對(duì)我院血細(xì)胞分析儀復(fù)片規(guī)則驗(yàn)證的探討

徐從瓊，朱麗萍，李慶

(昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南昆明650032)

對(duì)我院血細(xì)胞分析儀復(fù)片規(guī)則驗(yàn)證的探討

徐從瓊，朱麗萍，李慶

(昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南昆明650032)

目的采用Sysmex XE-2100全自動(dòng)血液分析儀對(duì)本院的18條復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行驗(yàn)證，從而提高檢驗(yàn)質(zhì)量及工作效率。方法選取門診和住院包含了體檢、血液科、腫瘤科、產(chǎn)科、新生兒科、呼吸內(nèi)科等共500份樣本經(jīng)Sysmex XE-2100全自動(dòng)血液分析儀分析后立即由推片機(jī)進(jìn)行推片和染色，新生兒科標(biāo)本可手工推片染色。結(jié)果儀器假陰性率為1.59%，真陰性率為80.09%，真陽性率為70.45%，假陽性率為19.91%，推片率為29.8%，白血病漏檢率為0%。本次復(fù)檢的假陰性率為1. 59%，達(dá)到“＜5%假陰性率”的行業(yè)要求。結(jié)論臨床實(shí)驗(yàn)室按規(guī)定定時(shí)為本醫(yī)院制定的復(fù)片規(guī)則進(jìn)行驗(yàn)證，不僅可降低假陽性率而且進(jìn)一步提高了工作效率。

血細(xì)胞分析儀；復(fù)片規(guī)則；顯微鏡鏡檢

血細(xì)胞分析是診斷和輔助診斷白血病、貧血、血小板減少、遺傳性疾病、血液寄生蟲以及了解疾病的進(jìn)展及感染程度的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目[1]。隨著血細(xì)胞自動(dòng)分析儀的普及和不斷改進(jìn)，大大提高了臨床檢查的效率[2]。但是由于儀器的局限性和某些病理變化等干擾因素影響了血細(xì)胞分析準(zhǔn)確性，使得某些情況必須由人工鏡檢來完成[3]。因此，各臨床實(shí)驗(yàn)室有必要根據(jù)自己所用儀器的特點(diǎn)及本室的實(shí)際情況制定出適合本院的血細(xì)胞復(fù)檢和顯微鏡復(fù)片規(guī)則。通過對(duì)本科室已建立的復(fù)片規(guī)則進(jìn)行驗(yàn)證，從而進(jìn)一步完善本科室的復(fù)檢規(guī)則。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑日本Sysmex XE-2100全自動(dòng)血液分析儀及配套質(zhì)控品和配套試劑；SP-1000i自動(dòng)血液學(xué)載片制備裝置，瑞氏-姬姆薩染液為珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供，奧林巴斯顯微鏡(用于血細(xì)胞顯微鏡分析)。儀器設(shè)備操作按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行[4]。

1.2 標(biāo)本收集選取昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床血液室2d(2016年8月29日至30日)門診和住院樣本，其中血液內(nèi)科樣本65例，腫瘤科與移植科樣本30例，外科樣本20例，新生兒科樣本11例，兒科樣本15例，產(chǎn)科樣本35例，呼吸內(nèi)科22例，體檢樣本302例共500份樣本經(jīng)Sysmex XE-2100全自動(dòng)血液分析儀分析后立即由推片機(jī)進(jìn)行推片和染色，新生兒科標(biāo)本可依照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行手工推片染色[5]。

1.3 方法所選500份樣本覆蓋了白細(xì)胞、紅細(xì)胞及血小板方面的異常及直方圖、散點(diǎn)圖異常。由SP-1000i推片機(jī)自動(dòng)推片染色烘干后由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的血液檢驗(yàn)技術(shù)人員進(jìn)行顯微鏡觀察，每份樣本推2份片，每份片分200個(gè)細(xì)胞，記錄結(jié)果。

