• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黃芪六一湯對(duì)2型糖尿病治療效果的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究

    2017-08-10 04:22:05常越徐姣閆嵩劉振鵬任偉超張開(kāi)雪
    中國(guó)中藥雜志 2017年14期
    關(guān)鍵詞:黃芪測(cè)序分類

    常越 徐姣 閆嵩 劉振鵬 任偉超 張開(kāi)雪 馬偉 劉秀波

    [摘要]該實(shí)驗(yàn)采用Illumina測(cè)序平臺(tái)對(duì)大鼠胰腺進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行表達(dá)量統(tǒng)計(jì),分析空白組、模型組、黃芪六一湯組三者之間的表達(dá)差異關(guān)系,探究黃芪六一湯對(duì)2型糖尿病的治療效果,并探討其作用機(jī)制。結(jié)果表明,通過(guò)eggNOG對(duì)基因進(jìn)行分類分析,其中有2425%的基因?qū)傥粗δ茴悾瑸樽畲蠓诸悊卧?,其余依次為能量轉(zhuǎn)換類、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝類、核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝類、碳水化合物轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝類、輔酶轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝類、脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝類等;根據(jù)KEGG富集分析,黃芪六一湯可能在環(huán)境信息處理、細(xì)胞過(guò)程、生物系統(tǒng)、人類疾病這4類代謝通路上對(duì)2型糖尿病起到治療作用。研究表明,黃芪六一湯能顯著改善2型糖尿病大鼠空腹血糖、糖化血紅蛋白。

    [關(guān)鍵詞]黃芪六一湯; 2型糖尿病; 轉(zhuǎn)錄組學(xué); eggNOG分析; KEGG富集分析

    [Abstract]In this study, Illumina sequencing platform was applied in sequencing rat pancreas, counting expression of target points, analyzing expression differences among blank group, model group and Huangqi Liuyi decoction group and exploring the therapeutic effect and mechanism of Huangqi Liuyi decoction on type 2 diabetes mellitus According to the result, 2425% of these genes belonged to the unknown functional class, which was the largest classification unit according to the classification analysis of genes by eggNOG The rest were classified as energy conversion, amino acid transport and metabolism, nucleotide transport and metabolism, carbohydrate transport and metabolism, coenzyme transport and metabolism, and lipid transport and metabolism, etcHuangqi Liuyi decoction may play a therapeutic role in the treatment of type 2 diabetes mellitus through four metabolic pathways, namely environmental information processing, cellular process, organismal system and human diseases according to KEGG enrichment analysis This study shows that, Huangqi Liuyi decoction can significantly improve the fasting blood glucose and glycosylated hemoglobin in type 2 diabetic rats

    [Key words]Huangqi Liuyi decoction; type 2 diabetes mellitus; transcriptomics; eggNOG analysis; KEGG enrichment analysis

    糖尿病是一種以失控的高血糖為主要表現(xiàn),多種并發(fā)癥為主要損害的一種代謝性疾病,病程長(zhǎng)且復(fù)雜,難以根治,已嚴(yán)重影響人們的健康生活[1]。中藥及中藥復(fù)方對(duì)糖尿病起到了治療作用,常用中藥有人參、黃芪、地黃、甘草等[2]。其中,黃芪多糖可抑制由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力引起的活化轉(zhuǎn)錄因子的活性,增加2型糖尿病大鼠肝臟組織中的AMPK磷酸化水平,降低蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B) 的過(guò)表達(dá),以提高大鼠胰島素敏感性,增加KKAy大鼠對(duì)高血糖癥和口服葡萄糖的耐受性[36]。Honda K等[7]將減少血漿胰島素濃度作為改善胰島素抵抗的指標(biāo),并通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明甘草總黃酮明顯降低血漿胰島素濃度,因此推測(cè)甘草總黃酮能改善胰島素抵抗。黃芪六一湯由黃芪、炙甘草組成,具有補(bǔ)氣、生津等功效。轉(zhuǎn)錄組(transcriptome)是指特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下全部表達(dá)的基因總和,代表了每一個(gè)基因的身份和表達(dá)水平,轉(zhuǎn)錄組測(cè)序能全面的地揭示生物個(gè)體在特定組織和特定時(shí)期的全局基因的表達(dá)情況[8]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)黃芪六一湯對(duì)2型糖尿病治療效果轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究,表明黃芪六一湯可能通過(guò)改善新陳代謝通路從而對(duì)2型糖尿病起到治療作用。

    1材料

    11動(dòng)物選用SPF級(jí)雄性大鼠40只,體質(zhì)量(200±20) g,鼠齡6~8周(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全評(píng)價(jià)中心),許可證號(hào)SCXK(黑)2013004。動(dòng)物飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)室溫度(22~24 ℃),濕度(45%~55%),日光照12 h,動(dòng)物分籠飼養(yǎng)(10只/籠),自由覓食飲水。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物處置符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理標(biāo)準(zhǔn)。

    122型糖尿病大鼠模型構(gòu)建目前得到2型糖尿病大鼠的方法有2種,第1種是直接購(gòu)買基因敲除的大鼠,第2種就是國(guó)內(nèi)廣大研究人員普遍采用的造模方法[9],即采用鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射獲得2型糖尿病大鼠。綜合實(shí)驗(yàn)技術(shù)熟練程度、資金等方面因素,采用STZ腹腔注射的方法復(fù)制2型糖尿病大鼠模型。

