飼料中膽固醇和卵磷脂水平及添加表面活性素對凡納濱對蝦蛻殼間期的影響

翟少偉 蘇保元 張春曉

(廈門市飼料檢測與安全評價重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廈門361021)

飼料中膽固醇和卵磷脂水平及添加表面活性素對凡納濱對蝦蛻殼間期的影響

翟少偉 蘇保元 張春曉*

(廈門市飼料檢測與安全評價重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廈門361021)

通過2組試驗(yàn)分別研究飼料中膽固醇和卵磷脂水平對凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)蛻殼間期及添加表面活性素對凡納濱對蝦蛻殼間期和肝胰臟抗氧化能力的影響。試驗(yàn)一：將100尾均重為(0.61±0.02) g的凡納濱對蝦隨機(jī)分為10組(每組10個重復(fù)，每個重復(fù)1尾蝦)，即飼喂基礎(chǔ)飼料的對照組以及飼喂分別添加0.2%、0.4%和0.6%膽固醇與1.0%、2.0%和3.0%卵磷脂的試驗(yàn)飼料的9個試驗(yàn)組，試驗(yàn)期為35 d，研究飼料中膽固醇和卵磷脂水平對凡納濱對蝦蛻殼間期的影響。試驗(yàn)二：將90尾均重為(0.48±0.03) g的凡納濱對蝦隨機(jī)分為6組(每組15個重復(fù)，每個重復(fù)1尾蝦)，對照組飼喂試驗(yàn)一中膽固醇和卵磷脂水平分別為0.4%和2.0%的試驗(yàn)飼料，5個表面活性素添加組分別飼喂在對照組飼料基礎(chǔ)上添加10、20、40、80和160 mg/kg表面活性素的試驗(yàn)飼料，研究飼料中添加表面活性素對凡納濱對蝦蛻殼間期及肝胰腺抗氧化能力的影響，試驗(yàn)期為28 d。結(jié)果表明：飼料中膽固醇水平顯著影響凡納濱對蝦蛻殼間期(P<0.05)，卵磷脂水平對蛻殼間期的影響不顯著(P>0.05)；飼料中膽固醇和卵磷脂水平對蛻殼間期的影響存在顯著的交互作用(P<0.05)。膽固醇和卵磷脂水平分別為0.4%和1.0%組、膽固醇和卵磷脂水平分別為0.4%和2.0%組以及膽固醇和卵磷脂水平分別為0.6%和2.0%組的蛻殼間期顯著短于其他組(P<0.05)，其中膽固醇和卵磷脂水平分別為0.4%和2.0%組蛻殼間期最短。與對照組相比，僅10 mg/kg表面活性素添加組凡納濱對蝦蛻殼間期顯著縮短(P<0.05)，肝胰腺總抗氧化能力顯著提高(P<0.05)；各表面活性素添加組的肝胰腺超氧化物歧化酶活性均較對照組顯著上升(P<0.05)；與對照組相比，10和20 mg/kg表面活性素添加組的肝胰腺過氧化氫酶活性升高(P<0.05)，其他表面活性素添加組則顯著降低(P<0.05)；除10 mg/kg表面活性素添加組外，各表面活性素添加組的肝胰腺谷胱甘肽過氧化物酶活性均較對照組顯著上升(P<0.05)；僅10和20 mg/kg表面活性素添加組的肝胰腺丙二醛水平較對照組顯著降低(P<0.05)。由此得出，本試驗(yàn)條件下，飼料中膽固醇水平及其與卵磷脂水平的交互作用顯著影響凡納濱對蝦蛻殼間期，膽固醇和卵磷脂水平分別為0.4%和2.0%時蛻殼間期最短；在膽固醇和卵磷脂水平分別為0.4%和2.0%的飼料中添加10 mg/kg表面活性素可縮短凡納濱對蝦的蛻殼間期，提高肝胰腺抗氧化能力。

