結(jié)直腸癌組織乳脂肪球表皮生長因子8蛋白表達(dá)與臨床病理特征和患者生存率的關(guān)系*

陳 超 任 俊 朱建華 賈 珉，#

結(jié)直腸癌組織乳脂肪球表皮生長因子8蛋白表達(dá)與臨床病理特征和患者生存率的關(guān)系*

陳 超1任 俊2朱建華1賈 珉1，#

目的：探討乳脂肪球表皮生長因子8(MFG-E8)蛋白在結(jié)直腸癌(CRC)組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征和患者生存率的關(guān)系。方法：留取手術(shù)切除CRC癌組織(CRC組)及相應(yīng)癌旁組織(Control組)各88例，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測癌組織及癌旁組織MFG-E8蛋白表達(dá)，統(tǒng)計分析各組MFG-E8蛋白高表達(dá)率的差異，以及CRC組中MFG-E8低表達(dá)組、陽性表達(dá)組和強(qiáng)陽性表達(dá)組患者臨床病理因素和總生存率的差異。結(jié)果：CRC組癌組織MFG-E8蛋白高陽性表達(dá)率為73.86%(65/88)，顯著高于Control組28.41%(25/88)(P<0.01)。MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與患者年齡、臨床T和M分類、臨床分期及腫瘤分型無顯著相關(guān)(P>0.05)；MFG-E8陰性表達(dá)組及強(qiáng)陽性表達(dá)組患者總生存率均顯著低于陽性表達(dá)組(P<0.01)。結(jié)論：MFG-E8在CRC患者癌組織中陰性表達(dá)及強(qiáng)陽性表達(dá)均可促進(jìn)CRC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，并提示預(yù)后較差。

結(jié)直腸癌；乳脂肪球表皮生長因子8；預(yù)后

結(jié)直腸癌(Colorectal Cancer，CRC)是一種常見的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在國內(nèi)呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重影響著國民健康[1]。腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移難以治療。其侵襲轉(zhuǎn)移過程包含癌細(xì)胞的黏附、運動、基質(zhì)降解和新生血管形成等環(huán)節(jié)。乳脂肪球表皮生長因子8(MFG-E8)是一種存在于多種物種體內(nèi)的親脂性多效糖蛋白，可促進(jìn)吞噬性清除凋亡細(xì)胞，維持正常組織穩(wěn)態(tài)[2]。目前，其與腸道癌癥方面的作用，如與CRC的關(guān)系尚不清楚。本文應(yīng)用免疫組織化學(xué)法測定MFG-E8在CRC組織的表達(dá)情況，分析其與CRC臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源及分組

收集2006-07-2009-05武漢市第一醫(yī)院病理確診的結(jié)直腸癌手術(shù)切除癌組織(CRC組)及癌旁組織(Control組)各88例。CRC患者中男47例，女41例。年齡24-90歲，中位年齡71歲。按1992版Dukes分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期：1 期8例，2期48例，3期30例，4期2例。要求術(shù)前未做放化療，術(shù)后行以氟尿嘧啶為主的方案化療并隨訪，隨訪截止日期為2014-08 CRC組依據(jù)癌組織中MIG-E8強(qiáng)度分為3個亞組，即陰性表達(dá)組、弱陽性+陽性表達(dá)組(陽性表達(dá)組)和強(qiáng)陽性表達(dá)組。

1.2 主要試劑

鼠抗人MFG-E8多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司(SC-8029)，鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)試劑盒購自上海長島公司(B1012)，抗體稀釋液、 DAB顯色劑購自美國DAKO公司(GT100920、002948)。

1.3 SP染色及結(jié)果判讀

1.3.1 SP染色：4μm 厚石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，3% H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶10min，微波爐加熱修復(fù)抗原3min，加一抗(MFG-E8 1∶50 稀釋)4℃冰箱過夜，加二抗37℃ 10min，DAB 顯色，蘇木精復(fù)染，脫水透明封片，以抗體稀釋液代替一抗做陰性對照,以已知陽性的胃癌組織免疫SP染色切片作為陽性對照。

1.3.2 結(jié)果判定：細(xì)胞漿中出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性表達(dá)細(xì)胞。染色后，10×40高倍視野下，隨機(jī)選取4個視野，先行三方面染色情況評分[3]：(1)著色：無染色，0 分；淡黃色，1 分；棕黃色，2 分；棕褐色，3 分。(2)染色陽性細(xì)胞百分比：無陽性細(xì)胞，0 分；<10%，1 分；10%-50%，2 分；50%-90%，3 分；≥90%，4 分。(3)染色方式評分：無染色，0 分；散在染色，1 分；局灶染色，2 分；彌漫染色，3分。再按以上3項評分的乘積判斷陽性表達(dá)強(qiáng)度?！?分為陰性(-)表達(dá)；5-8 分為弱陽性(±)表達(dá)，9-18 分為陽性(+)表達(dá)，19-36 分為強(qiáng)陽性(+++)表達(dá)，見圖1。以上結(jié)果均至少由兩位病理科醫(yī)生以盲法觀察確定。