    取大鼠40只,適應(yīng)飼養(yǎng)7 d后,隨機(jī)選取10只作為空白對(duì)照組,空白對(duì)照組給予普通飼料,其余30只大鼠給予高糖高脂飼料3周。3周后,大鼠禁食12 h后腹腔注射檸檬酸檸檬酸鈉緩沖液(pH 45)溶解的STZ(40 mg·kg-1),配置STZ后冰浴并快速注射,以免藥物降解藥效失效??瞻讓?duì)照組腹腔注射等劑量的檸檬酸檸檬酸鈉緩沖液。末次給藥72 h后禁食12 h檢測(cè)血糖,將血糖≥167 mmol·L-1確定為糖尿病大鼠,共得到造模成功大鼠26只。

    13分組及干預(yù)方法選取造模成功大鼠中的20只并隨機(jī)分成2組。分為模型對(duì)照組、黃芪六一湯組??瞻讓?duì)照組、模型對(duì)照組:造模后第7天開(kāi)始給予生理鹽水10 mL·kg-1·d-1;黃芪六一湯組:造模后第7天按照鼠人折算劑量分別以不同藥物灌胃,灌服中藥黃芪六一湯(生藥1260 g·kg-1),1次/d;給藥量=人體給藥量×0018×20。大鼠每周稱重1次,按照體重調(diào)整灌胃劑量,連續(xù)灌胃4周。

    本實(shí)驗(yàn)選擇實(shí)驗(yàn)4周后空白組、模型組、黃芪六一湯組大鼠胰腺作為轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?qū)嶒?yàn)材料。大鼠末次給藥后禁食12 h,用20%烏拉坦溶液對(duì)大鼠腹腔注射麻醉。麻醉后,快速取胰腺組織,鋁箔包裹并迅速凍存于液氮中,然后凍存于-80 ℃冰箱。

    14黃芪六一湯的制備工藝取黃芪飲片600 g和甘草飲片100 g,加水2 L,浸泡2 h,煎煮1 h,濾過(guò),回收濾液;藥渣加水2 L,煎煮05 h,濾過(guò),棄去濾渣,合并濾液,減壓濃縮至700 mL。藥液置于棕色瓶中,密封儲(chǔ)存于4 ℃冰箱備用。

    2方法

    21大鼠胰腺總RNA的提取與質(zhì)檢采用天恩澤柱式動(dòng)物RNAout試劑盒(CAT#:71201)對(duì)樣品進(jìn)行RNA提取。采用15%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)獲得的總RNA完整性檢測(cè),表明RNA條帶完整,無(wú)降解。利用紫外分光光度計(jì)對(duì)RNA進(jìn)行定量檢測(cè),達(dá)到要求濃度,且A260/A280大于18。

    22轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)構(gòu)建第一步:mRNA的純化,采用Illumina的TruSeq Stranded mRNA LT Sample Prep Kit。針對(duì)真核生物mRNA特有的poly A結(jié)構(gòu),利用oligo dT磁珠捕獲mRNA。

    第二步:反轉(zhuǎn)錄及cDNA文庫(kù)構(gòu)建,采用Illumina的TruSeq Stranded mRNA LT Sample Prep Kit。

    第三步:cDNA文庫(kù)構(gòu)建,首先是3′端加A,在這一過(guò)程中,DNA的3′端會(huì)單獨(dú)加上一個(gè)A堿基,以防止DNA片段的自連,同時(shí)保證DNA與3′端有一個(gè)突出T堿基的測(cè)序接頭相連,而后加一個(gè)有特異性標(biāo)簽的接頭,此過(guò)程是為了讓DNA最終雜交到Flow Cell上。

    23cDNA文庫(kù)質(zhì)檢與測(cè)序首先取1 μL cDNA文庫(kù),采用Agilent Bioanalyzer 2100對(duì)構(gòu)建的文庫(kù)進(jìn)行質(zhì)檢。利用QuantiT PicoGreen dsDNA Assay Kit在Promega QuantiFluor上對(duì)文庫(kù)進(jìn)行定量分析。對(duì)合格cDNA文庫(kù),進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。測(cè)序由上海派森諾生物科技有限公司完成,采用Illumina NextSeq 500 High Output Kit(300cycles)測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行2×150 bp的雙端測(cè)序。測(cè)序樣品為大鼠胰腺RNASeq文庫(kù)。

    24原始數(shù)據(jù)過(guò)濾及質(zhì)控分析符合要求的測(cè)序數(shù)據(jù)序列經(jīng)過(guò)進(jìn)一步除去低質(zhì)量序列和接頭序列,減少對(duì)后續(xù)分析的影響。數(shù)據(jù)過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)為:①去除Reads 接頭序列;②從Reads 3′端向5′端去掉平均質(zhì)量小于Q20的部分(5 bp窗口);③去除最終長(zhǎng)度小于50 bp的序列;④序列中沒(méi)有不確定堿基。原始數(shù)據(jù)通過(guò)質(zhì)量過(guò)濾后,通過(guò)FastQ(http://www. bioinformatics. babraham. ac. uk/projects/fastqc/)進(jìn)行質(zhì)量過(guò)濾質(zhì)控分析。

    3結(jié)果與分析

    31大鼠胰腺轉(zhuǎn)錄組原始數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)樣品通過(guò)上機(jī)測(cè)序,得到的最原始的測(cè)序數(shù)據(jù)以FASTQ格式的形式儲(chǔ)存。下機(jī)原始數(shù)據(jù)每個(gè)樣本的Reads數(shù)以及數(shù)據(jù)總量見(jiàn)表1。

