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    浙江楠組培繁育叢芽技術(shù)*

    2017-08-10 12:59:39黃碧華
    福建林業(yè) 2017年1期
    關(guān)鍵詞:外植體倍數(shù)影響力

    黃碧華

    (福建省林業(yè)科技試驗(yàn)中心,福建南靖363600)

    浙江楠組培繁育叢芽技術(shù)*

    黃碧華

    (福建省林業(yè)科技試驗(yàn)中心,福建南靖363600)

    通過不同培養(yǎng)基和不同激素及不同濃度對(duì)浙江楠組培各階段的影響研究,篩選出浙江楠組培誘導(dǎo)和增殖階段的最佳組培配方。試驗(yàn)研究結(jié)果表明:浙江楠初代誘導(dǎo)培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為B5+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.2mg·L-1,繼代增殖叢芽最佳培養(yǎng)基B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1.0mg·L-1+NAA0.6mg·L-1。

    浙江楠;組織培養(yǎng);增殖培養(yǎng)

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    2013年底在開展浙江楠優(yōu)樹篩選的基礎(chǔ)上,采集優(yōu)樹的種子,2014年在福建省林業(yè)科技試驗(yàn)中心無板橋基地苗圃進(jìn)行優(yōu)樹家系育苗測(cè)試,在苗圃篩選出一株優(yōu)樹子代超級(jí)苗,采集其嫩梢和側(cè)芽作為組培誘導(dǎo)的材料。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 外植體采集和消毒處理

    從優(yōu)選出的浙江楠1a生超級(jí)苗上剪取嫩梢及其苗木中上部腋芽飽滿、節(jié)間較短的枝條作為外植體,去除葉片,保留葉柄,長(zhǎng)度約10cm,用毛刷輕刷洗凈附于莖枝上的細(xì)絨毛和其它粘著物,放在自來水流動(dòng)沖洗1~2h,然后放至接種室超凈工作臺(tái)上,用70~75%酒精消毒20s,用無菌水清洗1遍,再轉(zhuǎn)入0.15%升汞溶液中消毒時(shí)間設(shè)置為4個(gè)梯度:3min、5min、8min和10min,消毒完后用無菌水沖洗外植體4~5遍,并置于經(jīng)過高溫消毒的濾紙上瀝干,然后將枝條切割成1.0~1.5cm不等的莖段,每莖段帶1個(gè)腋芽,14d后統(tǒng)計(jì)外植體的污染率和存活率[7]。

    1.2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選

    采用L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),對(duì)浙江楠的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行配制,各基礎(chǔ)培養(yǎng)基、激素以及激素濃度的設(shè)置如表1所示(為控制隨機(jī)誤差,將其中一因素設(shè)計(jì)為空白)。然后依據(jù)正交設(shè)計(jì)表對(duì)所設(shè)計(jì)的9個(gè)處理對(duì)浙江楠進(jìn)行初代培養(yǎng)試驗(yàn),每處理50瓶,每瓶1個(gè),3個(gè)重復(fù)。一段時(shí)間后調(diào)查統(tǒng)計(jì)萌芽率不定芽數(shù),并通過方差分析和顯著性檢驗(yàn),篩選出最優(yōu)誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方。

    表1 浙江楠誘導(dǎo)培養(yǎng)正交試驗(yàn)因素及水平表

    表2 浙江楠初代培養(yǎng)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

    1.2.3 繼代增殖培養(yǎng)基篩選

    以B5、1/2MS、MS為基本培養(yǎng)基,分別添加不同激素(6-BA、KT、NAA),形成4因素3水平、9個(gè)處理的正交設(shè)計(jì)(見表3、4)。每個(gè)處理50瓶,每瓶1個(gè)莖段,每個(gè)徑段帶1個(gè)腋芽,試驗(yàn)重復(fù)3次。一段時(shí)間后調(diào)查統(tǒng)計(jì)其平均增殖倍數(shù),并進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗(yàn)。

    表3 繼代增殖培養(yǎng)正交試驗(yàn)因素及水平表

    表4 浙江楠繼代增殖正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

    1.3 培養(yǎng)條件

    在浙江楠誘導(dǎo)階段、繼代增殖培養(yǎng)試驗(yàn)時(shí),外植體接種后,因?yàn)槭悄颈局参铮锌谌菀桩a(chǎn)生褐化,為防止此種現(xiàn)象的發(fā)生,在接種后需進(jìn)行7~10d的暗光培養(yǎng)處理。光照培養(yǎng)階段,光照時(shí)間設(shè)為12h·d-1、溫度為(25±2)℃、光照強(qiáng)度1500~3000Lux。誘導(dǎo)(初代)培養(yǎng)蔗糖用量為15g·L-1,、繼代培養(yǎng)蔗糖用量增為30g·L-1,抗壞血酸5mg,半胱氨酸5mg·L-1,瓊脂粉7g·L-1,酸堿度PH為5.8。誘導(dǎo)培養(yǎng)和繼代增殖培養(yǎng)試驗(yàn),觀察統(tǒng)計(jì)時(shí)間為培養(yǎng)30d一周期[8-9]。

    2 結(jié)果與分析

    2.2.1 浙江楠無菌體系的建立

    從表5可以看出,采用HgCl2進(jìn)行消毒,隨著時(shí)間的增長(zhǎng),外植體的污染率不斷降低,存活率先上升而后下降。當(dāng)消毒時(shí)間為5 min時(shí),污染率為26%,存活率最高,可達(dá)42%。

