血清自身抗體檢測對慢性HBV感染者的應(yīng)用價值

黃程勇，黃毅，陳雯

(福建省立醫(yī)院檢驗科,福建福州350001)

·檢驗與臨床·

血清自身抗體檢測對慢性HBV感染者的應(yīng)用價值

黃程勇，黃毅，陳雯

(福建省立醫(yī)院檢驗科,福建福州350001)

目的分析慢性HBV感染者自身抗體的體內(nèi)變化情況，探討其臨床應(yīng)用價值。方法選取137例HBV感染者，其中慢性乙型病毒性肝炎（CHB）72例、肝硬化（LC）35例、原發(fā)性肝癌（HCC）30例，分別檢測抗核抗體（ANA）、類風(fēng)濕因子（RF）、抗原抗體譜（ENA）和HBV DNA，同時對比ANA陽性組與ANA陰性組的丙氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽紅素（DBIL）、谷氨酰氨基轉(zhuǎn)移酶（GGT）四項肝功能指標(biāo)。結(jié)果137例慢性HBV感染者ANA檢出率為37.2%，熒光模式以“顆粒型”和“均質(zhì)型”為主，其中“顆粒型”29例（56.9%）、“均質(zhì)型”15例（24.4%），滴度以1：100為主。HBV感染者中ANA陽性組4項肝功能指標(biāo)均明顯高于ANA陰性組（P=0.000），HBV感染者中HBV DNA陽性組和陰性組自身抗體檢出率相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論慢性HBV感染者體內(nèi)存在不同程度的自身免疫反應(yīng)，對自身抗體的監(jiān)測有助于了解機體的免疫狀況，對疾病的臨床診療和轉(zhuǎn)歸具有一定的指導(dǎo)作用。

自身抗體；乙型病毒性肝炎；肝功能；類風(fēng)濕因子

慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的慢性全身性傳染性疾病，以肝臟損害為主，進一步可轉(zhuǎn)化為肝硬化，肝癌，危害十分嚴重。近年來，國內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)HBV感染者在體內(nèi)存在大量的自身免疫性抗體[1，2]，為探索這些抗體與肝臟損害的關(guān)系，本文對72例慢性乙型病毒性肝炎（CHB）患者、35例乙肝后肝硬化（LC）患者、30例肝癌（HCC）患者血清中的抗核抗體（ANA）、類風(fēng)濕因子（RF）及抗核抗體譜（ENA）進行檢測，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象選取2013年3月-2016年3月福建省立醫(yī)本院收治的137例HBV感染者，其中慢性乙型病毒性肝炎（CHB）72例，男42例，女30例，年齡24～58歲，平均42.5歲；伴HBV感染的肝硬化（LC）35例，男26例，女9例，年齡31～75歲，平均46.4歲；伴HBV感染的原發(fā)性肝癌（HCC）30例，男24例，女6例，年齡34～71歲，平均47.6歲。所有HBVC感染者的診斷均符合《慢性乙型肝炎防治指南》2010版診斷標(biāo)準[3]。對照組為50例來自于本院體檢中心的健康體檢者，均排除其他的自身免疫性疾病，其中男性28例，女性22例，年齡35～55歲，平均39.5歲。

1.2 檢測方法

1.2.1 抗核抗體（ANA）和類風(fēng)濕因子（RF）的檢測ANA檢測采用間接免疫熒光法，試劑購自德國歐蒙公司，操作及結(jié)果判斷嚴格按照說明書執(zhí)行，結(jié)果以組織或細胞內(nèi)出現(xiàn)特征性綠色熒光，血清稀釋度≥1：100為陽性。RF檢測采用速率散射比濁法，檢測儀器為西門子BNⅡ特定蛋白儀，并使用配套試劑。

1.2.2 抗核抗體譜（ENA）的檢測采用免疫印跡法，試劑購自歐蒙公司，檢測以下9種抗原的抗體：nRNP，Sm，SS-A，SS-B，Ro-52，Scl-70，核小體，組蛋白，核糖體P蛋白。

1.2.3 肝功能指標(biāo)及HBV DNA定量檢測采用羅氏全自動生化分析儀和配套試劑檢測丙氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽紅素（DBIL）、谷氨酰氨基轉(zhuǎn)移酶（GGT），ALT、AST、GGT采用速率法檢測，DBIL采用重氮鹽法檢測。HBV DNA定量采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測，檢測儀器為美國ABI公司ViiA 7實時熒光PCR儀，試劑購自中山大學(xué)達安基因股份有限公司。