1.4 涂片陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于血細(xì)胞形態(tài)結(jié)果，只要有一名人員發(fā)現(xiàn)陽性，經(jīng)具有較高職稱和經(jīng)驗(yàn)豐富的人員確認(rèn)后即判斷為陽性[6]。鏡檢結(jié)果符合以下13條中任何一條即為陽性。⑴紅細(xì)胞明顯大小不等（體積相差1倍以上)中空淡染>1/2，淡染區(qū)的紅細(xì)胞多于30%；⑵巨大血小板多于15%；⑶見到血小板凝聚；⑷Dohle小體的粒細(xì)胞>10%；⑸中毒顆粒中性粒細(xì)胞>10%；⑹空泡變性粒細(xì)胞> 10%；⑺原始和幼稚細(xì)胞≥1%；⑻早幼粒細(xì)胞和中幼粒細(xì)胞≥1%；⑼晚幼粒細(xì)胞≥2%；⑽異型淋巴細(xì)胞>5%；⑾NRBC≥1%；⑿漿細(xì)胞≥1%；⒀發(fā)現(xiàn)瘧原蟲。

2 結(jié)果

儀器假陰性率為1.59%，真陰性率為80.09%，真陽性率為70.45%，假陽性率為19.91%，推片率為29.8%，白血病漏檢率為0%。本次復(fù)檢的假陰性率為1.59%，達(dá)到“＜5%假陰性率”的行業(yè)要求。為了進(jìn)一步提高復(fù)片組的工作效率和質(zhì)量，建議可以從以下幾個(gè)方面進(jìn)行下一步改進(jìn)：假陰性樣本為紅細(xì)胞形態(tài)異常。與紅細(xì)胞形態(tài)有關(guān)的規(guī)則有“RDW＞22%或無結(jié)果”、“NRBC flag”、“雙峰紅細(xì)胞或多峰紅細(xì)胞”、“MCV＞120fl或＜60fl”等四條，因假陽性率在可接受范圍，可暫為觀察。復(fù)片樣本報(bào)警信息總數(shù)統(tǒng)計(jì)見表1。

表1 復(fù)片樣本報(bào)警信息總數(shù)統(tǒng)計(jì)

樣本報(bào)警信息突出的是Lymph%，在19次報(bào)警信息中有15次為Lymph%單項(xiàng)報(bào)警，有4次報(bào)警為兒童樣本，故復(fù)片組根據(jù)第三次復(fù)片規(guī)則驗(yàn)證的結(jié)論，對(duì)復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行修改，將“Lym%首次結(jié)果＞50%”修改為“WBC＞10×109/L且Lym%首次結(jié)果＞50%”。

“No diff or incomplete diff”報(bào)警9次，其中有3次樣本結(jié)果為空值，經(jīng)檢查均為樣本量少所致，經(jīng)手動(dòng)進(jìn)樣復(fù)檢后結(jié)果為正常結(jié)果。而復(fù)檢規(guī)則要求“白細(xì)胞分類無結(jié)果或結(jié)果不全”時(shí)須涂片鏡檢并分類，沒有考慮到儀器因樣本量不夠上機(jī)出現(xiàn)報(bào)警的情況，而使用同一編號(hào)重新復(fù)檢“No diff or incomplete diff”時(shí)報(bào)警信息亦會(huì)出現(xiàn)，因此，此條“白細(xì)胞分類無結(jié)果或結(jié)果不全”的處理應(yīng)改為：⑴排除儀器故障及樣本不合格。⑵如樣本量少（主要針對(duì)兒科和新生兒科）重新編號(hào)復(fù)檢時(shí)，應(yīng)該同時(shí)刪除儀器及LIS所有信息后重測。⑶如樣本凝集或有凝塊，退回并通知重新采血復(fù)查。

3 討論

3.1 根據(jù)日常工作和此次復(fù)片規(guī)則驗(yàn)證結(jié)果在18條復(fù)片規(guī)則基礎(chǔ)上進(jìn)行適當(dāng)修改，將第11條Lym%首次結(jié)果＞50%”修改為“WBC＞10×109/L且Lym%首次結(jié)果＞50%”，理由是此條復(fù)片規(guī)則假陽性率太高，修改后不僅降低假陽性率而且進(jìn)一步提高了工作效率。

3.2 原有規(guī)則“新生兒首次樣本涂片鏡檢”對(duì)儀器是盲點(diǎn)，無操作性，新生兒樣本除（Lymph%）同樣適用復(fù)檢規(guī)則。

