甘露糖蛋白在葡萄酒釀造過程中的應(yīng)用研究進(jìn)展

劉澤宇,王 軍,*,何勁莉,*,劉 俊(.內(nèi)蒙古大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,內(nèi)蒙古呼和浩特 000; .內(nèi)蒙古自治區(qū)園藝研究院,內(nèi)蒙古呼和浩特 0000)

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甘露糖蛋白在葡萄酒釀造過程中的應(yīng)用研究進(jìn)展

劉澤宇1,王 軍1,*,何勁莉1,*,劉 俊2
(1.內(nèi)蒙古大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,內(nèi)蒙古呼和浩特 010021; 2.內(nèi)蒙古自治區(qū)園藝研究院,內(nèi)蒙古呼和浩特 010010)

甘露糖蛋白是一種在酵母自溶時(shí),從酵母細(xì)胞壁中釋放的可溶性糖蛋白。本文介紹甘露糖蛋白的結(jié)構(gòu)及特性,綜述該蛋白對葡萄酒中花青素、單寧、乳酸菌、芳香類物質(zhì)及蛋白質(zhì)的作用及機(jī)理,如穩(wěn)定花青素、單寧及蛋白質(zhì),促進(jìn)乳酸菌生長,保護(hù)芳香化合物等。甘露糖蛋白對于葡萄酒工業(yè)生產(chǎn)有重要意義。

甘露糖蛋白,葡萄酒酒質(zhì),花青素,單寧,芳香類物質(zhì),蛋白質(zhì)

葡萄酒是富含花青素,單寧等的一種健康飲品。葡萄酒釀造本質(zhì)是微生物生化轉(zhuǎn)化。葡萄酒發(fā)酵過程中受外來微生物,環(huán)境溫度,pH的變化會(huì)導(dǎo)致酒色變差,產(chǎn)生不良口感、出現(xiàn)酒石及蛋白沉淀等影響葡萄酒品質(zhì)。傳統(tǒng)葡萄酒工業(yè)生產(chǎn)中常采用添加膨潤土法、加熱法、蛋白酶分解等方式增加酒的穩(wěn)定性,改善葡萄酒酒質(zhì)。但這些穩(wěn)定葡萄酒品質(zhì)的方式容易使葡萄酒產(chǎn)生不良的風(fēng)味。添加SO2易產(chǎn)生異味并影響葡萄酒色澤[1]。年復(fù)一年釀造葡萄酒的釀酒師們發(fā)現(xiàn),利用酵母泥可以改善葡萄酒酒質(zhì),提高酒體穩(wěn)定性及酒香。研究認(rèn)為酵母泥穩(wěn)定葡萄酒酒質(zhì)的有效成分為甘露糖蛋白[2]。

1 甘露糖蛋白的結(jié)構(gòu)與特性

甘露糖蛋白(mannoprotein)是由蛋白和多糖結(jié)合的可溶性蛋白質(zhì),它覆蓋著酵母細(xì)胞壁外層,占酵母細(xì)胞干重的20%～50%[3],占酵母細(xì)胞壁的40%[4]。其多糖分子部分包含α-1,6-D-甘露聚糖形成的主鏈,以及少量α-1,2-D-甘露聚糖構(gòu)成支鏈,通過共價(jià)鍵連接在蛋白質(zhì)骨架上。蛋白質(zhì)通過絲氨酸和蘇氨酸與糖鏈中的1-4個(gè)甘露寡糖形成O-糖苷鍵,其余的甘露糖通過α-N-乙酰酮二糖鍵結(jié)合在蛋白質(zhì)上的天門冬酰胺處[5]。由于含有側(cè)鏈數(shù)不同其分子量可由12.5～560 kDa。甘露糖蛋白的側(cè)鏈含有的N-和O-連接的甘露糖,均可以發(fā)生糖基化。N-糖苷鍵連接在1,2-α-連接的鏈中結(jié)束于1,3-α連接的甘露糖,如圖1(A)所示。O-糖基化的甘露糖蛋白通過α-糖苷鍵與甘露糖異頭碳的羥基末端的短甘露糖鏈的絲氨酸或蘇氨酸。這些短鏈通常由五個(gè)甘露糖形成,其中前兩個(gè)是1,2-α-連接,其余為1,3-α-D連接,如圖1(B)所示。O-甘露糖的糖鏈短,具有剛性且與1,3-β-D-葡聚糖相互交聯(lián),給予細(xì)胞壁支撐,同時(shí)可增強(qiáng)N-甘露糖蛋白的糖基化[6]。在N-連接的側(cè)鏈帶有磷酸,有親水結(jié)構(gòu)域,使該蛋白具有良好的親水性。結(jié)構(gòu)中的氫鍵可以與疏水性物質(zhì)發(fā)生疏水相互作用而結(jié)合,形成復(fù)合物[7]。甘露糖蛋白無毒無害,能夠作用于葡萄酒中的主要物質(zhì),且作用條件溫和,無需催化,是一種安全有效的葡萄酒品質(zhì)改良劑。且甘露糖蛋白源于葡萄酒發(fā)酵過程,屬于葡萄酒成分的原有自然物質(zhì),可以保證葡萄酒的原汁原味。

