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    某規(guī)模化肥育豬場(chǎng)呼吸道疾病的診斷與防控

    2017-09-01 16:19:38陳同煜秦四海王玉超古金元胡東方劉思當(dāng)
    養(yǎng)豬 2017年4期
    關(guān)鍵詞:肥育耳病氏桿菌

    陳同煜,秦四海,彭 濤,王玉超,古金元,胡東方,劉思當(dāng)

    (1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,山東 泰安 271000;2.臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,山東 臨沂 276000)

    某規(guī)?;视i場(chǎng)呼吸道疾病的診斷與防控

    陳同煜1,秦四海2,彭 濤1,王玉超1,古金元1,胡東方1,劉思當(dāng)1

    (1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,山東 泰安 271000;2.臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,山東 臨沂 276000)

    山東某規(guī)模化肥育豬場(chǎng)于2016年12月通過(guò)長(zhǎng)途運(yùn)輸購(gòu)進(jìn)某種豬公司60日齡左右的仔豬1 000多頭,進(jìn)場(chǎng)1周豬群即出現(xiàn)咳嗽、氣喘、發(fā)熱并伴有拉稀病癥,發(fā)病率20%,病死率10%,是一起傳播迅速的急性呼吸道病疫情。通過(guò)病死豬剖檢診斷、細(xì)菌分離鑒定、組織病理學(xué)檢查、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和分子生物學(xué)檢測(cè),確診為一起由應(yīng)激繼發(fā)的呼吸道細(xì)菌感染,并導(dǎo)致豬群對(duì)重要病毒病抵抗力下降。通過(guò)藥敏試驗(yàn)選擇敏感藥物,對(duì)豬群實(shí)施了合理的藥物防治,并對(duì)相關(guān)病毒性疾病進(jìn)行了免疫,該豬場(chǎng)疫情得以迅速控制,避免了重大的經(jīng)濟(jì)損失。

    豬;呼吸道疾?。辉\斷;防控

    豬呼吸道疾病是危害豬場(chǎng)穩(wěn)定生產(chǎn)的首要疾病,因其致病因素復(fù)雜,涉及細(xì)菌、病毒、支原體、寄生蟲、不良環(huán)境及飼養(yǎng)管理等眾多因素,往往難究其根源,稱為呼吸道病綜合征(PRDC)。隨著疫苗制品質(zhì)量的提高和養(yǎng)殖戶免疫意識(shí)的增強(qiáng),豬場(chǎng)病毒性疾病的防控效果越來(lái)越好,但卻忽視了細(xì)菌性疾病對(duì)豬呼吸道的危害。近年來(lái)豬場(chǎng)PRDC頻發(fā),尤其是許多中小規(guī)模豬場(chǎng)或散養(yǎng)戶,由于引種或外購(gòu)仔豬肥育使該病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著增加,多數(shù)豬場(chǎng)在購(gòu)豬1個(gè)月內(nèi)即出現(xiàn)不同程度的疫情。通過(guò)多起病例檢測(cè)發(fā)現(xiàn),在危害豬呼吸道的細(xì)菌性疾病病原中,支原體、副豬嗜血桿菌、傳染性胸膜肺炎放線桿菌以及巴氏桿菌占據(jù)了主導(dǎo)位置,該類病菌通常條件下以隱性感染居多,在冷熱交替、天氣突變、長(zhǎng)途運(yùn)輸或飼料改變等應(yīng)激狀態(tài)下易誘發(fā)PRDC,?;彀l(fā)或并發(fā)病毒性疾病使病情復(fù)雜化。下面介紹一起規(guī)?;瘜I(yè)肥育豬場(chǎng)呼吸道病的診斷與防治,為豬場(chǎng)呼吸道疾病的診斷防控提供參考。