膽固醇；卵磷脂；表面活性素；凡納濱對蝦；蛻殼間期

膽固醇是很多甲殼動物的必需營養(yǎng)素[1]，其可轉(zhuǎn)化為性激素、腎皮質(zhì)激素，也是合成蛻殼激素的主要物質(zhì)[2]；卵磷脂對維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能以及動物的生長和分化具有重要作用[3]。甲殼動物在體內(nèi)不能合成膽固醇，能部分合成磷脂，但是這種合成能力不能滿足甲殼動物幼體新陳代謝的需要[4]，需要外源添加滿足自身需求。研究表明，飼料中添加膽固醇可顯著提高日本對蝦(Penaeusjaponicus)的增重率和存活率[5-6]；添加卵磷脂能夠促進(jìn)墨吉對蝦[7](Penaeusmerguiensis)、凡納濱對蝦[8](Litopenaeusvannamei)和斑節(jié)對蝦[9](Penaeusmonodon)的生長。甲殼動物生長發(fā)育總是伴隨著蛻皮與蛻殼的進(jìn)行，提高蛻殼頻率能促進(jìn)生長[10]。然而，以往研究中多見于單獨(dú)添加膽固醇或卵磷脂對甲殼動物蛻殼的影響[5-9]，在飼料中同時添加膽固醇和卵磷脂的報道較少。

飼料中添加乳化劑能促使脂類進(jìn)一步分散形成乳化微粒，增大油脂與脂肪酶和腸黏膜細(xì)胞的接觸面積，提高脂類的消化吸收[11]。卵磷脂除營養(yǎng)作用外，還作為乳化劑添加在飼料中，但其乳化作用有限[12]。飼料中添加乳化能力更強(qiáng)的物質(zhì)能否通過提高甲殼動物對脂類物質(zhì)的消化吸收，進(jìn)而促進(jìn)蛻殼過程值得研究。近年來，一些枯草芽孢桿菌菌株經(jīng)次級代謝產(chǎn)生的脂肽類物質(zhì)——表面活性素(surfactin)因其很強(qiáng)的乳化能力，引起了人們的極大關(guān)注；其分子結(jié)構(gòu)由13～15個碳原子組成的脂肪酸鏈和由7個氨基酸殘基組成的肽鏈構(gòu)成，其中脂肪酸鏈及肽鏈上的L-Leu2、D-Leu3、L-Val4、D-Leu6和L-Leu7構(gòu)成其親油基團(tuán)，環(huán)鏈骨架與L-Glu1和L-Asp52個酸性氨基酸殘基構(gòu)成親水基團(tuán)，使其在較低的濃度下就可以聚集在一起形成膠束，具有優(yōu)良的乳化特性，是目前已知的最強(qiáng)的生物表面活性劑之一[13-15]。本課題組以往的研究表明，飼料中添加表面活性素能夠促進(jìn)魚體內(nèi)脂肪的消化吸收，提高肝臟的抗氧化能力[15-16]。凡納濱對蝦蛻殼間期的肝胰腺抗氧化能力降低，容易造成機(jī)體應(yīng)激[17-19]，改善凡納濱對蝦肝胰腺抗氧化能力對蛻殼和生長具有重要意義。飼料中添加表面活性素能否對凡納濱對蝦蛻殼間期和肝胰腺抗氧化能力產(chǎn)生作用還鮮見報道。因此，本試驗(yàn)以凡納濱對蝦為試驗(yàn)動物，研究不同膽固醇和卵磷脂水平對蛻殼間期的影響，以及在適宜膽固醇和卵磷脂水平的飼料中添加不同水平表面活性素后蛻殼間期及肝胰腺抗氧化能力的變化，以期為凡納濱對蝦蛻殼的營養(yǎng)調(diào)控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計

試驗(yàn)一：試驗(yàn)一在集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院生態(tài)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。凡納濱對蝦蝦苗暫養(yǎng)2周后，將100尾均重為(0.61±0.02) g健康無病、規(guī)格均勻的凡納濱對蝦隨機(jī)分為10組，每組10個重復(fù)，每個重復(fù)1尾蝦。9個試驗(yàn)組(D1～D9組)分別飼喂添加0.2%、0.4%和0.6%膽固醇與1.0%、2.0%和3.0%卵磷脂的9種試驗(yàn)飼料，對照組(D10組)飼喂未添加膽固醇和和卵磷脂的基礎(chǔ)飼料。試驗(yàn)期為35 d。