圖1 甘露糖蛋白糖基化Fig.1 Mannoprotein glycosylation pattern

2 甘露糖蛋白對葡萄酒中物質(zhì)的作用

1976年Ballou等解析了甘露糖蛋白的結(jié)構(gòu)[8],1987年Llaubères等發(fā)現(xiàn)甘露糖蛋白是酵母胞外多糖的一種[9]。1992年Chatonne等發(fā)現(xiàn)甘露糖蛋白能夠固定陳釀葡萄酒的木桶釋放的化合物[10]。從此開始甘露糖蛋白在葡萄酒釀造中的應(yīng)用。1994年Waters等發(fā)現(xiàn)甘露糖蛋白在葡萄酒中能夠防止酒中蛋白質(zhì)沉淀[11]。同年,Lubbers等發(fā)現(xiàn)甘露糖蛋白可以有效地保留酒香[12]。2007年P(guān)oncet-Legrand等證明了甘露糖蛋白可以抑制葡萄籽單寧的凝集[13]。2007年Chalier等進(jìn)一步證明甘露糖蛋白有促進(jìn)芳香化合物保留的作用[14]。2008年Guadalupe等證明了甘露糖蛋白增加葡萄酒多糖成分[15]。2010年Diez等證明了甘露糖蛋白可以促進(jìn)乳酸菌的生長,抑制醋酸菌的生長[16]。2012年Rodriguez-Nogales等證明了甘露糖蛋白的抗氧化性能[17]。2015年Martínez-Lapuente等發(fā)現(xiàn)甘露糖蛋白可以提高氣泡酒的起泡性能[18]。隨著對甘露糖蛋白研究的逐步深入,發(fā)現(xiàn)甘露糖蛋白能夠作用于葡萄酒中的花青素、單寧、乳酸菌、芳香類物質(zhì)和蛋白質(zhì)等物質(zhì),可以穩(wěn)定酒中的花青素和單寧,加快蘋果酸-乳酸發(fā)酵過程,保留芳香類物質(zhì),增強(qiáng)酒中蛋白質(zhì)穩(wěn)定性,從而有效提升葡萄酒酒質(zhì)。

2.1 對葡萄酒中花青素的穩(wěn)定作用

葡萄酒中花青素的含量是決定葡萄酒品質(zhì)的重要因素之一?；ㄇ嗨貥O易氧化,且在發(fā)酵和陳釀過程中,葡萄酒持續(xù)下降,最后pH在2.7～3.8之間,花青素在pH為3.2～3.5時(shí),顏色損失最為嚴(yán)重。且在漫長的發(fā)酵陳釀過程中,以氧和光為催化劑,花青素的分解被加快[19]。因此釀酒工業(yè)中常選用花青素含量高的釀酒葡萄作為原料[20]。有的研究應(yīng)用金屬離子和B環(huán)糊精增強(qiáng)花青素的穩(wěn)定性,避免花青素被分解,但卻破壞了酒的品質(zhì),進(jìn)而影響到了酒的口感[21-22]。Guadalupe認(rèn)為葡萄酒中甘露糖蛋白可以減緩花青素的分解與沉淀,使酒色更加穩(wěn)定[23]。Wu研究證明花青素的蛋白部分可通過疏水相互作用結(jié)合甘露糖蛋白,形成復(fù)合物,降低花青素的降解速率,增加花青素半衰期達(dá)4～5倍。使花青素穩(wěn)定性增強(qiáng),分解減少,保證葡萄酒成酒中花青素含量的穩(wěn)定性[24]。