    1 發(fā)病背景

    山東省某規(guī)?;瘜I(yè)肥育豬場(chǎng)于2016年12月1日遠(yuǎn)距離引進(jìn)某種豬公司1 600頭20~30 kg保育豬肥育,進(jìn)場(chǎng)1周后豬群即出現(xiàn)部分仔豬發(fā)燒(體溫升高達(dá)39.5~40.5℃)、咳嗽、氣喘并伴有拉稀病癥,有的病豬表現(xiàn)為耳朵發(fā)紺、被毛粗亂、消瘦,以呼吸道病癥狀最為明顯,短時(shí)間內(nèi)發(fā)病率高達(dá)20%,病死率10%,保育豬前期免疫程序不明。發(fā)病后緊急投服氟苯尼考、阿莫西林及柴胡注射液中藥針劑,效果不佳,遂前往實(shí)驗(yàn)室就診。

    2 綜合診斷

    2.1 病豬臨床檢查

    送檢病豬主要表現(xiàn)為咳嗽、氣喘,呈明顯腹式呼吸,被毛粗亂、精神沉郁、瘦弱、耳朵發(fā)紺等。

    2.2 剖檢病變

    下頜及肺門淋巴結(jié)腫大出血,腹股溝及腸系膜淋巴結(jié)顯著腫大(圖1-A);肺臟硬實(shí)暗紅色腫脹,小葉間質(zhì)水腫增寬,有的被膜附有纖維蛋白滲出物(圖1-B);有的發(fā)生纖維素性心包炎,心臟呈“絨毛心”樣變(圖1-C);胸腔、腹腔積液(圖1-D、圖1-E);肝臟淤血并附有纖維素性滲出物;有的病豬結(jié)腸黏膜出血、潰瘍(圖1-F)。

    圖1 病豬剖檢病變

    2.3 組織病理學(xué)病變

    對(duì)剖檢豬的淋巴結(jié)、脾臟、腎臟、心臟、肺臟、腦組織采樣,用10%中性福爾馬林溶液固定,常規(guī)方法制作石蠟切片,H.E染色,鏡檢。結(jié)果可見淋巴結(jié)毛細(xì)血管充血、漿液滲出,呈漿液性淋巴結(jié)炎病變(圖2-A);脾臟充血、出血,呈敗血脾病變(圖2-B);肺間質(zhì)充血,肺泡內(nèi)大量漿液、纖維素滲出,呈大葉性肺炎病變(圖2-C);腎間質(zhì)淤血、腎小管上皮細(xì)胞變性壞死(圖2-D);心肌纖維呈現(xiàn)空泡變性(圖2-E);腦血管充血,神經(jīng)元空泡變性、壞死(圖2-F)。

    圖2 病豬組織病理學(xué)變化

    2.4 病原學(xué)和血清學(xué)檢查

    因該場(chǎng)豬群發(fā)病率和死亡率均較高,首先懷疑是否有藍(lán)耳病野毒感染,除對(duì)病死豬剖檢,采集腦、脾臟、肝臟、腎臟、淋巴結(jié)及扁桃體組織液氮保存,同時(shí)隨機(jī)采集發(fā)病豬群血清18份離心,-20℃?zhèn)浯?。將凍存于液氮中的組織病料解凍后取適量組織加入滅菌PBS液并研磨成勻漿,9 000 r/min離心4 min,取上清液,同時(shí)18份血清每份吸出20 μL折合1份樣品,使用北京全式金EasyPure Viral DNA/RNA kit(批號(hào)為K10314)提取病毒核酸。根據(jù)GenBank中公布的序列設(shè)計(jì)豬藍(lán)耳病病毒片段為372 bp的特異性引物(表1),用PCR/RT-PCR方法擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳,紫外凝膠成像儀下?lián)l帶位置判定病豬的病原感染狀況,結(jié)果顯示,病料和血清中藍(lán)耳病病毒均為陰性(圖3)。

    表1 藍(lán)耳病病毒引物序列

    圖3 PRRSV 1.5%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

    使用韓國(guó)金諾試劑盒對(duì)備存血清進(jìn)行豬瘟病毒、藍(lán)耳病病毒、偽狂犬病病毒gE、圓環(huán)病毒2型抗體水平檢測(cè),4種病毒檢測(cè)均按照說(shuō)明書步驟嚴(yán)格規(guī)范操作。判定標(biāo)準(zhǔn)是豬瘟病毒(CSFV):阻斷率≥40%為陽(yáng)性;阻斷率<40%為陰性。豬藍(lán)耳病病毒(PRRSV):S/P值≥0.40為陽(yáng)性;S/P值<0.40為陰性。豬偽狂犬病病毒gE(PRV gE):S/N≤0.6為陽(yáng)性;S/N>0.6為陰性。豬圓環(huán)病毒2型(PCV2):S/P≥0.4為陽(yáng)性;S/P<0.3為陰性,之間為可疑。檢測(cè)結(jié)果見表2。