試驗(yàn)二：試驗(yàn)二在集美大學(xué)水產(chǎn)試驗(yàn)場進(jìn)行。凡納濱對蝦蝦苗暫養(yǎng)2周后，將90尾均重為(0.48±0.03) g健康無病、規(guī)格均勻的凡納濱對蝦隨機(jī)分為6組，每組15個重復(fù)，每個重復(fù)1尾蝦。對照組飼喂試驗(yàn)一中膽固醇和卵磷脂水平分別為0.4%和2.0%的試驗(yàn)飼料，5個表面活性素添加組分別飼喂在對照組飼料基礎(chǔ)上添加10、20、40、80和160 mg/kg表面活性素的試驗(yàn)飼料。試驗(yàn)期為28 d。

1.2 飼料組成與飼養(yǎng)管理

以魚粉、豆粕和谷朊粉為蛋白質(zhì)源，魚油和豆油為脂肪源配制試驗(yàn)飼料，試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。飼料原料粉碎過60目篩，原料采用逐級擴(kuò)大法混合，再加入魚油、豆油和水混合均勻，用雙螺桿制粒機(jī)(CD4×1TS型，華南理工大學(xué)科技實(shí)業(yè)總廠)擠壓成直徑為0.8 mm的顆粒料，自然風(fēng)干后，置于自封袋中，-20 ℃冷凍保存?zhèn)溆?。膽固醇和卵磷脂均購于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，分析純級。表面活性素由福建正源有限公司提供，有效含量?0%。

1.3 飼養(yǎng)管理

凡納濱對蝦暫養(yǎng)期間，飼養(yǎng)于350 L水體的圓形養(yǎng)殖缸(直徑100 cm，高85 cm)中，每日投喂3次基礎(chǔ)飼料，定時吸污、換水。試驗(yàn)期間凡納濱對蝦養(yǎng)殖于裝有24 h持續(xù)增氧的2 L透明塑料燒杯中，每天08:30、12:30和18:30飽食投喂。投喂0.5 h后吸出殘料和糞便，換水約1/3。試驗(yàn)用水為試驗(yàn)場新鮮海水，鹽度為24‰～28‰，pH 8.0～8.2，亞硝酸鹽含量低于0.02 mg/L，氨氮含量低于0.2 mg/L，增氧機(jī)持續(xù)增氧。光照為自然光源和熒光燈，光照周期為12明(L)：12暗(D)。試驗(yàn)期間每日00：00—08：00每隔2 h觀察蛻殼情況，08:00—24：00每隔4 h觀察蛻殼情況，及時吸出外殼并做好記錄。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) %

預(yù)混料為每千克飼料提供Premix supplied the following per kg of diets：Ca(H2PO4)2·H2O 20 000 mg，NaH2PO4·2H2O 5 000 mg，KH2PO48 000 mg，乳酸鈣 calcium lactate 5 000 mg，KCl 1 000 mg，NaCl 1 000 mg，MgSO4·7H2O 6 000 mg，檸檬酸鐵 ferric citrate 800 mg，CuSO4·5H2O 24 mg，ZnSO4·7H2O 190 mg，MnSO4·4H2O 100 mg，CoSO4·7H2O 50 mg，KI 8 mg，Na2SeO32 mg，Al(SO4)3·18H2O 25 mg，纖維素 cellulose 30 030.6 mg，VA 10 mg，VD 10 mg，VC 2 000 mg，VK 40 mg，VE 500 mg，VB160 mg，VB270 mg，VB680 mg，VB120.4 mg，煙酸 nicotinic acid 200 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 200 mg，生物素 biotin 2 mg，肌醇 inositol 500 mg，葉酸 folic acid 8 mg，對氨基苯甲酸鈉 para-aminobenzoic acid sodium salt 90 mg，蘇氨酸 Ser 47.48 mg，甘氨酸 Gly 359.80 mg，纈氨酸 Val 288.49 mg，蛋氨酸 Met 81.86 mg，亮氨酸 Leu 54.93 mg，酪氨酸 Tyr 16.01 mg，賴氨酸 Lys 173.71 mg，組氨酸 His 16.19 mg，氯化膽堿 choline chloride 50 000 mg，酵母核酸 nucleic acid 10 000 mg，褐藻酸鈉 sodium alginate 10 000 mg，防霉劑 mold inhibitor 1 500 mg，抗氧化劑 antioxidant 500 mg。