因此通過提高葡萄酒中酵母甘露糖蛋白的含量來穩(wěn)定葡萄酒中花青素含量是一種可行的方法。Gonzale通過遺傳改良和基因修飾改造釀酒酵母,改造后的酵母在葡萄酒發(fā)酵過程中能釋放出大量的甘露糖蛋白[25]。Pérez-Través利用S.cerevisiae酵母和S.kudriavzevii酵母的天然雜交,獲得了高產(chǎn)甘露糖蛋白酵母。葡萄酒釀造過程中,這種高產(chǎn)酵母釋放甘露糖蛋白可達(dá)1.52 mg/mg DW,比普通釀酒酵母甘露糖蛋白產(chǎn)能的0.30～0.39 mg/mg DW約提升4倍。并且發(fā)現(xiàn)人工雜交S.kudriavzevii×S.cerevisiae的雜交后代甘露糖蛋白釋放量低于天然雜交[26]。提高葡萄酒中高甘露糖蛋白的含量能保持葡萄酒中花青素的穩(wěn)定性,進(jìn)而保證酒的營養(yǎng)價(jià)值,穩(wěn)定酒色,使葡萄酒擁有良好的外觀。所以通過提高葡萄酒中甘露糖蛋白含量是保證葡萄酒中花青素含量的一種新方法,可以協(xié)同現(xiàn)有技術(shù),保證葡萄酒的酒色及營養(yǎng)。

2.2 對單寧的穩(wěn)定作用

單寧是葡萄酒中主要的酚類物質(zhì)之一。單寧不僅有益于心臟血管疾病的預(yù)防,而且單寧含量的多少可以決定酒的風(fēng)味、結(jié)構(gòu)與質(zhì)地。傳統(tǒng)釀酒過程中通過在橡木桶中陳釀或添加橡木片,使橡木中的單寧溶入酒中來增加單寧的含量[27]。然而葡萄酒中的酸性條件和緩慢氧化,導(dǎo)致單寧的鍵斷裂和重排反應(yīng),從而導(dǎo)致單寧聚合[28]。Nguela等通過落射熒光,共聚焦顯微鏡及透射電鏡進(jìn)行觀察,甘露糖蛋白作用于單寧,與單寧聚合形成一種刷狀結(jié)構(gòu)的復(fù)合物,形成的復(fù)合物可明顯減少葡萄酒發(fā)酵過程中單寧的損失[29]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),該蛋白能夠防止單寧與酒中的其他蛋白質(zhì)結(jié)合,聚合過程中兩者形成親水復(fù)合物,增強(qiáng)了單寧的穩(wěn)定性,減少了單寧的損失[30],保證了酒口感的厚實(shí)。

甘露糖蛋白減緩在葡萄酒釀造中單寧間的自然聚合,保持了葡萄酒體系的穩(wěn)定性,保證了葡萄酒口感的原味。同時(shí)將甘露糖蛋白與添加橡木片的方法結(jié)合,能夠提升葡萄酒的單寧含量,保證營養(yǎng)價(jià)值。

