plasma membrane integrity rate of the Carmellose Sodium 12 μmol/L addition group were significantly better than other test groups（P＜0.05）.In short, adding Carmellose Sodium 12 μmol/L to the improved pig semen diluent can significantly improve the semen quality and antioxidant protection at 4℃.The experimental study laid a foundation for the production and application of cryopreservation of boar semen in the future.

Carmellose Sodium;Tibetan pig;environmental science at 4℃;semen quality

S828

A

1002-1957(2017)04-0022-03

2017-06-17

西藏自治區(qū)自然科學(xué)基金（2016ZR-15-37）

尼 瑪（1972-），女，西藏拉薩人，助理研究員，碩士，主要從事高原畜禽安全生產(chǎn)工作.E-mail：nimacw@126.com

任子利（1969-），男，河南衛(wèi)輝人，副教授，博士，主要從事動(dòng)物繁殖教學(xué)與研究工作.E-mail：zlren0925@163.com