1.4 樣品采集與組織勻漿的制備

試驗(yàn)二養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后禁食24 h采集樣品，摘取肝胰腺放入凍存管置于-80 ℃下備用。稱取0.1 g肝胰腺組織，按重量(g)∶體積(mL)=1∶9加入0.86%冰冷的生理鹽水，用勻漿機(jī)連續(xù)勻漿3～5次。最后把制備好的組織勻漿在4 ℃離心機(jī)下離心(3 000 r/min，10 min)，將上清液進(jìn)行分裝以備待用。

1.5 測定指標(biāo)和方法

蛻殼間期為相鄰2次蛻殼的時間間隔(h)，參考龍曉文等[20]和關(guān)建義等[21]的方法，計算每尾蝦試驗(yàn)開始1周后前3次脫殼的平均時間間隔。

凡納濱對蝦肝胰腺的總抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、過氧化氫酶(catalase,CAT)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測定。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2003整理后，采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。試驗(yàn)一中數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行雙因素方差分析(two-way ANOVA)，試驗(yàn)二中數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，顯著水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中膽固醇和卵磷脂水平對凡納濱對蝦蛻殼間期的影響

由表2可知，飼料中膽固醇水平可顯著影響凡納濱對蝦的蛻殼間期(P<0.05)，卵磷脂水平對凡納濱對蝦蛻殼間期的影響不顯著(P>0.05)；飼料中膽固醇和卵磷脂水平對蛻殼間期的影響存在顯著的交互作用(P<0.05)。D2、D5和D6組凡納濱對蝦的蛻殼間期顯著低于除D1和D7組外的其他各組(P<0.05)，其中D5組蛻殼間期最短。

表2 飼料中膽固醇和卵磷脂水平對凡納濱對蝦蛻殼間期的影響Table 2 Effects of dietary cholesterol and lecithin levels on intermolt period of Pacific white shrimp h

同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

In the same column, values with the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05).

2.2 飼料中添加表面活性素對凡納濱對蝦蛻殼間期的影響

由表3可知，與對照組相比，僅10 mg表面活性素添加組顯著縮短凡納濱對蝦蛻殼間期(P<0.05)，20、40、80和160 mg/kg表面活性素添加組與對照組間無顯著差異(P>0.05)。

表3 飼料中添加表面活性素對凡納濱對蝦蛻殼間期的影響Table 3 Effects of surfactin supplementation on intermolt period of Pacific white shrimp h

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.3 飼料中添加表面活性素對凡納濱對蝦肝胰腺抗氧化能力的影響

由表4可知，僅10 mg/kg表面活性素添加組肝胰腺T-AOC顯著高于對照組(P<0.05)，20、40、80和160 mg/kg表面活性素添加組與對照組間無顯著差異(P>0.05)；與對照組相比，各表面活性素添加組肝胰腺SOD活性顯著提高(P<0.05)，且各表面活性素添加組之間無顯著差異(P>0.05)；10和20 mg/kg表面活性素添加組肝胰腺CAT活性顯著高于對照組(P<0.05)，其他表面活性素添加組肝胰腺CAT活性則較對照組顯著降低(P<0.05)；除10 mg/kg表面活性素添加組肝胰腺GSH-Px活性與對照組無顯著差異(P>0.05)外，其他各表面活性素添加組肝胰腺GSH-Px活性均較對照組顯著升高(P<0.05)；10和20 mg/kg表面活性素添加組肝胰腺M(fèi)DA水平顯著低于對照組(P<0.05)，40、80和160 mg/kg表面活性素添加組與對照組間無顯著差異(P>0.05)。

表4 飼料中添加表面活性素對凡納濱對蝦肝胰腺抗氧化能力的影響Table 4 Effects of surfactin supplementation on antioxidant ability in hepatopancreas of Pacific white shrimp