    表2 4種病毒血清抗體檢測(cè)結(jié)果

    由表2可知,部分豬只豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果為陰性,且均勻度較差,豬瘟免疫狀態(tài)差,發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較大。藍(lán)耳病病毒抗體全部陽(yáng)性且離散度大,結(jié)合病原檢測(cè)結(jié)果和臨床發(fā)病情況推知該外購(gòu)仔豬群很可能免疫過(guò)藍(lán)耳病疫苗,導(dǎo)致藍(lán)耳病病毒抗體離散度不均是因?yàn)樯贁?shù)或部分弱豬抗體水平差,另外長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)激也是導(dǎo)致豬只體內(nèi)抗體水平參次不齊的一個(gè)因素,說(shuō)明藍(lán)耳病病毒在豬群中有一定的活躍度,存在發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。偽狂犬病病毒gE抗體陽(yáng)性率較高,雖病豬未表現(xiàn)神經(jīng)癥狀,但嚴(yán)重的呼吸道病癥狀與之不無(wú)關(guān)系。圓環(huán)病毒2型抗體幾乎全部陽(yáng)性,由于該豬群免疫過(guò)1次圓環(huán)病毒疫苗,鑒于發(fā)病豬腹股溝及腸系膜淋巴結(jié)顯著腫大,不能排除豬群存在圓環(huán)病毒感染,導(dǎo)致豬只體質(zhì)下降,從而促使呼吸道疾病的發(fā)生。

    2.5 細(xì)菌分離鑒定及藥物敏感試驗(yàn)

    采集不同病豬肺組織分別劃線接種于含新生牛血清(終濃度10%)和NAD(終濃度20 g/mL)的TSA培養(yǎng)基及鮮血瓊脂平板上,37℃培養(yǎng)24~48 h后TSA培養(yǎng)基可見針尖大小、無(wú)色透明、光滑濕潤(rùn)的菌落形態(tài),鮮血瓊脂平板可見淡灰色、圓形、濕潤(rùn)、露珠樣小菌落。革蘭氏染色鏡檢,觀察到TSA培養(yǎng)基菌體呈革蘭氏陰性細(xì)小桿菌,有多種不同形態(tài),從單個(gè)球桿菌到細(xì)絲桿菌不等(圖4);鮮血瓊脂平板菌體為革蘭氏陰性短桿菌或球桿菌,散在或成雙(圖5)。初步診斷疑似副豬嗜血桿菌(HP)與巴氏桿菌(PM)混合感染。同時(shí),挑取細(xì)小單菌落接種于含新生牛血清(終濃度10%)和NAD(終濃度20 g/mL)的TSB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌,37℃12 h后挑取菌液進(jìn)行副豬嗜血桿菌和巴氏桿菌特異性PCR鑒定(表3)。結(jié)果顯示,該豬群存在副豬嗜血桿菌和巴氏桿菌混合感染(圖6)。

    表3 副豬嗜血桿菌和巴氏桿菌引物序列

    圖4 副豬嗜血桿菌分離菌株革蘭氏染色(200×)

    圖5 巴氏桿菌分離菌株革蘭氏染色(200×)

    圖6 HPS和PM 1.5%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

    分別挑取副豬嗜血桿菌和巴氏桿菌及培養(yǎng)基其他形態(tài)菌落均勻涂布于新鮮血瓊脂平板上,選取頭孢噻呋鈉、強(qiáng)力霉素、氟苯尼考、恩諾沙星、阿莫西林、慶大霉素、丁胺卡那霉素、磺胺間甲氧嘧啶8種藥敏片,每片藥物含量10 μg,用無(wú)菌鑷子將藥敏片按一定間隔分別平貼于培養(yǎng)基表面,于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。根據(jù)抑菌圈直徑(φ)判定細(xì)菌對(duì)藥物的敏感程度,判定標(biāo)準(zhǔn)為:φ≥25 mm為極度敏感;15 mm≤φ<25 mm為高度敏感;10 mm≤φ<15 mm為中度敏感;φ<10 mm為低度敏感;無(wú)抑菌圈則為耐藥。結(jié)果顯示:細(xì)菌對(duì)頭孢噻呋鈉、恩諾沙星極度敏感,對(duì)丁胺卡那霉素、慶大霉素、磺胺間甲氧嘧啶高度敏感,對(duì)氟苯尼考、阿莫西林中度敏感,強(qiáng)力霉素低度敏感(表4)。