2.3 對蘋果酸-乳酸發(fā)酵的促進(jìn)作用

葡萄酒中含有多種多酚物質(zhì),如兒茶素、表兒茶素、白藜蘆醇等。多酚物質(zhì)可以增強(qiáng)葡萄酒的抗氧化性,但多酚物質(zhì)大量存在會(huì)抑制蘋果酸-乳酸發(fā)酵過程[31]。蘋果酸-乳酸發(fā)酵(MLF)會(huì)使酒中口感尖酸的蘋果酸轉(zhuǎn)化成比較柔和的乳酸,使酒的酸度變得更加適口。實(shí)踐證明總酚含量大于5.5 g/L會(huì)影響到葡萄酒發(fā)酵的MLF過程[1]。楊新元等發(fā)現(xiàn)甘露糖蛋白可以加快MLF的啟動(dòng),對MLF進(jìn)程有促進(jìn)作用。進(jìn)一步研究,在葡萄酒中添加甘露糖蛋白,對比發(fā)酵過程中測得的蘋果酸和乳酸的比例,發(fā)現(xiàn)加入甘露糖蛋白可以有效加快葡萄酒的MLF過程,平均縮短發(fā)酵時(shí)間1/5[32]。MLF過程是由乳酸菌(LAB)完成,表兒茶素等多酚物質(zhì)會(huì)抑制LAB等生長及代謝。Diez通過加入不同的濃度的甘露糖蛋白和葡萄酒中自身的多糖物質(zhì)的對比實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),甘露糖蛋白對于醋酸菌(AAB)具有一定的抑制作用,使AAB在葡萄酒發(fā)酵過程中一直處于潛伏狀態(tài),避免大量的醋酸產(chǎn)生。甘露糖蛋白對于LAB有促生長作用,在葡萄酒發(fā)酵過程中使LAB的數(shù)量明顯增加[16]。Ganan等也證明了甘露糖蛋白可以增加葡萄酒發(fā)酵過程中LAB的數(shù)量,具有提高LAB的生長繁殖的能力[33]。LAB數(shù)量的增加是加快MLF過程的決定性因素。

甘露糖蛋白促進(jìn)MLF過程的能力,有助于消費(fèi)者接受葡萄酒的味道。而且該蛋白源于酵母,是發(fā)酵自然產(chǎn)物,故這種方法能較好地保持葡萄酒體系的穩(wěn)定性。

2.4 對芳香化合物的保護(hù)作用

葡萄酒在釀造和成熟過程中產(chǎn)生很多的芳香物質(zhì),這些芳香物質(zhì)構(gòu)成了酒的芳香(aroma)和酒香(bouquets)。這些芳香物質(zhì)在葡萄酒釀造過程中(包括傳統(tǒng)發(fā)酵過程)會(huì)由于空氣氧化以及溫度變化而導(dǎo)致香氣成分流失,甚至產(chǎn)生不良的氣味。葡萄酒傳統(tǒng)發(fā)酵中只能通過選擇芳香物質(zhì)含量高的發(fā)酵原料來增加葡萄酒香氣。造成葡萄酒釀造對原料要求高,對不同批次產(chǎn)品質(zhì)量的均一性難以保證。且工業(yè)葡萄酒生產(chǎn)過程中常使用的膨潤土等澄清劑會(huì)導(dǎo)致酯類芳香物質(zhì)的嚴(yán)重?fù)p失[34]。Lubbers等發(fā)現(xiàn)甘露糖蛋白可以使葡萄酒更好地保留β-紫羅蘭酮、己酸乙酯等留香氣成分[35]。醋酸異戊酯是一種帶有果香味的酒香物質(zhì),是葡萄酒香重要的組成部分。Chalier利用排阻色譜法,通過糖基組成分析,發(fā)現(xiàn)甘露糖蛋白能夠讓醋酸異戊酯在不影響其他組分的情況下,波動(dòng)性顯著下降80%[14]。證實(shí)甘露糖蛋白能夠保留自然發(fā)酵產(chǎn)生的香氣。Juega通過在4個(gè)樣品酒中加入不同濃度的甘露糖蛋白,運(yùn)用氣相色譜儀對構(gòu)成香氣的蛋白質(zhì)、揮發(fā)性化合物(高級醇、高級酯)和萜類進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),高濃度的甘露糖蛋白可以有效地作用于芳香族化合物,對萜烯(香葉和芳樟醇)產(chǎn)生保留作用,可以有效地增強(qiáng)葡萄酒的香氣,使葡萄酒擁有更好的感官評價(jià)[36]。再進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)中,Juega運(yùn)用氣象色譜儀,氣質(zhì)聯(lián)用儀在120～215 ℃之間,檢測發(fā)現(xiàn)甘露糖蛋白可以降低酯類、醇類、酮類等芳香物質(zhì)的揮發(fā)性,有效地保留葡萄酒的香氣物質(zhì)[37]。Diako也利用電子舌檢測,通過方差分析證明了甘露糖蛋白對于葡萄酒的香氣有著顯著的保留作用[38]。甘露糖蛋白通過與芳香類物質(zhì)的互動(dòng),對其產(chǎn)生保留作用,讓葡萄酒中β-紫羅蘭酮、己酸乙酯等芳香物質(zhì)能夠更好地保留。工業(yè)生產(chǎn)葡萄酒中經(jīng)常會(huì)遇到葡萄酒酒香不足的情況,甘露糖蛋白是解決這一問題的良好選擇。

