不同抗凝劑及標(biāo)本預(yù)處理方式對(duì)乳酸檢測(cè)結(jié)果的影響

羅浩元，劉集鴻，朱利明，曾濤，邱曉慧

(1、惠州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東惠州516003；2、廣東醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)系，廣東東莞523000)

不同抗凝劑及標(biāo)本預(yù)處理方式對(duì)乳酸檢測(cè)結(jié)果的影響

羅浩元1，劉集鴻1，朱利明1，曾濤1，邱曉慧2

(1、惠州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東惠州516003；2、廣東醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)系，廣東東莞523000)

目的探討乳酸標(biāo)本在不同抗凝劑采血管、不同放置時(shí)間后離心上機(jī)檢測(cè)對(duì)結(jié)果的影響。方法選取惠州市第一人民醫(yī)院健康體檢人群40例，空腹靜脈采血，每例同時(shí)抽取肝素抗凝劑管、無(wú)抗凝劑管、肝素+NaF抗凝劑管各3支，共9支標(biāo)本。從三種不同抗凝劑中各抽取1支標(biāo)本組成一組，分成A、B、C三組，A、B、C組分別室溫放置30min、60min、90min再離心上機(jī)檢測(cè)乳酸濃度。結(jié)果乳酸在肝素抗凝管隨放置時(shí)間的增加，濃度不斷升高，放置30min、60min、90min之間濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=26.95，P＜0.05）；乳酸在無(wú)抗凝管隨放置時(shí)間的增加，乳酸濃度也不斷升高，放置30min、60min、90min之間濃度比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=29.32，P＜0.05）；乳酸在肝素+NaF管中放置30min、60min、90min，濃度略有升高，但之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.83，P＞0.05）。放置30min：三種抗凝劑之間的乳酸濃度無(wú)明顯差異（F=1.97，P＞0.05）；放置60min：肝素抗凝管和無(wú)抗凝管乳酸濃度均比肝素+NaF管高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t肝素抗凝劑/肝素-NaF=19.02，t無(wú)抗凝劑/肝素-NaF=18.33，均P＜0.05）；放置90min：肝素抗凝管和無(wú)抗凝管乳酸濃度繼續(xù)升高，分別與肝素+NaF管比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t肝素抗凝劑/肝素-NaF=27.29，t無(wú)抗凝劑/肝素-NaF=36.97，均P＜0.05）。結(jié)論為保證乳酸結(jié)果的準(zhǔn)確性，標(biāo)本采集后應(yīng)在30min內(nèi)離心并檢測(cè)；肝素+NaF抗凝劑可抑制紅細(xì)胞酵解，能夠提高乳酸檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性。

乳酸；肝素+NaF抗凝劑；分析前質(zhì)量管理

血乳酸作為判斷急性一氧化碳中毒、膿毒血癥、新生兒窒息、嚴(yán)重創(chuàng)傷、急性失血性休克等疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后的重要指標(biāo)，已被廣泛應(yīng)用于臨床[1-3]。乳酸檢測(cè)有酶催化法、化學(xué)氧化法、電化學(xué)法和酶電極感應(yīng)器法，后三種均為化學(xué)法?；瘜W(xué)法操作復(fù)雜、影響因素多，不能自動(dòng)化。酶催化法試劑盒已標(biāo)準(zhǔn)化，具有準(zhǔn)確度高、精密度好、靈敏度高、線性范圍寬、適用于全自動(dòng)生化分析儀等優(yōu)勢(shì)，已被作為臨床乳酸檢測(cè)的常規(guī)方法。既往研究報(bào)道[4]：離體血乳酸標(biāo)本室溫放置會(huì)引起乳酸濃度假性升高，影響乳酸檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，進(jìn)而影響臨床醫(yī)生對(duì)患者病情的判斷。關(guān)于離體乳酸標(biāo)本該怎樣預(yù)處理、多長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)離心檢測(cè)，教科書(shū)及文獻(xiàn)只是籠統(tǒng)地要求盡快分離血漿、盡快檢測(cè)。盡快是多快？并無(wú)統(tǒng)一的時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)。為了保證患者檢測(cè)結(jié)果的可靠性，提高臨床對(duì)使用該項(xiàng)目檢測(cè)報(bào)告的信心，本文研究了乳酸標(biāo)本在不同抗凝劑采血管、不同放置時(shí)間后離心上機(jī)檢測(cè)對(duì)結(jié)果的影響，以便為臨床提供更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 一般材料選取惠州市第一人民醫(yī)院健康體檢人群40例，男、女各20例。年齡20～65歲，平均年齡44.6歲。