    表5 HgCl2消毒時(shí)間對(duì)外植體污染率和存活率的影響

    2.2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)浙江楠初代培養(yǎng)的影響

    從正交試驗(yàn)結(jié)果(表6)分析可以得出,3個(gè)因素對(duì)浙江楠誘導(dǎo)萌芽的影響力的大小順序?yàn)椋夯九囵B(yǎng)基>6-BA>NAA,即基本培養(yǎng)基對(duì)其不定芽數(shù)的萌芽的影響力(A)>6-BA對(duì)其不定芽數(shù)的萌芽的影響力(B)>NAA對(duì)其不定芽數(shù)的萌芽的影響力(C)。由表6的分析結(jié)果還可發(fā)現(xiàn),不同因素組合的培養(yǎng)基,其誘導(dǎo)出的不定芽數(shù)不同,高濃度6-BA和NAA的培養(yǎng)基上的不定芽數(shù)差異顯著。不定芽數(shù)量最大的處理為1,平均倍數(shù)為3.6個(gè);其次是處理2,增殖倍數(shù)為3.1個(gè)。處理8和處理9誘導(dǎo)的不定芽數(shù)均較少,這是因?yàn)樘幚?和處理9的基本培養(yǎng)基為White,該培養(yǎng)基對(duì)木本植物的生長(zhǎng)有抑制作用,并在較高6-BA濃度均為1.0mg·L-1和2.0mg·L-1的環(huán)境下萌芽效果不好。綜合以上分析,誘導(dǎo)不定芽誘導(dǎo)數(shù)以處理1為最佳。因此,浙江楠誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為B5+6-BA(0.5mg·L-1)+NAA(0.2mg·L-1),能獲得分化能力較強(qiáng)且健康的不定芽。

    表6 浙江楠初代培養(yǎng)誘導(dǎo)萌芽正交試驗(yàn)結(jié)果

    2.2.3 繼代培養(yǎng)基對(duì)浙江楠增殖的影響

    繼代增殖培養(yǎng),是植物組織培養(yǎng)能否順利并投入擴(kuò)繁生產(chǎn)推廣的關(guān)鍵,也是植物離體快繁的主要階段。本試驗(yàn)研究中,將長(zhǎng)度約1.5cm左右的單芽切下轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。由表7結(jié)果分析可看出,4個(gè)因素對(duì)其增殖倍數(shù)影響的主次關(guān)系為:B>C>D>A,即6-BA對(duì)浙江楠繼代增殖倍數(shù)影響力(A)>KT對(duì)其繼代增殖倍數(shù)的影響力(B)>NAA對(duì)其繼代增殖倍數(shù)的影響力(D)>基本培養(yǎng)基其繼代對(duì)增殖倍數(shù)的影響力(C)。不同水平的6-BA、KT、NAA對(duì)增殖倍數(shù)的影響顯著差異。理論上浙江楠最佳的增殖培養(yǎng)基應(yīng)為B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1. 0mg·L-1,但由于這一方案并未出現(xiàn)在已做的試驗(yàn)中,而且在本試驗(yàn)中,增殖倍數(shù)最高的處理為2,平均倍數(shù)為4.80;其次是處理5,增殖倍數(shù)為4.60,但處理2和處理5兩組增殖倍數(shù)差異不顯著。浙江楠最佳的增殖培養(yǎng)基為B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1.0mg·L-1+NAA0.6mg·L-1或者1/2MS+6-BA0.8mg·L-1+NAA0.6。

    表7 浙江楠繼代培養(yǎng)正交試驗(yàn)結(jié)果

    3 結(jié)論

    采用莖段為外植體培養(yǎng)浙江楠組培苗,初代培養(yǎng)中誘導(dǎo)不定芽分化的最佳培養(yǎng)基是B5+6-BA0.5mg· L-1+NAA0.2mg·L-1,誘導(dǎo)存活率可達(dá)42%,采用此配方能獲得分化能力較強(qiáng)的不定芽。浙江楠繼代增殖培養(yǎng)基以B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1.0mg·L-1+NAA0.6mg·L-1、1/2MS+6-BA0.8mg·L-1+NAA0.6為最佳的增殖培養(yǎng)基配方,增殖倍數(shù)可達(dá)4倍以上。

    由于組織培養(yǎng)中所選擇的激素種類比較多,并且激素的種類、濃度不同,浙江楠組培效果各異。篩選最為經(jīng)濟(jì)、穩(wěn)定、高效的培養(yǎng)基配方,降低經(jīng)濟(jì)成本,提高工廠化育苗效益還有需要進(jìn)一步探索。

    [1]許智宏.植物生物技術(shù)[M].上??茖W(xué)出版社,1998:245.

    [2]朱建華,彭士勇編.植物組織培養(yǎng)實(shí)用技術(shù)[M].中國(guó)計(jì)量出版社,2002:67-72.

    [3]陳正華.木本植物組織培養(yǎng)及其應(yīng)用[M].北京:高等教育出版社,1994.

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    [9]中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志(第十九卷)[M].北京:科學(xué)出版社,1999.

    責(zé)任編輯/羅美娟

    The Technique of Bud Propagation in Tissue Culture of

    Huang Bihua
    (Fujian Forestry Science and Technology Test Center,Nanjing Fujian 363600,China.)

    S792.24

    A

    1003-4382(2017)02-0045-04

    2017-01-05

    2017-02-09

    黃碧華(1973-),女,本科,工程師,主要從事植物組織培養(yǎng)工作。

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