3 討 論

3.1 飼料中膽固醇和卵磷脂水平對凡納濱對蝦蛻殼間期的影響

本研究中，飼料顯著影響蛻殼間期，且在膽固醇水平為0.4%時蛻殼間期最短。這與Tao等[22]和Sheen[2]在飼料中分別添加0.32%和0.51%膽固醇顯著提高中華絨螯蟹和鋸緣青蟹蛻殼頻率的結(jié)果類似，也與墨吉對蝦[7](Penaeusmerguiensis)和黑虎蝦[23](Penaeusmonodon)飼料中膽固醇需要量為0.5%的研究結(jié)果接近。膽固醇在蝦蟹類甲殼動物體內(nèi)不能由固醇前體從頭合成，需要外源添加來滿足需求[24]。膽固醇在對蝦體內(nèi)吸收后被Y-器官先轉(zhuǎn)化為5β-diketol，再轉(zhuǎn)化為蛻皮激素，并與位于眼柄X-器官竇腺復(fù)合體分泌的蛻皮抑制激素相互拮抗，從而調(diào)控蛻殼周期長短[25-27]。本試驗(yàn)中蛻殼間期的縮短，可能是適宜的膽固醇水平促進(jìn)了蛻皮激素的合成，抑制了蛻皮抑制激素的合成所致[28-29]，具體的作用途徑及機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

本試驗(yàn)中，飼料適宜卵磷脂水平有縮短凡納濱對蝦蛻殼間期的趨勢，適宜的卵磷脂水平為2.0%，這與Thongrod等[7]在墨吉對蝦中得出的結(jié)果一致。此外，Wang等[30]發(fā)現(xiàn)，飼料中卵磷脂水平為0.5%時對三疣梭子蟹蛻殼頻率無顯著影響，但卵磷脂水平為1%和2%水平時蛻殼頻率有升高趨勢，這與本研究結(jié)果類似。本研究中，飼料卵磷脂與膽固醇水平的交互作用對凡納濱對蝦蛻殼間期有顯著影響。這種交互作用也出現(xiàn)在美洲海螯蝦(Homarusamericanus)的研究中，即飼料中不添加卵磷脂情況下,美洲海螯蝦膽固醇的需要量為0.5%[31]，添加卵磷脂的情況下美洲海螯蝦膽固醇的需要量為0.25%[32]，這可能與卵磷脂通過乳化作用促進(jìn)膽固醇在腸道內(nèi)的消化吸收有關(guān)[33]。而Briggs等[34]在羅氏沼澤蝦飼料中分別添加0、0.5%、1.0%的膽固醇和0、5%的卵磷脂，未發(fā)現(xiàn)對蛻殼頻率的影響存在顯著交互作用，與本試驗(yàn)結(jié)果不同，這可能是對蝦種類、試驗(yàn)條件、膽固醇和卵磷脂水平等方面的差異所致，飼料中膽固醇和卵磷脂水平對凡納濱對蝦蛻殼間期產(chǎn)生交互作用的機(jī)制還有待進(jìn)一步查明。

3.2 飼料中添加表面活性素對凡納濱對蝦蛻殼間期和肝胰腺抗氧化能力的影響

本試驗(yàn)中，飼料中添加10 mg/kg表面活性素縮短了凡納濱對蝦的蛻殼間期，這可能是適量的表面活性素通過乳化作用提高了脂類的消化吸收[13-16]，尤其是促進(jìn)與蛻殼有關(guān)的膽固醇和卵磷脂在體內(nèi)貯存而縮短凡納濱對蝦蛻殼間期的。該試驗(yàn)結(jié)果與試驗(yàn)一中凡納濱對蝦的蛻殼間期結(jié)果總體上有一定差異，可能與2批蝦苗在飼養(yǎng)1周后首次蛻殼時間的早晚、蝦苗質(zhì)量的好壞及體重差異等有關(guān)，這都需要在將來的研究中進(jìn)一步證實(shí)。

