抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體等自身抗體在自身免疫性疾病診斷中的意義

陳向華 王建吉 耿學(xué)麗 丁萌 朱亞芹 華正祥

·論著·

抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體等自身抗體在自身免疫性疾病診斷中的意義

陳向華 王建吉 耿學(xué)麗 丁萌 朱亞芹 華正祥

目的 對抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體等自身抗體在SLE及其他自身免疫性疾病診斷中的意義進(jìn)行深入的分析和研究。方法 收集收治的110例自身免疫性疾病患者(56例SLE、26例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、10例干燥綜合征、4例強(qiáng)直性脊柱炎、5例系統(tǒng)性血管炎、6例混合性結(jié)締組織病、3例皮肌炎)的基本資料，應(yīng)用蛋白印跡法對患者體內(nèi)的血清抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體、抗-sm、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體等自身抗體的水平進(jìn)行分析和研究，進(jìn)而衡量自身抗體在自身免疫性疾病診斷中的意義。結(jié)果 本次研究的110例自身免疫性疾病患者的血清抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體、抗-sm、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體診斷SLE的敏感性分別是38.26%、53.66%、28.18%、34.55%、30.9%。特異性分別是99.19%、99.83%、99.09%、96.45%、86.43%?？购颂求wP0蛋白抗體在本研究的110例患者中的陽性率為11.82%，抗dsDNA抗體在本研究的110例患者中的陽性率為17.27%，抗-sm抗體在本研究的110例患者中的陽性率為3.64%,抗核小體抗體在本研究的110例患者中的陽性率為4.55%,抗組蛋白抗體在本研究的110例患者中的陽性率為10.91%。結(jié)論 抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體等自身抗體在自身免疫性疾病診斷中有良好的應(yīng)用價值，在實際的操作過程中要注意選擇多種類型的抗體進(jìn)行組合，可以實現(xiàn)各種抗體之間的相互補(bǔ)充，有利于提高身免疫性疾病診斷的正確率。

抗核糖體P0蛋白抗體；抗dsDNA抗體；自身免疫性疾病

一般來說，自身免疫性疾病是非常嚴(yán)重的疾病類型，這種疾病的危害性比較大，治療起來也比較困難，被稱為疑難雜癥。比如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)就是一種典型的自身免疫性疾病[1]。系統(tǒng)性紅斑狼瘡是由多種因素引起的，可累及全身多個器官和組織的炎癥性結(jié)締組織病。產(chǎn)生的多種自身抗體及免疫復(fù)合物可累及心臟、腎臟、肝臟等器官[2]。其發(fā)病機(jī)制主要是由于機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫功能紊亂，產(chǎn)生多種自身抗體，形成免疫復(fù)合物，進(jìn)而引起組織、器官的損傷[3]。對于自身免疫性疾病的治療來說，前期的診斷非常關(guān)鍵，相關(guān)的醫(yī)學(xué)研究指出，大多數(shù)自身免疫性疾病患者的血清里面會出現(xiàn)自身抗體[4]。本文進(jìn)一步對抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體等自身抗體在自身免疫性疾病診斷中的意義進(jìn)行深入的分析和研究，收集我院收治的自身免疫性疾病患者110例的一般資料，然后對這些患者體內(nèi)的血清抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體、抗-sm、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體等自身抗體的水平進(jìn)行分析，報告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 收集承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2015年9月至2016年9月收治的自身免疫性疾病患者110例的基本資料，經(jīng)過相關(guān)的醫(yī)學(xué)檢驗，患者全部符合自身免疫性疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除嚴(yán)重的肝腎功能障礙和精神疾病的情況。其中男45例，女65例;年齡17～87歲，平均年齡(49.11±1.55)歲。

1.2 方法 (1)對患者的血液標(biāo)本進(jìn)行有效收集，然后將收集到的血液標(biāo)本分離出血清(3 000 r/min離心10 min)，將其放置在-20℃的冰箱中保存，以備進(jìn)一步檢驗。(2)準(zhǔn)備好本研究使用的試劑：抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體、抗-sm、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體均用蛋白印跡法進(jìn)行檢測，試劑由德國歐蒙醫(yī)學(xué)診斷實驗公司提供。操作方法及步驟：用樣本緩沖液將患者血清做1∶101倍稀釋，用1.5 ml樣本緩沖液預(yù)處理膜條5 min,吸去孵育槽中的液體，加入1.5 ml 稀釋好的血清樣本，室溫?fù)u床上孵育30 min,用配好的1∶10清洗液清洗3次，每次5 min,吸去孵育槽中的液體,加入1.5 ml稀釋的酶結(jié)合物，室溫孵育30 min,用配好的1∶10清洗液清洗3次，每次5 min,吸去孵育槽中的液體,加入1.5 ml底物液，室溫孵育10 min,用蒸餾水清洗膜條3次，每次1 min,取出膜條風(fēng)干并按照膜條上的條帶標(biāo)記位置判讀結(jié)果，陽性反應(yīng)在相應(yīng)的抗原處呈現(xiàn)深色條帶，抗原位置無條帶出現(xiàn)則判讀為陰性。