1.2 標(biāo)本采集空腹采靜脈血，肝素抗凝劑管、無(wú)抗凝劑管、肝素+NaF抗凝劑管各3支，均采血2ml。采血時(shí)不用壓脈帶，不用力握拳。采集后，肝素抗凝管、無(wú)抗凝管、肝素+NaF抗凝管標(biāo)本分別取1支標(biāo)本組成一組，分成A、B、C、共3組。所有樣本均無(wú)溶血、脂血、黃疸。

1.3 儀器及試劑采用美國(guó)貝克曼公司的DXC800全自動(dòng)生化分析儀，乳酸試劑盒、校準(zhǔn)液、質(zhì)控品均由北京華宇億康公司提供。肝素抗凝管、無(wú)抗凝管、肝素+NaF抗凝管均由廣州陽(yáng)普醫(yī)療科技股份公司。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控在控。

1.4 檢測(cè)方法A、B、C組分別在室溫放置30min、60min、90min后，3000r/min離心5min，立即上機(jī)檢測(cè)血乳酸水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，所有參數(shù)呈正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，三組之間比較采用方差分析，兩組比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 相同抗凝劑條件下不同放置時(shí)間對(duì)乳酸檢測(cè)結(jié)果乳酸在肝素抗凝管隨放置時(shí)間的增加，濃度不斷升高，放置30min、60min、90min之間濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=26.95，P＜0.05）；乳酸在無(wú)抗凝管隨放置時(shí)間的增加，乳酸濃度也不斷升高，放置30min、60min、90min之間濃度比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=29.32，P＜0.05）；肝素+NaF抗凝劑管的乳酸濃度不會(huì)隨著放置時(shí)間的而明顯變化，放置30min、60min、90min之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.83，P＞0.05）。（見(jiàn)表1）

2.2 放置相同時(shí)間條件下不同抗凝劑之間乳酸檢測(cè)結(jié)果放置30min：三種抗凝劑之間的乳酸濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.97，P＞0.05）；放置60min：肝素抗凝管和無(wú)抗凝管乳酸濃度顯著高于肝素+ NaF管，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t肝素抗凝劑/肝素-NaF=19.02，t無(wú)抗凝劑/肝素-NaF=18.33，均P＜0.05）；放置90min：肝素抗凝管和無(wú)抗凝管乳酸濃度分別與肝素+NaF管比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t肝素抗凝劑/肝素-NaF=27.29，t無(wú)抗凝劑/肝素-NaF=36.97，均P＜0.05）（見(jiàn)表1）。

表1 三種真空采血管標(biāo)本放置不同時(shí)間的乳酸濃度（mmol/L）

3 討論

乳酸是葡萄糖無(wú)氧代謝的最終產(chǎn)物，產(chǎn)生于骨骼、肌肉、腦和紅細(xì)胞，主要在肝臟代謝后由腎臟分泌排泄，是體內(nèi)代謝和組織內(nèi)部氧供求關(guān)系失衡的標(biāo)志，正常成人的靜脈血中乳酸含量為0.6～2.2mmol/L，動(dòng)脈血中乳酸水平為靜脈血中水平的1/3～2/3。危重患者由于低灌注與組織細(xì)胞缺氧，使線粒體的氧輸送減少，合成大量乳酸，導(dǎo)致高乳酸血癥。孫鳳蓮等[5]認(rèn)為：如果乳酸水平呈持續(xù)升高趨勢(shì)，患者全身癥狀則呈惡化趨勢(shì)，此時(shí)需要增加血管活性物，或開(kāi)始聯(lián)合使用其它升壓藥物，調(diào)整呼吸機(jī)參數(shù)或通氣方式增加全身氧輸送；若乳酸水平已呈下降趨勢(shì)，可繼續(xù)目前治療，然后血管活性藥物逐漸減量。既往研究報(bào)道[6-8]：重癥膿毒癥患者的高乳酸血癥持續(xù)時(shí)間的長(zhǎng)短與病死率的關(guān)系密切，死亡組的高乳酸血癥時(shí)間顯著長(zhǎng)于存活組，高乳酸血癥時(shí)間≥48h組的病死率高于＜48h組，認(rèn)為血乳酸可作為早期預(yù)測(cè)急診病情Ⅰ、Ⅱ患者病情轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)歸的因子。可見(jiàn)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)乳酸水平對(duì)指導(dǎo)疾病治療、判斷疾病嚴(yán)重程度與預(yù)后有重要臨床意義。