正常情況下，體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除處于平衡狀態(tài)中，SOD、CAT與GSH-Px是生物體抗氧化酶系的重要酶類，對生物體內(nèi)活性氧自由基地清除起著關(guān)鍵的作用。T-AOC是衡量機(jī)體總抗氧化能力的重要指標(biāo)，機(jī)體內(nèi)MDA的水平越高表明機(jī)體脂質(zhì)受活性氧、自由基氧化損害的程度越大[35]。本試驗(yàn)中，飼料中適量添加表面活性素顯著提高凡納濱對蝦肝胰腺SOD、CAT、GSH-Px活性和T-AOC，降低MDA水平，說明表面活性素具有提高凡納濱對蝦肝胰腺抗氧化能力的作用。這與李劍[15]和翟少偉等[36]在飼料中添加50 mg/kg表面活性素提高了吉富羅非魚肝胰臟抗氧化能力的結(jié)果一致，孫秀文[16]在斜帶石斑魚(Epinepheluscoioides)幼魚上也有類似的報道。表面活性素提高水產(chǎn)動物肝臟或肝胰腺抗氧化能力可能與其分子中含有天冬氨酸和谷氨酸2種酸性氨基酸，它們與Fe2+和Cu2+螯合，降低金屬離子的催化反應(yīng)，減少自由基的生成，從而改善肝胰臟的健康狀況有關(guān)[15,36-37]。

本研究中，隨著表面活性素添加水平的升高，凡納濱對蝦蛻殼間期呈升高的趨勢，而肝胰腺抗氧化能力呈下降的趨勢。這可能與表面活性素的乳化特性有關(guān)，其在臨界膠束濃度以下時，隨著添加水平的增加乳化能力增強(qiáng)，當(dāng)添加水平超過其臨界膠束濃度后，乳化能力趨于穩(wěn)定，乳化效果不再增強(qiáng)[38-39]。

4 結(jié) 論

① 本試驗(yàn)條件下，飼料中膽固醇水平及其與卵磷脂水平的交互作用可顯著影響凡納濱對蝦蛻殼間期，膽固醇和卵磷脂水平分別為0.4%和2.0%時蛻殼間期最短。

② 在膽固醇和卵磷脂水平分別為0.4%和2.0%的飼料中添加10 mg/kg表面活性素可縮短凡納濱對蝦蛻殼間期，提高肝胰腺抗氧化能力。

[1] HOLME M H,ZENG C S,SOUTHGATE P C.The effects of supplemental dietary cholesterol on growth,development and survival of mud crab,Scyllaserrata,megalopa fed semi-purified diets[J].Aquaculture,2006,261(4):1328-1334.

[2] SHEEN S S.Dietary cholesterol requirement of juvenile mud crab Scylla serrata[J].Aquaculture,2000,189(3/4):277-285.

[3] 楊建梅,王安利,肖濤,等.飼料中卵磷脂對養(yǎng)殖水生動物生理的影響[J].海洋湖沼通報,2006(4):101-106.

[4] D’ABRAMO L R,BAUM N A.Choline requirement of the microcrustaceanMoinamacrocopa:a purified diet for continuous culture[J].The Biological Bulletin,1981,161(3):357-365.

[5] KANAZAWA A,TANAKA N,TESHIMA S,et al.Nutritional requirements of prawn.Ⅱ.Requirement for sterols[J].Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries,1971,37(3):211-215.

[6] TESHIMA S I,KANAZAWA A,KAKUTA Y.Effects of dietary phospholipids on growth and body composition of the juvenile prawn[J].Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries,1986,52(1):155-158.

[7] THONGROD S,BOONYARATPALIN M.Cholesterol and lecithin requirement of juvenile banana shrimp,Penaeusmerguiensis[J].Aquaculture,1998,161(1/2/3/4):315-321.

[8] GONG H,LAWRENCE A L,JIANG D H,et al.Lipid nutrition of juvenileLitopenaeusvannamei:Ⅰ.Dietary cholesterol and de-oiled soy lecithin requirements and their interaction[J].Aquaculture,2000,190(3/4):305-324.

[9] PAIBULKICHAKUL C,PIYATIRATITIVORAKUL S,KITTAKOOP P,et al.Optimal dietary levels of lecithin and cholesterol for black tiger prawnPenaeusmonodonlarvae and postlarvae[J].Aquaculture,1998,167(3/4):273-281.

[10] 王克行.蝦蟹類增養(yǎng)殖學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1997:154-155.

