非小細(xì)胞肺癌組織中HHLA2表達(dá)變化及其意義

劉春，鄧述愷

(1達(dá)州市中心醫(yī)院，四川達(dá)州 635000；2西南醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院)

非小細(xì)胞肺癌組織中HHLA2表達(dá)變化及其意義

劉春1，鄧述愷2

(1達(dá)州市中心醫(yī)院，四川達(dá)州 635000；2西南醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院)

目的 觀察非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中人內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒-H-長末端重復(fù)關(guān)聯(lián)蛋白2(HHLA2)的表達(dá)變化，并探討其意義。方法 NSCLC組織60例份(腫瘤組)，癌旁組織(至少距腫瘤邊緣5 cm以上)30例份(癌旁組)，采用免疫組化En Vision法檢測(cè)兩組HHLA2，分析HHLA2表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 腫瘤組及癌旁組HHLA2陽性率分別為81.67%、13.33%，兩組比較，P<0.05。HHLA2表達(dá)與NSCLC患者性別、年齡、吸煙情況、病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P均>0.05)。結(jié)論 NSCLC組織中HHLA2表達(dá)升高，其表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)均無相關(guān)性；HHLA2可能成為NSCLC免疫檢查及治療的新靶點(diǎn)。

人內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒-H-長末端重復(fù)關(guān)聯(lián)蛋白2；非小細(xì)胞肺癌；免疫組織化學(xué)

肺癌按組織病理學(xué)分為小細(xì)胞肺癌(SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，NSCLC占肺癌的比例約85%。免疫逃逸和腫瘤微環(huán)境是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要原因之一，在手術(shù)、放療、化療等傳統(tǒng)綜合治療基礎(chǔ)上，免疫治療已取得重要進(jìn)展，CTLA-4、PD-1通路在肺癌等惡性腫瘤中已表現(xiàn)出良好的療效[1]，Nivolumab已被FDA批準(zhǔn)用于鱗狀NSCLC的治療[2]。人內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒-H-長末端重復(fù)關(guān)聯(lián)蛋白2(HHLA2)為B7家族新成員[3]，同時(shí)也被稱為B7-H7、B7-H5、B7y，為T細(xì)胞共抑制分子，在NSCLC等多種實(shí)體惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)。研究[4]發(fā)現(xiàn)，HHLA2與NSCLC的EGFR基因突變及肺腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性。HHLA2的免疫調(diào)控機(jī)制在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，有可能成為免疫檢查及治療新靶點(diǎn)。本研究采用免疫組化法檢測(cè)NSCLC組織中HHLA2表達(dá)，分析其與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系，旨在為NSCLC的免疫檢查及治療尋找新的免疫靶點(diǎn)提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 選取西南醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科2015年1～12月保存的NSCLC標(biāo)本60例份(腫瘤組)，所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)?；颊吣?2例，女18例；年齡≥60歲25例，<60歲35例；有吸煙史29例，無吸煙史31例；病理類型為鱗癌30例，腺癌30例；臨床分期Ⅰ期+Ⅱ期39例，Ⅲ期+Ⅳ期21例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例。無其他肺部疾病及其他組織、器官的惡性腫瘤，術(shù)前未行化療、放療、免疫治療及其他針對(duì)惡性腫瘤的治療。另選30例份癌旁組織(至少距腫瘤邊緣5 cm以上)作對(duì)照(癌旁組)。

1.2 組織HHLA2檢測(cè)方法 使用型號(hào)為RM2235的德國LEICA轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)分別切取厚度為4 μm的NSCLC、癌旁肺組織蠟塊各3張，其中2張用于本次實(shí)驗(yàn)行免疫組化染色，剩下1張用于HE染色以核實(shí)診斷。免疫組化采用En Vision法，常規(guī)烤片、脫蠟，脫苯、內(nèi)源性過氧化物酶滅活、修復(fù)抗原、加一抗、加二抗、顯色、復(fù)染、分化、梯度酒精脫水、透明、封片、鏡檢。以PBS代替一抗為陰性對(duì)照。染色結(jié)果判斷：HHLA2主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，出現(xiàn)棕黃色或黃色顆粒定義為陽性細(xì)胞。參照文獻(xiàn)[5]方法，免疫組化結(jié)果采用半定量法進(jìn)行分析，染色強(qiáng)度×陽性細(xì)胞百分比=免疫反應(yīng)評(píng)分。隨機(jī)在高倍顯微鏡(×400)下取10個(gè)視野，取其均值，計(jì)算染色陽性的腫瘤細(xì)胞占視野內(nèi)所有腫瘤細(xì)胞的百分比，0=0～10%染色，1=11%～25%，2=26%～50%，3=51%～75%，4=76%～100%；根據(jù)細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)的染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分：未見顯色的評(píng)為0分，顯色強(qiáng)度為淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分；將兩項(xiàng)指標(biāo)的得分相乘，按照得分結(jié)果進(jìn)行判定：0分為陰性(-)，1分為弱陽性(+)，2分為中等陽性(++)，≥3分為強(qiáng)陽性(+++)。評(píng)分時(shí)避開腫瘤壞死區(qū)域和腫瘤邊緣部分，評(píng)分只包括腫瘤細(xì)胞，腫瘤間質(zhì)細(xì)胞不作計(jì)數(shù)。在本次研究中，將得分為1分及以上的按陽性表達(dá)計(jì)算。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。采用χ2檢驗(yàn)對(duì)HHLA2的陽性表達(dá)率、HHLA2與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系進(jìn)行分析比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組HHLA2表達(dá)比較 腫瘤組及癌旁組HHLA2陽性率分別為81.67%、13.33%，兩組比較，P<0.05。