圖1 CRC組和Control組MFG-E8蛋白各種表達(dá)強(qiáng)度(SP，×400)

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件。計數(shù)資料用百分率(%)表示，組間比較用χ2檢驗，相關(guān)性分析用Spearman，生存率分析應(yīng)用Kaplan-meier法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CRC組與Control組MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度比較

統(tǒng)計分析以陰性表達(dá)+弱陽性表達(dá)為低表達(dá)，陽性表達(dá)+強(qiáng)陽性表達(dá)為高表達(dá)。CRC組MFG-E8高表達(dá)率明顯高于Control組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 MFG-E8在CRC組織及癌旁組織中的表達(dá)情況(n，%)

注：與Control組比較，1)P<0.01

2.2 CRC組MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理因素分析

從表2可見，MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N分類)相關(guān)(P<0.05)，MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度與其它臨床病理特征：年齡、T分類、M分類、臨床分類、腫瘤分型均無關(guān)(P>0.05)。

表2 MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 CRC組MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度與患者生存率分析

CRC組不同MFG-E8蛋白表達(dá)強(qiáng)度患者總生存率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。陰性表達(dá)組和強(qiáng)陽性表達(dá)組患者總生存率均明顯短于陽性表達(dá)組患者(P<0.01)，而陰性表達(dá)組與強(qiáng)陽性表達(dá)組患者總生存率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見圖2。

圖2 CSC患者癌組織MFG-E8蛋白不同表達(dá)強(qiáng)度者生存曲線

3 討論

MFG-E8蛋白于1990年在哺乳動物的乳腺中被首先發(fā)現(xiàn)[4]，是一種分泌型的多效糖蛋白, 分子量約為53kDa，其基因位于人類15號染色體。有研究表明，MFG-E8在多種腫瘤細(xì)胞上表達(dá)，如惡性黑色素瘤[5]、甲狀腺癌[6]、乳腺癌[7,8]等，并對預(yù)后有一定影響。但其在腸道腫瘤如CRC的表達(dá)及與病理因素和預(yù)后的關(guān)系少有報道。

本研究中CRC患者癌組織MFG-E8蛋白高表達(dá)率為73.86%，顯著高于癌旁組織28.41%，提示高表達(dá)的MFG-E8蛋白可能參與CRC的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制。同時, MFG-E8蛋白強(qiáng)陽性表達(dá)僅與病理因素中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，而與年齡、T分期、臨床分期、腫瘤分型之間無明顯關(guān)系，表明MFG-E8蛋白在結(jié)腸癌組織中的高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，(M分類由于M1數(shù)量太少，而無法獲得有意義的統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù))，而且MFG-E8蛋白強(qiáng)陽性表達(dá)組患者總生存率低于陽性表達(dá)組，這與已有文獻(xiàn)報道[6,8]對其它腫瘤研究的結(jié)果相近。

腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移不僅與腫瘤自身特性有關(guān)，還與腫瘤所處微環(huán)境穩(wěn)定性密不可分。合適強(qiáng)度的MFG-E8表達(dá)，在吞噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間起橋連作用，MFG-E8蛋白既與腫瘤細(xì)胞外翻的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，同時與吞噬細(xì)胞的αvβ3/αvβ5整合素受體結(jié)合，導(dǎo)致整合素構(gòu)象變化，通過CrkⅡ-DOCK180-Rac1復(fù)合物活化Rac1,使吞噬細(xì)胞的細(xì)胞骨架發(fā)生重組，促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬腫瘤細(xì)胞[10,11]，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，減少或阻止腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。但MFG-E8蛋白過度表達(dá)可能不利于兩細(xì)胞間的橋連，引起吞噬障礙，阻止機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的吞噬清除及炎癥反應(yīng)，增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力[12]。因而出現(xiàn)MFG-E8表達(dá)增強(qiáng)時，機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的吞噬清除發(fā)生障礙，加快腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者預(yù)后較差。

本文結(jié)果還表明CRC患者M(jìn)FG-E8陰性表達(dá)組與患者臨床病理特征和總生存率的關(guān)系與強(qiáng)陽性組表現(xiàn)相同，即MFG-E8陰性表達(dá)僅與CRC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且總生存率顯著低于陽性表達(dá)組。 推測其原因可能由于MFG-E8陰性表達(dá)時，沒有足夠數(shù)量的MFG-E8作為αvβ3和αvβ5整合子的配體，來介導(dǎo)黏著蛋白的聚集以及細(xì)胞內(nèi)的信號級聯(lián)反應(yīng)起始過程[13]，導(dǎo)致在吞噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間建立橋連作用不足，降低了機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的清除能力，導(dǎo)致CRC患者預(yù)后較差。