1.3 評價指標(biāo) 本研究主要對110例自身免疫性疾病患者的血清抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體、抗-sm、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體的敏感性和特異性陽性率進(jìn)行對比。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 敏感性和特異性 110例自身免疫性疾病患者的血清抗核糖體P0蛋白抗體和抗dsDNA抗體的敏感性分別為38.26%、53.66%、28.18%、34.55%、30.9%。特異性分別是99.19%、99.83%、99.09%、96.45%、86.43%。見表1。

表1 敏感性和特異性 %

2.2 抗核糖體P0蛋白抗體陽性率 110例患者中陽性率為11.82%，抗dsDNA抗體在110例患者中的陽性率為17.27%,抗-sm抗體110例患者中的陽性率為3.64%,抗核110例患者中的陽性率為4.55%,抗組蛋白抗體在110例患者中的陽性率為10.91%。見表2。

表2 抗核糖體P0蛋白抗體陰性率 n=110

2.3 56例SLE患者中四種自身抗體的敏感性和特異性及對SLE的評價 抗dsDNA抗體、抗-sm、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體聯(lián)合檢測的特異性和陽性預(yù)測值較單項抗體檢測時有所升高，而敏感性和陰性預(yù)測值降低。見表3。

表3 四種自身抗體的敏感性和特異性及對SLE的評價 %

3 討論

自身免疫性疾病是指機(jī)體對自身抗原發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致自身組織損傷引起的疾病，這類疾病常導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生病理改變和(或)功能障礙。病因和發(fā)病機(jī)制不是很清楚，可能與長期感染、物理或化學(xué)因素刺激有關(guān)，也可能與遺傳因素有關(guān)。自身免疫性疾病按致病抗原的分布范圍可分為器官特異性自身免疫性疾病和系統(tǒng)性自身免疫性疾病。自身免疫性疾病種類很多，但具有某些共同的臨床特點(diǎn)：(1)患者的血液中可以檢出高滴度的自身抗體和(或)與自身免疫組織成分起反應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞；(2)患者組織器官為免疫炎癥的病理特征，損傷范圍與自身抗體或致敏淋巴細(xì)胞所針對的抗原分布相對應(yīng)；(3)用相同的抗原在某些實驗動物中可復(fù)制出相似的疾病模型，并能通過自身抗體或相應(yīng)致敏淋巴細(xì)胞使疾病在同系動物間轉(zhuǎn)移；(4)多數(shù)病因不明，常呈自發(fā)性或特發(fā)性，有些與病毒感染或服用某些藥物有關(guān)；(5)病程一般較長，多呈反復(fù)發(fā)作和慢性遷延的過程，病情的嚴(yán)重程度與自身免疫應(yīng)答呈平行關(guān)系；(6)有遺傳傾向；(7)發(fā)病女性多于男性，老年人多于青少年；(8)多數(shù)患者血清中可查到抗核抗體；(9)用免疫抑制劑(如糖皮質(zhì)激素等)有一定療效；(10)自身免疫病有重疊現(xiàn)象，既一個患者可以同時有多種自身抗體。

一般情況下來說，自身免疫性疾病的臨床表現(xiàn)非常復(fù)雜，診斷起來也不容易，因此進(jìn)一步加強(qiáng)自身免疫性疾病的診斷方式和診斷手段的研究具有十分重要的意義[5]。對于自身免疫性疾病患者來說，其最明顯的特點(diǎn)就是會產(chǎn)生自身抗體，這種抗體在致病過程中發(fā)揮著十分重要的作用[6]。反過來講，通過檢測患者產(chǎn)生的自身抗體，可以幫助我們正確把握自身免疫性疾病的病情[7]。

SLE是比較常見的一種自身免疫性疾病。是一種可惡化或緩解的非器官特異性免疫炎性疾病，疾病活動期可累及多種組織和臟器。本病的病程常見緩解期和活動期交替發(fā)生，患者血清中可檢測出多種抗體，這些抗體有些是SLE的特異性性抗體，有些與疾病的發(fā)展有關(guān)[8]。研究發(fā)現(xiàn)，許多自身抗體可在其臨床癥狀及并發(fā)癥出現(xiàn)前被檢測到。由此可見，自身抗體的早期檢測有利于疾病的早期診斷，有利于疾病的早期治療[2，9]。

抗核糖體P蛋白抗體，又稱抗rRNP抗體，血清中出現(xiàn)此抗體代表SLE活動，幾乎只對SLE特異，為SLE的一標(biāo)記性抗體，但對SLE患者的診斷敏感度僅為10%～20%，有報道該抗體主要與伴有精神癥狀的中樞神經(jīng)損傷型SLE相關(guān)，在精神癥狀發(fā)作前及發(fā)作期抗核糖體P蛋白抗體效價升高。具有腦炎和神經(jīng)病的SLE患者中，抗核糖體P蛋白抗體敏感性達(dá)56%～90%[8]?？购颂求wP蛋白抗體以五聚體的形式存在，包括P0(38kd),P19(18kd)和P2(17kd),抗核糖體P0蛋白抗體是一種多功能蛋白。本研究結(jié)果顯示抗核糖體P0蛋白抗體對SLE的敏感性達(dá)到38.26%，特異性高達(dá)99.19%，是診斷SLE比較特異性的指標(biāo)。