    32大鼠胰腺轉(zhuǎn)錄組原始數(shù)據(jù)過(guò)濾統(tǒng)計(jì)對(duì)大鼠胰腺轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分別統(tǒng)計(jì),統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)質(zhì)量過(guò)濾質(zhì)控結(jié)果分析可知,本次測(cè)序過(guò)濾后的數(shù)據(jù)平均質(zhì)量很高,基本分布在Q>28區(qū)域。絕大部分Reads質(zhì)量都分布在35左右,說(shuō)明整體Reads平均質(zhì)量都很高。一般而言5′端堿基的ATGC百分比會(huì)有所波動(dòng),中間和3′端堿基比較穩(wěn)定,A與T大致相等,C與G大致相等。曲線形狀的偏差較小,本次實(shí)驗(yàn)理論值與實(shí)測(cè)值符合較好。

    33比對(duì)到基因組(Mapping)參照基因組:Rattus_norvegicusRnor_60dnatoplevelfa (ftp://ftpensemblorg/pub/release80/fasta/rattus_norvegicus/dna/)。分析軟件:bowtie2/tophat2 (http://tophatcbcbumdedu/)。樣本比對(duì)到基因組上的數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

    34eggNOG分析eggNOG(evolutionary genealogy of genes: nonsupervised orthologous decoctions) 是一個(gè)包含943種細(xì)菌,69種古生菌和121個(gè)真核生物的直系同源蛋白質(zhì)聚類數(shù)據(jù)庫(kù)[1011]。根據(jù)先前的研究,蛋白質(zhì)可分為25個(gè)功能類別。eggNOG數(shù)據(jù)庫(kù)包括蛋白質(zhì)直系同源簇(COGs)數(shù)據(jù)庫(kù)和KOG數(shù)據(jù)庫(kù)。將得到的Unigene進(jìn)行KOG注釋后,歸入適當(dāng)?shù)腒OG簇,由此對(duì)基因組的所有基因功能做分類統(tǒng)計(jì),從宏觀上認(rèn)識(shí)該物種的基因功能分布特征。

    經(jīng)對(duì)大鼠轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)處理,共有3 777條unigene(9999%),eggNOG共分26類。其中“未知功能”(916條,占比2425%);僅一般功能預(yù)測(cè)(619條,占比1639%)在eggNOG中是2個(gè)最大的分類單元?!胺g后修飾,蛋白轉(zhuǎn)換,分子伴侶”(334條,占比884%);“信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制”(301條,占比797%);“翻譯,核糖體結(jié)構(gòu)和生物轉(zhuǎn)化”(210條,占比556%)?!凹?xì)胞運(yùn)動(dòng)”(5條,占比013%),“真核細(xì)胞外結(jié)構(gòu)”(3條,占比008%),“核結(jié)構(gòu)”(1條,占比003%)有最少的直系同源基因,見(jiàn)圖1。

    35KEGG富集分析京都基因與基因組百科全書(shū)庫(kù)數(shù)據(jù)庫(kù)(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)是系統(tǒng)分析基因功能和基因組信息的數(shù)據(jù)庫(kù),它整合了基因組學(xué)、生物化學(xué)以及功能組學(xué)的信息[12]。KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)有助于研究者把基因及表達(dá)信息作為一個(gè)整體的網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行研究。KEGG通路分類富集分析圖見(jiàn)圖2。

    在模型組與空白組比較中,在代謝途徑分類中:參與脂類代謝的500個(gè)基因中含有43個(gè)差異表達(dá)基因(P=508×10-16);參與Overview的227個(gè)基因中含有29個(gè)差異表達(dá)基因(P=141×10-15);參與氨基酸代謝的352個(gè)基因中含有29個(gè)差異表達(dá)基因(P=982×10-11);參與碳水化合物代謝的417個(gè)基因中含有30個(gè)差異表達(dá)基因(P=122×10-9);參與其他氨基酸代謝的98個(gè)基因中含有9個(gè)差異表達(dá)基因(P=0000 137);參與多糖生物合成與代謝的276個(gè)基因中含有14個(gè)差異表達(dá)基因(P=0001 227);參與異源物質(zhì)的降解和代謝的156個(gè)基因中含有9個(gè)差異表達(dá)基因(P=0003 845);參與輔助因子和維生素代謝的174個(gè)基因中含有9個(gè)差異表達(dá)基因(P=0007 753);參與能量代謝的191個(gè)基因中含有10個(gè)差異表達(dá)基因(P=0004 726)。在遺傳信息處理分類中:參與折疊、分類和降解的408個(gè)基因中含有14個(gè)差異表達(dá)基因(P=0032 386)。在環(huán)境信息處理分類中:參與信號(hào)分子與互作的659個(gè)基因中含有20個(gè)差異表達(dá)基因(P=0038 102)。在細(xì)胞過(guò)程分類中:參與轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝的507個(gè)基因中含有22個(gè)差異表達(dá)基因(P=0000 503)。在生物系統(tǒng)分類中:參與內(nèi)分泌系統(tǒng)的956個(gè)基因中含有44個(gè)差異表達(dá)基因(P=173×10-7);參與消化系統(tǒng)的441個(gè)基因中含有32個(gè)差異表達(dá)基因(P=271×10-10);參與環(huán)境適應(yīng)的107個(gè)基因中含有7個(gè)差異表達(dá)基因(P=0005 281)。在人類疾病分類中:參與免疫系統(tǒng)疾病的390個(gè)基因中含有28個(gè)差異表達(dá)基因(P=461×10-9);參與心血管疾病的237個(gè)基因中含有9個(gè)差異表達(dá)基因(P=0045 857);參與內(nèi)分泌代謝途徑的236個(gè)基因中含有18個(gè)差異表達(dá)基因(P=141×10-6);參與傳染性疾病的1 983個(gè)基因中含有56個(gè)差異表達(dá)基因(P=0003 92)。