綜上所述，檢測CRC患者癌組織中MFG-E8蛋白的表達(dá)水平，可預(yù)測患者預(yù)后，并為個體化治療提供重要的理論依據(jù)。

本文第一作者簡介：

陳 超(1984-)，男，漢族，碩士，主要從事腫瘤免疫學(xué)診斷工作

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·信 息 欄·

CNKI研制成功《醫(yī)院科研成果統(tǒng)計分析與評價數(shù)據(jù)庫》，日前通過專家鑒定

2017年7月20日，同方知網(wǎng)(CNKI)中國科學(xué)文獻(xiàn)計量評價研究中心研發(fā)的《醫(yī)院科研成果統(tǒng)計分析與評價數(shù)據(jù)庫》召開了專家鑒定會。來自衛(wèi)生和醫(yī)療主管部門、醫(yī)院科研處、學(xué)協(xié)會等18個單位的20位專家參會，并對該項成果給予高度評價，認(rèn)為其達(dá)到國內(nèi)領(lǐng)先水平。

該數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計了全國11 863家醫(yī)院(包括1 647家三級醫(yī)院、6 357家二級醫(yī)院)及其200萬名學(xué)者近10年的科研產(chǎn)出成果數(shù)，并對其學(xué)術(shù)影響力進(jìn)行了評價。統(tǒng)計的科研成果類型包括國內(nèi)期刊發(fā)文、SCI論文、國內(nèi)會議和ISTP國際會議論文，以及專利、基金和獎勵等。除了統(tǒng)計成果數(shù)量以外，該數(shù)據(jù)庫還統(tǒng)計了期刊論文的被引頻次、下載頻次等影響力指標(biāo)，并發(fā)布了醫(yī)院和學(xué)者的h指數(shù)、綜合指數(shù)等綜合評價指標(biāo)。為了滿足醫(yī)院各科室及細(xì)分學(xué)科領(lǐng)域的評價需求，數(shù)據(jù)庫按臨床科室情況設(shè)計了28個一級學(xué)科進(jìn)行分類評價。

該數(shù)據(jù)庫為醫(yī)院科研績效評價與管理提供了豐富、全面的統(tǒng)計數(shù)據(jù)?；?科研結(jié)果管理"的理念，該數(shù)據(jù)庫發(fā)布了大量客觀事實數(shù)據(jù)。主要用途可以概括為：首先，支持醫(yī)院的學(xué)科發(fā)展水平評價。既能縱向比較各年各學(xué)科發(fā)展趨勢，又能橫向與全國同學(xué)科醫(yī)院發(fā)展水平進(jìn)行對比分析，從而知彼知己，找準(zhǔn)醫(yī)院學(xué)科建設(shè)的重點方向。其次，支持專家學(xué)者評價。該數(shù)據(jù)庫對醫(yī)院科研人員近10年的科研產(chǎn)出和學(xué)術(shù)影響力進(jìn)行了全面統(tǒng)計分析，方便醫(yī)院了解和管理本院各科室學(xué)者，也方便評估和尋找學(xué)科帶頭人和專家。第三，支持學(xué)者成果的快捷匯總和統(tǒng)計，把科研人員從整理自己成果的繁瑣工作中解放出來。只需輕輕一點，即可輕松完成了科研成果及影響力數(shù)據(jù)的統(tǒng)計和導(dǎo)出！

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Study on the Correlation between MFG-E8 Protein Expression with Clinicopathological Features and Survival in Colorectal Cancer

CHEN Chao1, REN Jun2, ZHU Jian-hua1, JIA Min1,#

1Department of Clinical Laboratory;2Department of Surgery,Wuhan First Hospital, Wuhan 430030,China;#

Objective: To explore the expression of milk fat globule EGF factor Ⅷ (MFG-E8) in colorectal cancer (CRC) tissues and the correlation with clinicopathological features and survival in CRC patients.Method: 88 CRC-related cases with follow-up information were made into tissue microarrays according to the paired principle of cancer tissues and the adjacent tissues. The expression of MFG-E8 was detected with immunohistochemical analysis and SPSS software was finally utilized to analyze the relationships between experimental data and clinical indicatives.Results:MFG-E8 expression increased significantly in colorectal cancer compared with normal mucosa tissues(control group) (P<0.01). In addition, both strong positive and negative expression of MFG-E8 were correlated with lymph node metastasis (P<0.05). Furthermore, patients with strong positive or negative expression of MFG-E8 showed shortened overall survivals (P<0.01),compared with patients with weakly positive and positive expression of MFG-E8.Conclusion: Both strong positive expression and negative expression of MFG-E8 might be involved in the progression of CRC and they were associated with patients' poor overall survivals.

Colorectal cancer;Milk fat globule-epidermal growth factor 8; Prognosis

武漢市衛(wèi)計委課題(武衛(wèi)2007-43號)

武漢市第一醫(yī)院，武漢 43000;1檢驗科；2外科；#

,E-mail:Pollyann@126.com

本文2017-04-03收到，2017-07-16修回

R735.3

A

1005-1740(2017)03-0038-05