[11] 王紀(jì)亭,宋憬愚,李海濤,等.乳化劑對建鯉生長及血液生化指標(biāo)的影響[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報,2009,24(3):257-260.

[12] 卿蘭才,高來,劉學(xué)進(jìn),等.乳化劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].飼料與畜牧,2009(7):58-60.

[13] MAKKAR R S,CAMEOTRA S S.Biosurfactant production by a thermophilicBacillussubtilisstrain[J].Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology,1997,18(1):37-42.

[14] 張?zhí)靹?生物表面活性劑及其應(yīng)用[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:3-6.

[15] 李劍.表面活性素在吉富羅非魚飼料中的應(yīng)用研究[D].碩士學(xué)位論文.廈門:集美大學(xué),2015.

[16] 孫秀文.飼料中添加表面活性素對斜帶石斑魚幼魚生長性能、脂肪代謝及肝臟健康的影響[D].碩士學(xué)位論文.廈門:集美大學(xué),2016.

[17] 姜令緒.環(huán)境因子對甲殼動物免疫力和抗氧化酶活力的影響[D].碩士學(xué)位論文.青島:中國海洋大學(xué),2004.

[18] MYKLES D L,HAIRE M F,SKINNER D M.Immunocytochemical localization of actin and tubulin in the integument of land crab (Gecarcinuslateralis) and lobster (Homarusamericanus)[J].Journal of Experimental Zoology Part A,2000,286(4):329-342.

[19] 王建梅,王維娜,王安利,等.鹽度脅迫下維生素E對南美白對蝦體內(nèi)抗氧化物質(zhì)含量的影響[J].水產(chǎn)養(yǎng)殖,2003,24(5):33-36.

[20] 龍曉文,吳旭干,劉智俊,等.鹽度對脊尾白蝦存活、生長和蛻殼的影響[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,41(23):111-115,130.

[21] 關(guān)建義,呂艷杰,張宇,等.KK-42對日本沼蝦幼蝦蛻皮周期的影響及其可能機(jī)制[J].水產(chǎn)學(xué)報,2016,40(6):867-872.

[22] TAO X,WANG C,WEI H,et al.Effects of dietary cholesterol levels on moulting performance,lipid accumulation,ecdysteroid concentration and immune enzymes activities of juvenile Chinese mitten crabEriocheirsinensis[J].Aquaculture Nutrition,2014,20(5):467-476.

[23] SMITH D M,TABRETT S J,BARCLAY M C.Cholesterol requirement of subadult black tiger shrimpPenaeusmonodon(Fabricius)[J].Aquaculture Research,2001,32(Suppl.1):399-405.

[24] NRC.Nutrient requirements of fish and shrimp[S].Washington,D.C.:National Academy Press,2011.

[25] 黃姝.實(shí)驗(yàn)室條件下中華絨螯蟹成蟹的蛻殼、生長觀察與蛻皮激素受體基因的克隆、表達(dá)分析[D].碩士學(xué)位論文.上海:上海海洋大學(xué),2014.

[26] CHANG E S,MYKLES D L.Regulation of crustacean molting:a review and our perspectives[J].General and Comparative Endocrinology,2011,172(3):323-330.

[27] MYKLES D L.Ecdysteroid metabolism in crustaceans[J].The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology,2007,127(3/4/5):196-203.

[28] HAN T,WANG J T,LI X Y,et al.Effects of dietary cholesterol levels on the growth,molt performance,and immunity of juvenile swimming crab,Portunustrituberculatus[J].The Israeli Journal of Aquaculture-Bamidgeh,2015,67:1-12.

[29] LUO X,CHEN T,ZHONG M,et al.Differential regulation of hepatopancreatic vitellogenin (VTG) gene expression by two putative molt-inhibiting hormones (MIH1/2) in Pacific white shrimp (Litopenaeusvannamei)[J].Peptides,2015,68:58-63.

[30] WANG J T,HAN T,LI X Y,et al.Effects of dietary phosphatidylcholine (PC) levels on the growth,molt performance and fatty acid composition of juvenile swimming crab,Portunustrituberculatus[J].Animal Feed Science and Technology,2016,216:225-233.