    黃芪六一湯組與空白組比較,在新陳代謝分類中:參與脂類代謝的500個(gè)基因中含有22個(gè)差異表達(dá)基因(P=0000 944 667)。在環(huán)境信息處理分類中:參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的2 114個(gè)基因中含有129個(gè)差異表達(dá)基因(P=714×10-30);參與信號(hào)分子交互的659個(gè)基因中含有58個(gè)差異表達(dá)基因(P=172×10-20)。在細(xì)胞過(guò)程分類中:參與運(yùn)輸和分解代謝的507個(gè)基因中含有27個(gè)差異表達(dá)基因(P=104×10-5);參與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的167個(gè)基因中含有13個(gè)差異表達(dá)基因(P=532×10-5);參與細(xì)胞間通信的384個(gè)基因中含有19個(gè)差異表達(dá)基因(P=0000 522 065)。在生物系統(tǒng)分類中:參與免疫系統(tǒng)的1 147個(gè)基因中含有125個(gè)差異表達(dá)基因(P=292×10-55);參與內(nèi)分泌系統(tǒng)的956個(gè)基因中含有63個(gè)差異表達(dá)基因(P=639×10-16);參與消化系統(tǒng)的441個(gè)基因中含有34個(gè)差異表達(dá)基因(P=758×10-11);參與發(fā)育的222個(gè)基因中含有17個(gè)差異表達(dá)基因(P=488×10-6);參與環(huán)境適應(yīng)的107個(gè)基因中含有9個(gè)差異表達(dá)基因(P=0000 420 574);參與排泄系統(tǒng)的149個(gè)基因中含有9個(gè)差異表達(dá)基因(P=0004 249 559);參與循環(huán)系統(tǒng)的277個(gè)基因中含有13個(gè)差異表達(dá)基因(P=0005 901 147)。在人類疾病分類中:參與感染性疾病的1 983個(gè)基因中含有193個(gè)差異表達(dá)基因(P=242×10-81);參與免疫疾病的390個(gè)基因中含有57個(gè)差異表達(dá)基因(P=219×10-31);參與內(nèi)分泌代謝疾病的236個(gè)基因中含有24個(gè)差異表達(dá)基因(P=203×10-10);參與癌癥的1 557個(gè)基因中含有69個(gè)差異表達(dá)基因(P=262×10-9);參與心血管疾病的237個(gè)基因中含有23個(gè)差異表達(dá)基因(P=122×10-9)。

    黃芪六一湯組與模型組比較,在新陳代謝分類中:參與Overview的227個(gè)基因中含有45個(gè)差異表達(dá)基因(P=6219 17×10-28),參與脂類代謝的500個(gè)基因中含有50個(gè)差異表達(dá)基因(P=260×10-17),參與糖代謝的417個(gè)基因中含有44個(gè)差異表達(dá)基因(P=323×10-16),參與氨基酸代謝的352個(gè)基因中含有35個(gè)差異表達(dá)基因(P=216×10-12),參與外來(lái)物質(zhì)的降解和代謝的156個(gè)基因中含有19個(gè)差異表達(dá)基因(P=931×10-9),參與其他氨基酸代謝的98個(gè)基因中含有14個(gè)差異表達(dá)基因(P=112×10-7),參與能量代謝的191個(gè)基因中含有15個(gè)差異表達(dá)基因(P=744×10-5),參與其他次生代謝產(chǎn)物的生物合成的40個(gè)基因中含有5個(gè)差異表達(dá)基因(P=0002 761 753)。在環(huán)境信息處理分類中:參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的2 114個(gè)基因中含有109個(gè)差異表達(dá)基因(P=304×10-14),參與信號(hào)分子相互作用的659個(gè)基因中含有43個(gè)差異表達(dá)基因(P=565×10-9)。在細(xì)胞過(guò)程分類中:參與轉(zhuǎn)運(yùn)和分解代謝的507個(gè)基因中含有35個(gè)差異表達(dá)基因(P=392×10-8),參與細(xì)胞通訊的384個(gè)基因中含有18個(gè)差異表達(dá)基因(P=0006 641 926),參與細(xì)胞移動(dòng)性的167個(gè)基因中含有10個(gè)差異表達(dá)基因(P=0008 067 433)。在生物系統(tǒng)分類中:參與免疫系統(tǒng)的1147個(gè)基因中含有97個(gè)差異表達(dá)基因(P=200×10-27),參與內(nèi)分泌系統(tǒng)的956個(gè)基因中含有68個(gè)差異表達(dá)基因(P=216×10-15),參與消化系統(tǒng)441個(gè)基因中含有33個(gè)差異表達(dá)基因(P=142×10-8),參與環(huán)境適應(yīng)性的107個(gè)基因中含有13個(gè)差異表達(dá)基因(P=211×10-6),參與發(fā)育的222個(gè)基因中含有14個(gè)差異表達(dá)基因(P=0001 170 584)。在人類疾病分類中:參與傳染性疾病的1 983個(gè)基因中含有182個(gè)差異表達(dá)基因(P=125×10-59),參與免疫系統(tǒng)疾病的390個(gè)基因中含有35個(gè)差異表達(dá)基因(P=394×10-11),參與內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)疾病的236個(gè)基因中含有23個(gè)差異表達(dá)基因(P=198×10-8),參與癌癥的1 557個(gè)基因中含有73個(gè)差異表達(dá)基因(P=561×10-8),參與心血管疾病的237個(gè)基因中含有20個(gè)差異表達(dá)基因(P=165×10-6)。