1．3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準差（x±s）表示，兩組間采用t檢驗。計數(shù)資料用百分數(shù)形式表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 137例HBV感染者自身抗體檢測結(jié)果137例慢性HBV感染者中，至少有一項自身抗體陽性55例，總檢出率為40.1%(55/137)，明顯高于對照組，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。CHB組、LC組、HCC組自身抗體檢出率分別為33.3%(24/72)、48.6%(17/35)、46.7%(14/30)，均顯著明顯高于對照組4%（2/50），比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，（P＜0.05），但三個分組間自身抗體檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 慢性HBV感染者各組自身抗體的檢出率比較[n（%）]

2.2 HBV感染者中檢出的ANA陽性免疫熒光模式構(gòu)成137例HBV感染者中共檢出51例，熒光模式以“顆粒型”和“均質(zhì)型”為主，其中“均質(zhì)型”15例（24.4%），“顆粒型”29例（56.9%），其它核型較少見。見表2。

表2 51例ANA陽性慢性HBV感染者熒光模式構(gòu)成[n（%）]

2.3 HBV感染者中檢出的ANA滴度分布ANA的滴度以1：100為主，并在CHB組中出現(xiàn)1例滴度為1：3200的標(biāo)本。見表3。

表3 51例ANA陽性慢性HBV感染者血清ANA滴度分布情況[n（%）]

2.4 HBV感染者ANA陽性組與ANA陰性組的肝功能指標(biāo)HBV感染者中ANA陽性組4項功能指標(biāo)明顯高于ANA陰性組，兩組結(jié)果經(jīng)t檢驗，P值均小于0.05（P=0.000），結(jié)果差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。見表4。

表4 慢性HBV感染者ANA陽性組與ANA陰性組的肝功能指標(biāo)比較

2.5 HBV感染者自身抗體與HBV DNA的關(guān)系137例慢性HBV感染者中HBV DNA陽性者106例，自身抗體檢出率39.6%（42/106），而HBV DNA陰性者31例，自身抗體檢出率41.9%（13/31），兩組檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.995，P＞0.05）。見表5。

表5 慢性HBV感染者自身抗體與HBV DNA的關(guān)系[n（%）]

3 討論

HBV感染的致病機制目前尚不十分清楚，有研究顯示HBV引起肝組織的損傷并非HBV在肝細胞內(nèi)復(fù)制繁殖直接作用引起的[4，5]，在HBV與肝細胞相互作用的不同進程中，引起機體一系列免疫反應(yīng)造成的病理性免疫損害[6，7]。這種免疫損傷主要包括細胞介導(dǎo)的免疫損傷、免疫復(fù)合物引起的免疫損傷及自身免疫反應(yīng)引起的免疫損傷[8，9]。

慢性HBV感染患者自身抗體檢出率國內(nèi)外文獻報道結(jié)果不盡相同[10，11]，本研究在137例HBV感染者中ANA檢出率為37.2%，ENA檢出率為9.4%，RF檢出率為16.7%，總檢出率為40.1%，HBV感染者總檢出率與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。CHB組、LC組和HCC組三組分別與正常對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在CHB組LC組HCC組三組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。自身抗體檢出率與文獻報道結(jié)果偏高，可能原因：⑴可能與檢測實驗室檢測人員對鏡下熒光強弱的判讀有關(guān)。⑵與收集的病例數(shù)和患者的病程及年齡有關(guān)。在HBV感染者體內(nèi)檢出多種自身抗體，表明在HBV感染后，引發(fā)機體免疫系統(tǒng)紊亂，體內(nèi)出現(xiàn)非特異性自身免疫性抗體。有研究指出，ANA具有早期診斷HCC的價值，ANA會在HCC早期出現(xiàn)血清學(xué)轉(zhuǎn)換，這種過程要顯著高于血清AFP濃度的升高[12]。且在慢性肝炎發(fā)展成肝硬化，再到肝癌的過程中，會伴隨著自身抗體的產(chǎn)生，出現(xiàn)多種自身抗體熒光核型及較寬的自身抗體譜[13-16]。本研究中自身抗體ANA的熒光核型以“顆粒型”和“均質(zhì)型”為主，與文獻報道相同[17]。滴度多為低滴度1：100和1：320。RF是一種抗人或動物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體，HBV感染出現(xiàn)RF升高可能是由于感染后形成的抗原抗體復(fù)合物在體內(nèi)的長期沉積，刺激機體產(chǎn)生變性的IgG因子而使RF升高。