2.5 對蛋白質(zhì)的穩(wěn)定作用

蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性對于葡萄酒酒質(zhì)有很大的影響。在葡萄酒發(fā)酵過程中,蛋白質(zhì)可能會(huì)析出并形成不溶性的沉淀,從而在酒中形成霧狀或霾狀的沉淀聚集現(xiàn)象。工業(yè)生產(chǎn)中常使用膨潤土或者蛋白酶來解決蛋白質(zhì)沉淀,但是這種方法不僅會(huì)影響酒的口感,也容易造成發(fā)酵污染。Lochbühler發(fā)現(xiàn)甘露糖蛋白是一種有效的葡萄酒澄清劑,可以使酒中的蛋白質(zhì)更加穩(wěn)定,可以減少葡萄酒生產(chǎn)中皂土的用量,可以使葡萄酒具有更細(xì)膩的口感[39]。周攀證明甘露糖蛋白可以減少白葡萄酒生產(chǎn)過程中皂土用量,可以從1.5‰減少到0.5‰[40]。Moriwaki等通過多組的對比實(shí)驗(yàn),加入不同濃度β-葡聚糖酶促使酵母自溶,釋放甘露糖蛋白,穩(wěn)定蛋白質(zhì)霧濁,運(yùn)用分子大小排阻色譜柱、高效液相色譜儀等方法進(jìn)行分析,證明該蛋白可有效地穩(wěn)定葡萄酒蛋白質(zhì)霧濁,是一種良好的葡萄酒澄清劑[41]。而甘露糖蛋白穩(wěn)定蛋白質(zhì)的關(guān)鍵在于其特殊結(jié)構(gòu)。Schmidt證明甘露糖蛋白能夠防止蛋白沉淀是因?yàn)槠鋲A基序列中的Hpf2堿基序列。該堿基結(jié)構(gòu)可以作為聚糖鏈分支糖基化的作用點(diǎn),糖基化可以直接作用于易析出的蛋白質(zhì),增強(qiáng)其穩(wěn)定性,減少蛋白沉淀的產(chǎn)生[42]。Moriwaki在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),甘露糖蛋白可以使酒中的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性保持在38%左右,可以改善蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,但這種改善作用不太穩(wěn)定,如何使甘露糖蛋白的改善作用穩(wěn)定下來需要后續(xù)研究和探索[43]。甘露糖蛋白由于其特殊的Hpf2堿基序列,可以增強(qiáng)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,防止蛋白沉淀,從而達(dá)到調(diào)控葡萄酒品質(zhì)的目的。而且可以協(xié)同現(xiàn)代葡萄酒工業(yè)常用的皂土,在減少其添加量的同時(shí),使葡萄酒品質(zhì)更佳。

2.6 對口感的優(yōu)化作用

甘露糖蛋白是發(fā)酵過程產(chǎn)生的主要多糖之一。多糖可以讓葡萄酒的口感平滑,讓酒的味道更易被接受。Guadalupe等通過對比實(shí)驗(yàn),運(yùn)用氣相色譜法、凝膠滲透色譜法等方法分析對比加入甘露糖蛋白的實(shí)驗(yàn)組和未加入甘露糖蛋白的對比組發(fā)酵后檢測酒中成分含量,發(fā)現(xiàn)多糖含量增加,可以減少酒澀味,并增加葡萄酒的平滑度[10,44]。Gawel在以霞多麗、雷司令、菲亞諾為原料的葡萄酒中添加甘露糖蛋白,經(jīng)過專業(yè)的品酒師進(jìn)行感官評價(jià)后,認(rèn)為添加了該蛋白的葡萄酒的負(fù)面味覺和酒精的辣味感更低。酒精辣味即乙醇灼熱感,是由乙醇刺激游離神經(jīng)延伸到口腔粘膜表面導(dǎo)致。甘露糖蛋白結(jié)構(gòu)中的氫鍵可以與乙醇的羥基發(fā)生氫鍵結(jié)合,進(jìn)而減弱了酒精對口腔帶來的灼熱感,使酒有更好的口感[45]。