    4結(jié)論與討論

    通過(guò)對(duì)本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異基因eggNOG分析后發(fā)現(xiàn),“未知功能”分類所占比例最高,達(dá)到檢測(cè)基因總數(shù)的2425%,推斷可能是誘發(fā)糖尿病致病的未知基因。值得注意的是,“表皮生長(zhǎng)因子受體”、“氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝”、“核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝”、“碳水化合物轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝”、“輔酶轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝”、“脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝”也同樣有可能直接或間接影響2型糖尿病發(fā)生與發(fā)展。在糖代謝過(guò)程中,除了葡萄糖,果糖和甘露糖在糖尿病患者和空腹血糖異常人中含量也較高。當(dāng)肝果糖代謝受到損傷,會(huì)中斷果糖的轉(zhuǎn)運(yùn),作用于多元醇通路可能導(dǎo)致血清果糖的增量。血清果糖的升高可能是誘發(fā)胰島素抵抗的原因之一,可能反過(guò)來(lái)影響葡萄糖代謝。在氨基酸代謝過(guò)程中:國(guó)外研究人員通過(guò)嵌入式病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)3種支鏈氨基酸、2種芳香族氨基酸、酪氨酸和苯丙氨酸可作為健康人發(fā)展成糖尿病患者預(yù)測(cè)的重要指標(biāo)[13]。研究人員通過(guò)橫斷面調(diào)查還發(fā)現(xiàn)α羥基丁酸、丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、谷氨酰胺支鏈氨基酸在糖尿病患者中顯著升高[14]。在脂肪酸代謝過(guò)程中:目前,脂肪酸已為獨(dú)立預(yù)測(cè)糖尿病發(fā)展的因素,通過(guò)大量的脂肪溶解和游離脂肪酸增多(Randle cycle假說(shuō))、細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)衍生物的積累(如甘油二酯)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎癥和線粒體功能障礙,進(jìn)而影響胰島素作用機(jī)制[15]。

    根據(jù)KEGG富集分析,模型組與空白組比較的顯著差異表達(dá)基因主要集中在新陳代謝、生物系統(tǒng)、人類疾病分類上;黃芪六一湯組與空白組比較的顯著差異表達(dá)基因主要集中在環(huán)境信息處理、細(xì)胞過(guò)程、生物系統(tǒng)、人類疾病分類上;黃芪六一湯組與模型組比較的顯著差異表達(dá)基因主要集中在新陳代謝、環(huán)境信息處理、細(xì)胞過(guò)程、生物系統(tǒng)、人類疾病分類上。對(duì)各組間KEGG富集分析圖分析,圖2中B與C顯著差異表達(dá)基因在環(huán)境信息處理、細(xì)胞過(guò)程、生物系統(tǒng)、人類疾病分類上的總體趨勢(shì)較為接近。但與A圖中這3類的總體趨勢(shì)差異較大。據(jù)此推測(cè),黃芪六一湯可能在環(huán)境信息處理、細(xì)胞過(guò)程、生物系統(tǒng)、人類疾病這4類代謝通路上對(duì)2型糖尿病起到治療作用。在新陳代謝分類上,黃芪六一湯組的總體趨勢(shì)介于空白組與模型組之間,表明黃芪六一湯可能通過(guò)改善新陳代謝通路從而對(duì)2型糖尿病起到治療作用。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1]鄭麗,徐濤糖尿病研究進(jìn)展[J]生命科學(xué),2012,7(24):606

    [2]陳吉生,鄭聰中藥治療糖尿病及其并發(fā)癥的應(yīng)用分析[J]中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(23):276

    [3]陳雪輝,魏學(xué)娟,王濤,等黃芪多糖對(duì)大鼠胰島素敏感性和脂肪細(xì)胞因子的影響[J]新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2013,30(5):356

    [4]Liu M, Wu K, Mao X, et al Astragalus polysaccharide improves insulin sensitivity in KKAy mice: regulation of PKB/GLUT4 signaling in skeletal muscle [J] J Ethnopharmacol, 2010, 127(1): 32

    [5]Wang N, Zhang D L, Mao X Q, et al Astragalus polysaccharides decreased the expression of PTP1B through relieving ER stress induced activation of ATF6 in a rat model of type 2 diabetes [J] Mol Cell Endocrinol, 2009, 307(1): 89

    [6]吳德紅,王鳳杰,鄧娟,等黃芪多糖對(duì)2型糖尿病大鼠肝臟 AMPK 蘇氨酸磷酸化的影響 [J]微循環(huán)學(xué)雜志,2009,19(3):1

    [7]Honda K, Kamisoyama H, Tominaga Y, et al The molecular mechanism underlying the reduction in abdominal fat accumulation by licorice flavonoid oil in high fat dietinduced obese rats[J] Anim Sci J, 2009, 80(5): 562

    [8]田英芳,張曉政,周錦龍轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究進(jìn)展及應(yīng)用[J]中學(xué)生物教學(xué),2013,12(1):29

    [9]韋立順,許忠新,田河林,等鏈脲佐菌素致小鼠糖尿病模型的建立與評(píng)價(jià)[J]中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2013,17(5):806