    表4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

    3 疾病診斷

    綜合分析實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果,導(dǎo)致本次疫情的主要原因是長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)激誘發(fā)的以副豬嗜血桿菌和巴氏桿菌為主的細(xì)菌急性感染、以大葉性肺炎為主要病變特征的重癥PRDC,且不排除支原體、傳染性胸膜肺炎放線桿菌及魏氏梭菌的參與。另外,冬季寒冷、豬舍飼養(yǎng)密度大、通風(fēng)不良也是引發(fā)本次疫情的重要原因。因豬群運(yùn)輸應(yīng)激并造成了呼吸道細(xì)菌性疾病的暴發(fā),進(jìn)而造成對(duì)藍(lán)耳病、豬瘟、偽狂犬病抵抗力下降,豬群存在暴發(fā)上述疫病的風(fēng)險(xiǎn)很大。

    4 防治措施

    結(jié)合該豬場(chǎng)流行病學(xué)、病原學(xué)、血清學(xué)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果,制定以下治療方案。

    4.1 隔離病豬

    及時(shí)隔離發(fā)病豬只單獨(dú)飼養(yǎng),切斷傳染源;禁止不同圈舍飼養(yǎng)人員和外來(lái)人員交互串訪,切斷傳播媒介。

    4.2 衛(wèi)生消毒

    選用刺激性較小的過(guò)氧化劑類消毒液全群緊急消毒,包括豬舍所有空間,發(fā)病期間肥育舍和病豬隔離舍每日消毒1次。

    4.3 改善飼養(yǎng)環(huán)境

    降低圈舍飼養(yǎng)密度,加強(qiáng)豬舍防寒保暖,及時(shí)清理糞污,豬舍經(jīng)常通風(fēng),以保持圈舍清潔干燥及空氣新鮮。

    4.4 藥物防治與疫苗加強(qiáng)免疫

    4.4.1 對(duì)發(fā)病豬只應(yīng)用頭孢噻呋鈉針劑5 mg/kg體重,肌肉注射,每日1次,連用5 d。

    4.4.2 全群用包被恩諾沙星20 g/100 kg和硫酸新霉素20 g/100 kg飼料,拌料,發(fā)病豬用量加倍,連用5 d。

    4.4.3 全群用電解質(zhì)、維生素C或黃芪多糖飲水,增強(qiáng)豬只抵抗力,減少應(yīng)激反應(yīng)。

    4.4.4 待疫情穩(wěn)定后,全群普免1次高效豬瘟細(xì)胞疫苗,間隔2周普免偽狂犬病弱毒疫苗,以平衡豬群抗體均勻度,減少隱性感染豬只排毒,減輕臨床癥狀。

    實(shí)施以上防治措施,該豬場(chǎng)疫情得到有效控制,短時(shí)間內(nèi)恢復(fù)穩(wěn)定生產(chǎn)。

    (編輯:富春妮)

    S858.28

    A

    1002-1957(2017)04-0121-03

    2017-05-12收稿,2017-05-16修回

    國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目“豬重要疫病免疫防控新技術(shù)研究”子課題“規(guī)?;i場(chǎng)科學(xué)合理的免疫程序的研究(2017YFD0500605)”

    陳同煜(1990-),男,山東廣饒人,碩士,研究方向?yàn)閯?dòng)物臨床病理學(xué).E-mail:chentongyu123@126.com

    劉思當(dāng)(1961-),教授,博士生導(dǎo)師,研究方向?yàn)閯?dòng)物臨床病理學(xué)及獸藥毒理學(xué).E-mail:liusid@sdau.edu.cn

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