抗dsDNA抗體對診斷SLE有較高的特異性，70%～90%的活動期SLE患者該抗體陽性，該抗體的滴度與SLE疾病活動程度相平行，隨著疾病的控制，該抗體的滴度可以下降或消失，因此該抗體可以作為SLE患者治療和預(yù)后的指標(biāo)[10,11]。有報道，定期監(jiān)測抗dsDNA抗體，有助于觀察SLE患者腎損傷程度，可作為狼瘡腎病的觀察指標(biāo)[12]?？筪sDNA抗體診斷的特異性較高(99.83%)，但診斷的靈敏度較低(53.66%)，因此提示抗dsDNA抗體即使陰性液不能排除SLE的診斷[13]。

抗-sm抗體是SLE的標(biāo)記性抗體之一，特異性達(dá)99%，但靈敏度僅20%～30%?？?sm抗體水平不與SLE疾病的活動度相關(guān)，治療后的SLE患者也可存在抗-sm抗體陽性?？?sm抗體的檢測對早期、不典型的SLE或治療后的回顧性診斷幫助很大[8]。有報道抗-sm抗體陽性是發(fā)生狼瘡性腎炎的特異性指標(biāo)之一[14]。在本研究中，抗-sm抗體對SLE診斷的敏感性為28.18%，特異性高達(dá)99.09%，與文獻(xiàn)報道[12]結(jié)果一致，是診斷SLE的理想指標(biāo)。

抗核小體抗體是公認(rèn)的診斷SLE的標(biāo)志性抗體，事實上，人們公認(rèn)其為SLE血清中最早的標(biāo)志性抗體[15]。在本研究中，抗核小體抗體的敏感性為34.55%，特異行為96.45%，該抗體的敏感性高于抗-sm抗體。由此證實抗核小體抗體是診斷SLE的有一個標(biāo)志性抗體。

SLE患者中抗組蛋白抗體的陽性率為30%～80%，并且常常伴有抗dsDNA抗體陽性。95%以上的藥物誘導(dǎo)性狼瘡可出現(xiàn)抗組蛋白抗體[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，抗組蛋白抗體的敏感性為30.9%，特異性為86.43%。因此，抗組蛋白抗體也被認(rèn)為是診斷SLE的重要抗體。

自身免疫性疾病患者血清中抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體、抗-sm抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體是最常見的典型抗體，因此在某種程度上來說，做好患者體內(nèi)的抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA等抗體的檢測，就可以說明患者體內(nèi)自身抗體的水平，這樣對于我們進(jìn)一步做好自身免疫性疾病的治療具有重大的幫助作用[16]。

綜上所述，為了進(jìn)一步對抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體等自身抗體在自身免疫性疾病診斷中的意義進(jìn)行深入的分析和研究，本研究收集我院110例自身免疫性疾病患者的基本資料，然后對這些患者體內(nèi)的血清抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體、抗-sm抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體等自身抗體的水平進(jìn)行分析。最終的結(jié)果顯示，本研究的110例自身免疫性疾病患者的血清抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體、抗-sm、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體診斷SLE的敏感性分別是38.26%、53.66%、28.18%、34.55%、30.9%，特異性分別是99.19%、99.83%、99.09%、96.45%、86.43%?？购颂求wP0蛋白抗體在110例患者中的陽性率為11.82%，抗dsDNA抗體在110例患者中的陽性率為17.27%，抗-sm抗體在110例患者中的陽性率為3.64%,抗核小體抗體在本次研究的110例患者中的陽性率為4.55%,抗組蛋白抗體在本次研究的110例患者中的陽性率為10.91%，抗核糖體P0蛋白抗體、抗dsDNA抗體等自身抗體在自身免疫性疾病診斷中有良好的應(yīng)用價值，由于不同抗體的敏感性和特異性不同，我們在實際的操作過程中要注意選擇多種類型的抗體進(jìn)行組合，這樣可以實現(xiàn)各種抗體之間的相互補(bǔ)充，有利于我們提高身免疫性疾病診斷的正確率，多種抗體聯(lián)合檢測，有助于避免疾病的漏診，從而達(dá)到早期診斷、早期治療的目的?？购颂求wP0蛋白抗體、抗dsDNA抗體等自身抗體在自身免疫性疾病診斷中有重大意義。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.17.015

項目來源：承德市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計劃項目(編號：201601A031)

067000 河北省承德市，承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院(陳向華、耿學(xué)麗、丁萌、朱亞芹、華正祥)；河北省承德縣醫(yī)院(王建吉)

R 593

A

1002-7386(2017)17-2617-04

2017-03-11)