    [10]Tatusov R L, Fedorova N D, Jackson J D, et al The COG database: an updated version includes eukaryotes[J] Bmc Bioinformatics, 2003, 4(16): 41

    [11]Powell S, Szklarczyk D, Trachana K, et al eggNOG v30: orthologous groups covering 1133 organisms at 41 different taxonomic ranges[J] Nucl Acids Res, 2012, 40: 284

    [12]Kanehisa M, Goto S, Kawashima S, et al The KEGG resource for deciphering the genome[J] Nucl Acids Res, 2004, 32:277

    [13]Wang T J, Larson M G, Vasan R S, et al Metabolite profiles and the risk of developing diabetes [J] Nat Med, 2011, 17(4): 448

    [14]Xu F, Tavintharan S, Sum C F, et al Metabolic signature shift in type 2 diabetes mellitus revealed by mass spectrometrybased metabolomics[J] J Clin Endocrinol Metab, 2013, 98(6):1060

    [15]She P, Horn C V, Reid T, et al Obesityrelated elevations in plasma leucine are associated with alterations in enzymes involved in branched chain amino acid (BCAA) metabolism[J] Ajp Endocrinol Metab, 2008, 293(6):1552

    [責(zé)任編輯張寧寧]

    猜你喜歡
    黃芪測(cè)序分類
    Huangqi decoction (黃芪湯) attenuates renal interstitial fibrosis via transforming growth factor-β1/mitogen-activated protein kinase signaling pathways in 5/6 nephrectomy mice
    “補(bǔ)氣之王”黃芪,你吃對(duì)了嗎?
    杰 Sir 帶你認(rèn)識(shí)宏基因二代測(cè)序(mNGS)
    新民周刊(2022年27期)2022-08-01 07:04:49
    分類算一算
    二代測(cè)序協(xié)助診斷AIDS合并馬爾尼菲籃狀菌腦膜炎1例
    傳染病信息(2021年6期)2021-02-12 01:52:58
    黃芪是個(gè)寶
    海峽姐妹(2019年3期)2019-06-18 10:37:30
    分類討論求坐標(biāo)
    數(shù)據(jù)分析中的分類討論
    教你一招:數(shù)的分類
    基因捕獲測(cè)序診斷血癌
    搡女人真爽免费视频火全软件| 中文字幕制服av| 卡戴珊不雅视频在线播放| 在线免费十八禁| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲无线观看免费| 久久久午夜欧美精品| 一边亲一边摸免费视频| 久久久久久久精品精品| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品一二三区在线看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产69精品久久久久777片| 婷婷色av中文字幕| 国产午夜精品一二区理论片| 老女人水多毛片| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产精品不卡视频一区二区| 国产毛片a区久久久久| 国产精品久久久久久久电影| 国产高潮美女av| 熟女电影av网| 欧美成人a在线观看| 美女内射精品一级片tv| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲在线观看片| 99视频精品全部免费 在线| 国内揄拍国产精品人妻在线| 丰满少妇做爰视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产av码专区亚洲av| 日本wwww免费看| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲国产精品国产精品| 国产有黄有色有爽视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 春色校园在线视频观看| 青春草视频在线免费观看| 亚洲国产日韩一区二区| 男女那种视频在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| 91久久精品国产一区二区三区| 2018国产大陆天天弄谢| 久久久精品94久久精品| 久久久精品94久久精品| 91久久精品国产一区二区成人| 国产亚洲av嫩草精品影院| a级毛色黄片| 亚洲国产精品国产精品| 国产午夜精品一二区理论片| 波野结衣二区三区在线| 在线观看av片永久免费下载| 男女下面进入的视频免费午夜| 五月玫瑰六月丁香| 欧美一区二区亚洲| 午夜老司机福利剧场| 青春草国产在线视频| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲第一区二区三区不卡| 一区二区三区精品91| 一级毛片 在线播放| 我要看日韩黄色一级片| 日韩欧美精品免费久久| 麻豆乱淫一区二区| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产成人午夜福利电影在线观看| av天堂中文字幕网| 国产黄频视频在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲精品第二区| 久久这里有精品视频免费| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 嫩草影院精品99| 久久久久性生活片| 国产毛片在线视频| 亚洲怡红院男人天堂| av卡一久久| 亚洲国产精品国产精品| av在线蜜桃| 2018国产大陆天天弄谢| 水蜜桃什么品种好| 免费av观看视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 舔av片在线| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 丝瓜视频免费看黄片| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 国产综合精华液| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日本wwww免费看| 一级毛片我不卡| 国产高清三级在线| 大话2 男鬼变身卡| 日韩av免费高清视频| 水蜜桃什么品种好| 91狼人影院| 亚洲天堂av无毛| 久久6这里有精品| 亚洲图色成人| 欧美xxⅹ黑人| 国产精品精品国产色婷婷| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲成人av在线免费| 26uuu在线亚洲综合色| 丰满乱子伦码专区| 欧美高清成人免费视频www| www.av在线官网国产| 久久久午夜欧美精品| 国产精品一区二区性色av| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产真实伦视频高清在线观看| 九色成人免费人妻av| 乱系列少妇在线播放| 熟女av电影| 五月伊人婷婷丁香| 国产成人a∨麻豆精品| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲精品自拍成人| 国产高清有码在线观看视频| 在线观看人妻少妇| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 成人美女网站在线观看视频| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲色图综合在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 身体一侧抽搐| 综合色丁香网| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产探花在线观看一区二区| 天美传媒精品一区二区| 久久影院123| 国产精品嫩草影院av在线观看| 老女人水多毛片| 久久热精品热| 天天躁日日操中文字幕| 赤兔流量卡办理| 亚洲欧美日韩无卡精品| 婷婷色综合www| 国产在线男女| 视频区图区小说| 男插女下体视频免费在线播放| 美女被艹到高潮喷水动态| 日本与韩国留学比较| 91精品伊人久久大香线蕉| 