通過添加甘露糖蛋白增加葡萄酒中的多糖含量,有助于調(diào)和葡萄酒的口感,使葡萄酒更易入口,尤其可以減弱酒精度偏高的葡萄酒入口辛辣感。葡萄酒工業(yè)生產(chǎn)中出現(xiàn)酒精度過高的情況,通過增加甘露糖蛋白可以降低酒精對口感的負(fù)面影響,有助于葡萄酒品味。

3 問題與展望

目前有啤酒工業(yè)利用甘露糖蛋白的乳化作用來消除啤酒泡沫[46],但葡萄酒工業(yè)中甘露糖蛋白并未得到廣泛應(yīng)用,其原因主要有:甘露糖蛋白提取主要來源于發(fā)酵后的酵母泥中,方式較為單一且成本較高;葡萄酒釀造過程中,不同種類原料的葡萄,不同葡萄酒的類型,甘露糖蛋白添加量多少,待研究確定;葡萄酒生產(chǎn)實(shí)踐中,甘露糖蛋白添加時(shí)機(jī)尚未明確;而且在葡萄酒釀造過程中,直接添加甘露糖蛋白存在著利用率低與作用效果不均的現(xiàn)象;同時(shí)甘露糖蛋白與花青素、單寧等形成的復(fù)合物對人體的具體生理作用有待進(jìn)一步研究。這些都是值得探索解決的問題,也是推廣甘露糖蛋白的關(guān)鍵。

甘露糖蛋白本身作為釀酒發(fā)酵產(chǎn)物,無毒無害,能有效地改善葡萄酒酒質(zhì)?？蓮钠咸丫漆勗熘械尼劸平湍竷?yōu)化分離獲得穩(wěn)定高產(chǎn)甘露糖蛋白的釀酒酵母菌株,增加葡萄酒發(fā)酵過程中甘露糖蛋白的釋放量;通過利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)提高甘露糖蛋白的穩(wěn)定性;通過固定化反應(yīng)提高甘露糖蛋白的利用效率;在改善葡萄酒的同時(shí)利用甘露糖蛋白特性,與果膠酶等食品工業(yè)中常用的酶類進(jìn)行協(xié)同調(diào)控,更加有效地改善葡萄酒酒質(zhì);探究甘露糖蛋白的結(jié)合作用與光化學(xué)、電化學(xué)等的耦合技術(shù),探究協(xié)同作用機(jī)理。綜上,甘露糖蛋白在葡萄酒釀造中應(yīng)用前景輝煌。

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Research progress of application of mannoprotein in wine brewing

LIU Ze-yu1,WANG Jun1,*,HE Jing-li1,*,LIU Jun2

(1.School of life science,Inner Mongolia University,Hohhot 010021,China; 2.Inner Mongolia Horticulture Research Institute,Hohhot 010010,China)

Mannoprotein is a kind of soluble glycoprotein released from yeast cell wall when yeast autolysis. The structure and characteristic of mannoprotein were introduced in this paper. How the protein effects on anthocyanins,tannins,lactic acid bacteria,aromatic substances and protein function in wine and accordingly mechanism were detailed reviewed,such as stabilizing anthocyanins,tannins and protein,promoting the growth of lactic acid bacteria,and protecting aromatic compounds. Mannoprotein has important significance to wine industry production.

mannoprotein;wine quality;anthocyanin;tannin;aromatic substance;protein

2017-01-03

劉澤宇(1994-)，男，大學(xué)本科，研究方向：食品科學(xué)與工程，E-mail：373092780@qq.com。

*通訊作者:王軍(1955-)，男，碩士，教授，研究方向：食品微生物學(xué)，E-mail：nmgdxwj@163.com。 何勁莉(1960-)，女，大學(xué)本科，副教授，研究方向：葡萄加工與貯藏，E-mail：he-60@163.com。

2016年內(nèi)蒙古自治區(qū)葡萄科技重大專項(xiàng)(內(nèi)蒙古科技廳支持)。

TS262.6

A

1002-0306(2017)14-0347-05

10.13386/j.issn1002-0306.2017.14.068