乳酸在臨床應(yīng)用相當(dāng)廣泛，但其檢測(cè)的影響因素較多，不同抗凝劑、時(shí)間和溫度都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果[4]?！度珖?guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第4版推薦乳酸檢測(cè)用肝素+NaF抗凝劑[9]，但文中在標(biāo)本預(yù)處理上和大部分文獻(xiàn)一樣只是籠統(tǒng)地要求盡快分離出血漿、盡快檢測(cè)，離體血乳酸標(biāo)本的檢驗(yàn)前周轉(zhuǎn)時(shí)間（turnaround time，TAT）并沒(méi)有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。在實(shí)際臨床工作過(guò)程中，病房血液標(biāo)本大多在早上6時(shí)開(kāi)始采集，標(biāo)本送到檢驗(yàn)科上機(jī)檢測(cè)時(shí)，至少超過(guò)30min，有的甚至超過(guò)1h。一直以來(lái)，臨床醫(yī)師也反映乳酸結(jié)果偏高，引起醫(yī)師和患者較大的心理壓力。因此，探討使用不同抗凝劑、采血后的標(biāo)本如何進(jìn)行有效的預(yù)處理才能保證乳酸濃度穩(wěn)定對(duì)臨床意義重大。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示：標(biāo)本在室溫放置30min，肝素抗凝劑管、無(wú)抗凝劑管、肝素+NaF抗凝劑管之間的血乳酸濃度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)（F= 1.97，P＞0.05）；肝素+NaF抗凝劑標(biāo)本在室溫分別放置30min、60min、90min，三組之間乳酸濃度比較，差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.83，P＞0.05）。表明使用肝素抗凝血漿或血清標(biāo)本檢測(cè)乳酸，30min時(shí)間節(jié)點(diǎn)可作為本實(shí)驗(yàn)室離體血標(biāo)本的檢驗(yàn)前周轉(zhuǎn)時(shí)間指標(biāo)；同時(shí)證明了肝素+NaF抗凝劑可抑制紅細(xì)胞的酵解，在乳酸檢測(cè)中可以確保臨床檢驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。

肝素+NaF抗凝劑中的氟離子可抑制糖酵解中的烯醇化酶，減少乳酸的形成，但NaF對(duì)部分酶類檢測(cè)項(xiàng)目有干擾及對(duì)酶法測(cè)定的部分項(xiàng)目有影響，應(yīng)用范圍相對(duì)較窄。因此，大部分酶催化法檢測(cè)乳酸的試劑廠商推薦用血清或肝素抗凝標(biāo)本。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝素抗凝劑管、無(wú)抗凝劑管采集的血標(biāo)本在常溫下放置時(shí)間越長(zhǎng)，乳酸濃度越高，室溫放置60min、90min后離心檢測(cè)結(jié)果與放置30min的結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。本研究結(jié)果表明，用肝素抗凝血漿或無(wú)抗凝劑血清檢測(cè)乳酸時(shí)，標(biāo)本的檢驗(yàn)前周轉(zhuǎn)時(shí)間會(huì)直接影響乳酸的檢測(cè)結(jié)果。檢驗(yàn)前周轉(zhuǎn)時(shí)間屬于分析前質(zhì)量管理內(nèi)容，是國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委2015年發(fā)布包括檢驗(yàn)全過(guò)程的15項(xiàng)臨床檢驗(yàn)專業(yè)醫(yī)療質(zhì)量控制指標(biāo)（國(guó)衛(wèi)辦函[2015]252號(hào)）[10]中的指標(biāo)之一。研究報(bào)道：分析前錯(cuò)誤占檢驗(yàn)總錯(cuò)誤的46%～68.2%，分析前質(zhì)量控制會(huì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性[11，12]；只有建立和完善分析前質(zhì)量控制制度，對(duì)樣本的采集、運(yùn)送及保存進(jìn)行科學(xué)、規(guī)范的管理，才能全面提升檢驗(yàn)質(zhì)量[13-15]。因此，加強(qiáng)乳酸標(biāo)本采集、檢驗(yàn)前周轉(zhuǎn)時(shí)間等分析前的質(zhì)量管理，是保證乳酸檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的前提，有助于臨床醫(yī)師做出正確的診斷、治療和預(yù)后判斷。

綜上所述，為保證乳酸檢測(cè)結(jié)果的可靠性，用血清或肝素抗凝標(biāo)本，應(yīng)加強(qiáng)分析前質(zhì)量管理，30min可作為檢驗(yàn)前周轉(zhuǎn)時(shí)間指標(biāo)，適合本實(shí)驗(yàn)室使用，可供同行參考。使用肝素+NaF抗凝劑可抑制紅細(xì)胞酵解，能夠提高乳酸檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性。

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R446.11+2

A

1674-1129(2017)04-0513-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.019

2017-01-19；

2017-05-03)