观看免费一级毛片| 免费看a级黄色片| 男男h啪啪无遮挡| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产乱人视频| 日日摸夜夜添夜夜爱| 真实男女啪啪啪动态图| 欧美日韩视频精品一区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 中文资源天堂在线| 视频区图区小说| 日韩亚洲欧美综合| 国产成人精品福利久久| 国产男女内射视频| 青春草国产在线视频| 黄色日韩在线| 亚洲精品国产成人久久av| 如何舔出高潮| 在线天堂最新版资源| 国产精品三级大全| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲av一区综合| 99久久人妻综合| 国产高潮美女av| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久久精品性色| 搞女人的毛片| 高清av免费在线| 超碰97精品在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲内射少妇av| 超碰97精品在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲最大成人av| 直男gayav资源| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产av国产精品国产| 天堂网av新在线| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久午夜福利片| 午夜视频国产福利| 免费av毛片视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 五月玫瑰六月丁香| 欧美高清性xxxxhd video| 91久久精品电影网| 天天躁日日操中文字幕| 国产毛片在线视频| 国产成人精品婷婷| 婷婷色av中文字幕| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲欧美清纯卡通| 国产成人精品福利久久| 听说在线观看完整版免费高清| 又爽又黄a免费视频| freevideosex欧美| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲国产日韩一区二区| 国产高清国产精品国产三级 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 免费人成在线观看视频色| 国产精品偷伦视频观看了| 性色avwww在线观看| 亚洲无线观看免费| 国产精品三级大全| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 精品人妻视频免费看| 午夜福利视频1000在线观看| 国产黄片美女视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| freevideosex欧美| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产成人精品福利久久| 久久综合国产亚洲精品| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美精品国产亚洲| 中文在线观看免费www的网站| 国产精品成人在线| 国产美女午夜福利| 免费观看av网站的网址| 亚洲国产精品成人综合色| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产亚洲91精品色在线| 高清在线视频一区二区三区| 看非洲黑人一级黄片| 最近2019中文字幕mv第一页| 欧美日韩综合久久久久久| 嫩草影院精品99| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 春色校园在线视频观看| av天堂中文字幕网| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美高清成人免费视频www| 中国三级夫妇交换| 亚洲图色成人| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产中年淑女户外野战色| 欧美日韩综合久久久久久| 观看美女的网站| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 香蕉精品网在线| 日韩av在线免费看完整版不卡| 午夜老司机福利剧场| 日韩国内少妇激情av| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产视频内射| 欧美97在线视频| 韩国av在线不卡| 99久久九九国产精品国产免费| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产精品一区www在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 国产熟女欧美一区二区| 国产一区亚洲一区在线观看| 少妇熟女欧美另类| 91狼人影院| 黄片无遮挡物在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 日本三级黄在线观看| 久久久久久久久大av| 好男人视频免费观看在线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 午夜福利高清视频| 青青草视频在线视频观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产探花在线观看一区二区| 2022亚洲国产成人精品| 国产av国产精品国产| 日日啪夜夜爽| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产精品成人在线| 国产毛片a区久久久久| 久久精品国产自在天天线| 性色avwww在线观看| 亚洲在久久综合| 夫妻午夜视频| 免费人成在线观看视频色| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲欧美精品专区久久| 麻豆乱淫一区二区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 99精国产麻豆久久婷婷| 成人无遮挡网站| 国产成人freesex在线| 亚洲精品国产成人久久av| 国产探花在线观看一区二区| 高清av免费在线| 国产高清三级在线| 亚洲av免费在线观看| 欧美成人午夜免费资源| 欧美bdsm另类| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日韩欧美精品v在线| 久久久久国产精品人妻一区二区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 成年人午夜在线观看视频| 在线天堂最新版资源| 精品久久久久久久末码| 国产老妇女一区| 毛片一级片免费看久久久久| 国产精品.久久久| 嫩草影院新地址| 亚洲国产精品999| 男女国产视频网站| 亚洲精品一二三| 亚洲精品国产成人久久av| av专区在线播放| 大码成人一级视频| 男人添女人高潮全过程视频| 精品久久久久久久久av| 国产在线男女| 我要看日韩黄色一级片| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 亚洲色图av天堂| 国精品久久久久久国模美| 国产精品99久久久久久久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久久久国产网址| 免费观看无遮挡的男女| 波野结衣二区三区在线| 男男h啪啪无遮挡| 成年版毛片免费区| 六月丁香七月| 在线a可以看的网站| 91在线精品国自产拍蜜月| 特级一级黄色大片| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 国产精品偷伦视频观看了| 免费在线观看成人毛片| 亚洲自拍偷在线| 欧美丝袜亚洲另类| 国产精品成人在线| 久热久热在线精品观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲四区av| 亚洲人成网站在线观看播放| 99久久精品一区二区三区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 欧美成人一区二区免费高清观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲美女视频黄频| 国产精品一区www在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 视频区图区小说| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产精品嫩草影院av在线观看| 十八禁网站网址无遮挡 | 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 精品人妻熟女av久视频| 黄色日韩在线| 久久久精品欧美日韩精品| 精品人妻一区二区三区麻豆| 神马国产精品三级电影在线观看| videossex国产| 日韩成人伦理影院| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 婷婷色综合大香蕉| 国产精品99久久99久久久不卡 | 一区二区三区免费毛片| av.