2.2 HHLA2表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系 結(jié)果見表1。由表1可知，HHLA2表達(dá)與NSCLC患者性別、年齡、吸煙情況、病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P均>0.05)。

表1 HHLA2表達(dá)與 NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

原發(fā)性支氣管肺癌是臨床常見的惡性腫瘤之一，在全球范圍內(nèi)發(fā)病率和病死率均呈上升趨勢(shì)。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究署(IARC)2010年報(bào)告顯示，2008年全球肺癌新發(fā)病例約161萬例，占惡性腫瘤新發(fā)病例數(shù)的13%，居惡性腫瘤首位，而死亡約138萬例，占惡性腫瘤死亡病例數(shù)的18%。按組織病理學(xué)，肺癌分為SCLC和NSCLC，而NSCLC是肺癌中最常見的組織學(xué)類型，占比約為85%。

HHLA2為近年發(fā)現(xiàn)的B7家族新成員[4]，同時(shí)也被稱為B7-H7、B7-H5、B7y，為T細(xì)胞共抑制分子，位于人類基因染色體3q13.13區(qū)，是一個(gè)由含有414個(gè)氨基酸的開放閱讀框及3個(gè)胞外免疫球蛋白超家族結(jié)構(gòu)域所組成的Ⅰ型跨膜蛋白，與B7家族的其他成員有顯著同源性[5,6]。HHLA2作為T細(xì)胞的負(fù)性共刺激分子，廣泛表達(dá)于人抗原呈遞細(xì)胞和T細(xì)胞。

肺癌屬免疫原性腫瘤，共抑制分子在NSCLC組織的表達(dá)代表腫瘤免疫逃逸機(jī)制之一[6]。有效的抗腫瘤免疫治療需要成功激活T淋巴細(xì)胞，而T細(xì)胞激活則需要雙重信號(hào)的協(xié)同作用，一是主要組織相容性復(fù)合體，另一個(gè)是協(xié)同刺激信號(hào)。而B7家族共信號(hào)分子為協(xié)同刺激信號(hào)的主要來源，其主要成員包括PD-L1(B7-H1)、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H6、HHLA2(B7-H7)[7,8]。HHLA2作為T細(xì)胞的負(fù)性共刺激分子，其導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生可能存在以下幾種機(jī)制：①在T細(xì)胞受體信號(hào)傳導(dǎo)作用下，抑制CD4+、CD8+T細(xì)胞的增殖功能，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃避細(xì)胞毒性T細(xì)胞的殺傷活性，減弱機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答，從而促使腫瘤免疫逃逸[9,10]；②在多種炎癥因子刺激作用下，激活樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中靜息狀態(tài)的HHLA2，誘導(dǎo)腫瘤抗原特異性T細(xì)胞凋亡，降低腫瘤微環(huán)境中T細(xì)胞免疫效應(yīng)，介導(dǎo)腫瘤的免疫逃逸[11]；③HHLA2可以通過與其受體TMIGD2結(jié)合后激活磷酸肌醇3-激酶和絲氨酸-蘇氨酸激酶AKT依賴性信號(hào)級(jí)聯(lián)途徑，抑制細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)和基因轉(zhuǎn)錄，阻礙細(xì)胞周期進(jìn)展，抑制T細(xì)胞增殖，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[12]；④當(dāng)HHLA2和TMIGD2結(jié)合后在血管生成期間起到減少細(xì)胞遷移和促進(jìn)毛細(xì)血管形成的作用，HHLA2-TMIGD2途徑可能對(duì)提高腫瘤血管內(nèi)皮生成發(fā)揮重要作用[13]。

TMIGD2為HHLA2的特異性受體，主要存在于內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞，參與體內(nèi)多種免疫反應(yīng)，在T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞均可發(fā)現(xiàn)，但TMIGD2主要表達(dá)于幼稚T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞，在抗原呈遞細(xì)胞中不表達(dá)。據(jù)研究[4,14]，HHLA2除在胎盤、腎臟、腸、膽囊、乳腺外的大多數(shù)人類正常組織中不表達(dá)外，其在包括肺癌、黑色素瘤、食管癌等多種惡性腫瘤組織中均呈高表達(dá)，這種在惡性腫瘤中廣泛表達(dá)表明HHLA2可能在腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵步驟發(fā)揮作用。而Cheng等[6]發(fā)現(xiàn)，HHLA2在NSCLC的高表達(dá)和EGFR基因突變存在相關(guān)性，因此阻斷HHLA2-TMIGD2途徑使NSCLC進(jìn)行免疫治療成為可能。但是，HHLA2與其受體TMIGD2結(jié)合的相關(guān)機(jī)制及信號(hào)通路目前尚未明確，需進(jìn)一步研究。

本研究顯示，腫瘤組NSCLC陽性率高于癌旁組，提示HHLA2可能在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，可能成為NSCLC免疫檢查及治療的新靶點(diǎn)。本研究還發(fā)現(xiàn)，HHLA2表達(dá)與NSCLC患者性別、年齡、吸煙情況、病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性，提示該結(jié)果可能由于樣本量少，需繼續(xù)深入研究HHLA2在腫瘤中的表達(dá)及作用機(jī)制，探討HHLA2及特異性受體TMIGD2參與的信號(hào)通路在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程中的作用，為HHLA2可能成為免疫檢查及治療的新靶點(diǎn)提供依據(jù)。

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鄧述愷(E-mail:dsk-lan@163.com)

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R734.2

B

1002-266X(2017)31-0064-03

2017-06-11)