3.3 雖然“NRBC flag”、“WBC unreliability flag”、“Atypical/Variant lymphs(-)”在假陽性率也占到一定比例，但是這些原則性規(guī)則，不能修改。

3.3.1 我院有核紅細(xì)胞報(bào)警主要來自兒科、血液科及腎內(nèi)科等幾個(gè)科室，多為真陽性，原因是正常新生兒或幼兒血液中存在有核紅細(xì)胞，成人體內(nèi)出現(xiàn)有核紅細(xì)胞則多數(shù)與溶血性貧血、急慢性白血病及感染等疾病有關(guān)[7]。

3.3.2 通過在日常工作中和對(duì)復(fù)片規(guī)則的驗(yàn)證中發(fā)現(xiàn)儀器對(duì)單核細(xì)胞和異型淋巴細(xì)胞不容易區(qū)別[8]。在形成的二維散點(diǎn)圖上，異型淋巴細(xì)胞位于正常淋巴細(xì)胞上方，形成一個(gè)向上的拖尾形狀，由于異型淋巴細(xì)胞的體積、顆粒及染色質(zhì)與大淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞近似，儀器在鑒別此類細(xì)胞形態(tài)上存在困難，導(dǎo)致異型淋巴的報(bào)警敏感勝高，而特異性低。而提示異淋報(bào)警主要是OTHER值及異淋Q-Flags報(bào)警[9]。在各種患兒發(fā)熱疾病中，異型淋巴細(xì)胞增高是病毒感染的經(jīng)典標(biāo)志。血細(xì)胞分析儀對(duì)異型淋巴細(xì)胞形態(tài)學(xué)識(shí)別能力差，只對(duì)異型淋巴細(xì)胞有提示，分類顯示單核細(xì)胞比例增高[3]，因此當(dāng)儀器報(bào)警Atypical/Variant lymphs(-)或MO＞15%時(shí)一定要顯微鏡復(fù)檢，觀察有無異型淋巴細(xì)胞的存在及比例，對(duì)臨床醫(yī)生初步判斷患兒為病毒感染或細(xì)菌感染提供重要依據(jù)[2]。

3.3.3 兒科、婦科、WBC受其影響會(huì)顯著降低，常使用刺激造血系統(tǒng)的藥物會(huì)造成未成熟顆粒水平明顯上升；兒科患者使用激素較多，產(chǎn)科婦女在孕早期造血活躍，導(dǎo)致儀器報(bào)警“Immature granulocyte flag”占有一定比例[10]。

3.4 腫瘤患者治療時(shí)經(jīng)常檢查WBC數(shù)、PLT數(shù)，來調(diào)整用藥劑量或考慮是否停藥。由于化療藥物對(duì)細(xì)胞膜有影響，易造成直方圖異常，報(bào)警提示增多，使復(fù)檢率增高，增加了檢驗(yàn)人員工作量；為了降低復(fù)檢率，除醫(yī)生要求涂片鏡檢外可不復(fù)檢[3]。

3.5 大部分血細(xì)胞分析儀血小板計(jì)數(shù)通常為電阻抗原理，依據(jù)細(xì)胞體積大小形成脈沖，從而得到計(jì)數(shù)結(jié)果，其干擾因素較多，小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片等體積相當(dāng)?shù)某煞侄伎赡軐?duì)血小板計(jì)數(shù)形成干擾，造成計(jì)數(shù)偏高[11]。對(duì)于以大血小板為主和血小板聚集的患者，會(huì)導(dǎo)致血小板儀器計(jì)數(shù)偏低。

綜上所述，儀器只能作為一個(gè)篩選的手段，必要時(shí)仍需人工顯微鏡檢查，加之復(fù)片規(guī)則的輔助最終才能為臨床提供更準(zhǔn)確的報(bào)告。在血涂片復(fù)檢規(guī)則的臨床應(yīng)用過程中，注意收集、整理發(fā)現(xiàn)問題，及時(shí)對(duì)復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行修改和完善，總結(jié)出更有效的血細(xì)胞分析儀血涂片復(fù)檢規(guī)則，以提高血細(xì)胞分析質(zhì)量和工作效率[12]。

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R446.11+1

A

1674-1129(2017)04-0508-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.017

2016-12-06；

2017-06-20)

朱麗萍