在线天堂| 老司机影院成人| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产黄色免费在线视频| 超碰97精品在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲成人一二三区av| 亚洲天堂av无毛| 久久久久久久国产电影| 99久久中文字幕三级久久日本| 在线观看一区二区三区激情| 国产精品三级大全| 人妻一区二区av| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产一区二区三区综合在线观看 | 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 少妇被粗大猛烈的视频| 涩涩av久久男人的天堂| 国产男女内射视频| 国产伦理片在线播放av一区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲经典国产精华液单| 日本欧美国产在线视频| 午夜日本视频在线| 久热久热在线精品观看| 久久久成人免费电影| 国产色爽女视频免费观看| 午夜激情久久久久久久| 久久久欧美国产精品| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 五月玫瑰六月丁香| 另类亚洲欧美激情| 免费观看性生交大片5| h日本视频在线播放| 日韩免费高清中文字幕av| 成人毛片60女人毛片免费| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲精品成人久久久久久| 别揉我奶头 嗯啊视频| 色吧在线观看| 日韩电影二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产大屁股一区二区在线视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 午夜视频国产福利| 国产黄片视频在线免费观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 日韩人妻高清精品专区| 91精品国产九色| 亚洲怡红院男人天堂| 国产成人精品一,二区| 欧美另类一区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产在视频线精品| 中文字幕av成人在线电影| 久久人人爽人人片av| av国产免费在线观看| 亚洲不卡免费看| 亚洲av不卡在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 久久热精品热| 国产淫片久久久久久久久| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 欧美激情在线99| 欧美+日韩+精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 秋霞伦理黄片| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 直男gayav资源| 又大又黄又爽视频免费| 欧美 日韩 精品 国产| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久久久性生活片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲国产高清在线一区二区三| av国产久精品久网站免费入址| 久久久久国产网址| 嫩草影院新地址| 国产伦理片在线播放av一区| 国产av国产精品国产| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 少妇人妻一区二区三区视频| 国产综合懂色| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 精品久久久噜噜| a级毛片免费高清观看在线播放| 久久精品国产亚洲av涩爱| 一级毛片我不卡| 中文字幕av成人在线电影| 香蕉精品网在线| 丰满人妻一区二区三区视频av| 波多野结衣巨乳人妻| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 精品熟女少妇av免费看| 一级黄片播放器| 国内揄拍国产精品人妻在线| 成人一区二区视频在线观看| av国产精品久久久久影院| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲成人久久爱视频| 国产真实伦视频高清在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 久久久久久久午夜电影| 成人免费观看视频高清| 丝袜脚勾引网站| 亚洲天堂av无毛| 国产高清三级在线| 免费大片18禁| 欧美三级亚洲精品| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲国产精品专区欧美| 国产精品人妻久久久久久| 男男h啪啪无遮挡| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 嘟嘟电影网在线观看| 97超视频在线观看视频| 伦精品一区二区三区| 亚洲综合精品二区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 99久久人妻综合| 一级毛片电影观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲丝袜综合中文字幕| 一二三四中文在线观看免费高清| 国内精品美女久久久久久| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 三级国产精品欧美在线观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 97超视频在线观看视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 日本欧美国产在线视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产成人精品一,二区| 观看美女的网站| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 天堂俺去俺来也www色官网| 高清日韩中文字幕在线| 91狼人影院| 春色校园在线视频观看| 深夜a级毛片| 成人美女网站在线观看视频| 69人妻影院| 边亲边吃奶的免费视频| 久久久久久久国产电影| 久久久久久国产a免费观看| 国产黄片美女视频| 亚洲精品第二区| 亚洲综合色惰| 色5月婷婷丁香| 春色校园在线视频观看| 深夜a级毛片| 亚洲三级黄色毛片| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产精品蜜桃在线观看| 精品久久久久久久久av| 亚洲欧美成人精品一区二区| 免费大片18禁| 三级经典国产精品| av网站免费在线观看视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲成人一二三区av| 少妇被粗大猛烈的视频| 日本三级黄在线观看| 大香蕉久久网| 国产视频首页在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 中国国产av一级| 亚洲最大成人中文| 一个人观看的视频www高清免费观看| 在线a可以看的网站| 99久久精品国产国产毛片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 少妇人妻精品综合一区二区| 91aial.com中文字幕在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 我的女老师完整版在线观看| 青春草视频在线免费观看| 国产精品精品国产色婷婷| 女人久久www免费人成看片| 日韩免费高清中文字幕av| 在线观看av片永久免费下载| 日本黄色片子视频| 亚洲av成人精品一二三区| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品爽爽va在线观看网站| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久午夜福利片| 交换朋友夫妻互换小说| 热re99久久精品国产66热6| 视频区图区小说| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品精品国产色婷婷| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲精品日本国产第一区| 国产极品天堂在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 黑人高潮一二区| 秋霞伦理黄片| av国产精品久久久久影院| 在线天堂最新版资源| 久久人人爽人人片av| 国产精品人妻久久久影院| 国产黄片美女视频| 国产69精品久久久久777片| 久久人人爽人人爽人人片va| .国产精品久久| 国产精品伦人一区二区| 国产成人精品婷婷| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美另类一区| 欧美xxⅹ黑人| 别揉我奶头 嗯啊视频|