本研究顯示ANA陽性組的HBV感染患者的ALT、AST、TBIL、GGT明顯高于ANA陰性組，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示ANA陽性組肝功能損傷程度較ANA陰性組重，可能是自身抗體與肝細胞相互相互作用引起肝組織損傷，導(dǎo)致轉(zhuǎn)氨酶的釋放。本研究還顯示HBV DNA陽性組和HBV DNA陰性組自身抗體的總檢出率比較，結(jié)果未見明顯差異（P＞0.05）。提示自身抗體的出現(xiàn)與HBV在體內(nèi)復(fù)制水平的高低無關(guān)。

綜上所述，HBV可通過多種途徑損害免疫系統(tǒng)，誘發(fā)自身免疫反應(yīng)，對慢性HBV感染患者檢測自身抗體，有助于了解機體的免疫狀況，對疾病的臨床診療和轉(zhuǎn)歸具有一定的指導(dǎo)作用。

[1]朱柴，沈偉峰，張黎霞，等.自身免疫性抗體檢測在不同肝病中的應(yīng)用[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2013，23（22）：5624-5626.

[2]Unal F，Genel F，Ozgenc F，et al.Immune status and autoantibody formation in children with chronic hepatitis B infection[J].Panminerva Med，2002，44(4)：353-357.

[3]中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會感染病分會.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）[J].中國肝臟病雜志（電子版），2011，3（1）：40-56.

[4]Jadali Z，Alavian SM.Autoimmune diseases co-existing with hepatitis C virus infection[J].Iran J Allergy Asthma Immunol，2010，9 (4)：191-206.

[5]陳龍，羅雄燕，吳鳳霞，等.乙型肝炎病毒與自身免疫病的發(fā)病關(guān)系[J].中華實驗和臨床感染雜志，2011，5（2）：220-223.

[6]范公忍，劉力瑞，胡學(xué)玲，等.乙型肝炎病毒感染者血清肝特異性自身抗體的檢測及臨床意義[J].實用肝臟病雜志，2013，16(5)：421-423.

[7]Gogoi D，Borkakoty B，Biswas D，et al.Activation and Exhaustion of Adaptive Immune Cells in Hepatitis B Infection[J].Viral Immunol，2015，28(7)：348-353.

[8]Cacoub P，Saadoun D，Bourliere M，et al.Hepatitis B virus genotypes and extrahepatic manifestations[J].J Hepatol，2005，43(5)：764-770.

[9]董振芳，李鈿，趙萬輝，等.HBV感染患者自身抗體特征的研究進展[J].醫(yī)學(xué)檢驗與臨床，2010，21（1）：66.

[10]樊啟艷，楊京.慢性HBV感染患者血清自身抗體的檢測與臨床意義[J].現(xiàn)代診斷與治療，2013，8(11)：2490-2492.

[11]魏方，張鵬，范德勝.慢性病毒性肝炎患者抗核抗體檢測的臨床意義[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2013，31(4)：364-366.

[12]Imai H，F(xiàn)uruta K，Landberg G，et al.Autoantibody to DNA topoisomerase II in primary liver cancer[J].Clin Cancer Res，1995，1 (4)：417-424.

[13]范列英，仲人前，孔憲濤，等.慢性肝炎與肝癌患者血清中肝特異性自身抗體的差異分析[J].上海醫(yī)學(xué)，2000，23(5)：279-281.

[14]趙海琳，閆惠平，張海萍.83例原發(fā)性肝癌患者自身抗體檢測結(jié)果分析[J].中國免疫學(xué)雜志，2010，26(12)：1127-1129.

[15]李卓敏，趙丹彤，馮霞，等.原發(fā)性膽汁性肝硬化所致肝癌患者自身抗體特征分析[J].中國實驗診斷學(xué)，2014，18(1)：59-61.

[16]楊朝國，吳磊，王明誼.癌癥患者血清自身抗體的臨床意義探討[J].國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊，2005，26(12)：942-943.

[17]董敏，周厚清，吳瑾濱，等.乙型肝炎病毒感染者血清抗核抗體檢測分析及臨床意義[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2012，27（5）：374-375.

R512.6+2，R446.62

A

1674-1129(2017)04-0522-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.023

2016-12-06；

2017-06-01)