[31] CASTELL J D,COVEY J F.Dietary lipid requirements of adult lobsters,Homarusamericanus(M.E.)[J].The Journal of Nutrition,1976,106(8):1159-1165.

[32] KEAN J C,CASTELL J D,BOGHEN A G,et al.A re-evaluation of the lecitihin and cholesterol requirements of juvenile lobster (Homarusamericanus) using crab protein-based diets[J].Aquaculture,1985,47(2/3):143-149

[33] LESTER R,CAREY M C,LITTLE J M,et al.Crustacean intestinal detergent promotes sterol solubilization[J].Science,1975,189(4208):1098-1100.

[34] BRIGGS M R P,JAUNCEY K,BROWN J H.The cholesterol and lecithin requirements of juvenile prawn (Macrobrachiumrosenbergii) fed semi-purified diets[J].Aquaculture,1988,70(1/2):121-129.

[35] 施兆鴻,張艷亮,高權(quán)新,等.飼料維生素E水平影響云紋石斑魚幼魚對氨氮脅迫的響應(yīng)[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2015,27(5):1596-1604.

[36] 翟少偉,李劍,陳學(xué)豪,等.飼料中添加表面活性素對羅非魚肝胰臟生理生化指標(biāo)的影響[J].飼料研究,2015(23):46-48,54.

[39] 李翌,鄒愛華,葉汝強(qiáng),等.表面活性素分子結(jié)構(gòu)對其膠束化行為的影響[J].物理化學(xué)學(xué)報,2011,27(5):1128-1134.

*Corresponding author, associate professor, E-mail: cxzhang@jmu.edu.cn

(責(zé)任編輯 菅景穎)

Effects of Dietary Cholesterol and Lecithin Levels and Surfactin Supplementation on Intermolt Period of Pacific White Shrimp (Litopenaeusvannamei)

ZHAI Shaowei SU Baoyuan ZHANG Chunxiao*

(XiamenKeyLaboratoryforFeedQualityTestingandSafetyEvaluation,FisheriesCollegeofJimeiUniversity,Xiamen361021,China)

Two experiments were conducted to evaluate the effects of dietary cholesterol and lecithin levels on intermolt period and surfactin supplementation on intermolt period and antioxidant ability in hepatopancreas of Pacific white shrimp (Litopenaeusvannamei), respectively. In trial 1, one hundred Pacific white shrimp with an average body weight of (0.61±0.02) g were randomly divided into 10 groups with 10 replicates per group and one shrimp per replicate, and the shrimps were fed a basal diet in control group and those in 9 experimental groups were fed experimental diets supplemented with 0.2%, 0.4% and 0.6% cholesterol and 1.0%, 2.0% and 3.0% lecithin, respectively. The trial 1 lasted for 35 days. This trial was conducted to study the effects of dietary cholesterol and lecithin levels on intermolt period of Pacific white shrimp. In trial 2, ninety Pacific white shrimp with an average body weight of (0.48±0.03) g were randomly divided into 6 groups with 15 replicates per group and one shrimp per replicate, and the shrimps in control group were fed the experimental diet containing 0.4% cholesterol and 2% lecithin and those in 5 surfactin supplementation groups were fed experimental diets supplemented with 10, 20, 40, 80 and 160 mg/kg surfactin on the basis of the control group diet, respectively. The trial 2 lasted for 28 days. This trial was conducted to evaluate the effects of surfactin supplementation on intermolt period and antioxidant ability in hepatopancreas of Pacific white shrimp. The results showed as follows: the intermolt period was significantly affected by the dietary cholesterol level and the interaction between cholesterol and lecithin levels (P<0.05), but not significantly affected by dietary lecithin level (P>0.05). The intermolt period of the group fed diet with 0.4% cholesterol and 1.0% lecithin, the group fed diet with 0.4% cholesterol and 2.0% lecithin and the group fed diet with 0.6% cholesterol and 2.0% lecithin was significantly shorter than that of other groups (P<0.05), and the intermolt period of group fed diet with 0.4% cholesterol and 2.0% lecithin was the shortest among all the groups. Compared with the control group, the intermolt period of 10 mg/kg surfactin supplementation group was significantly shortened (P<0.05), and the total antioxidant capacity in hepatopancreas was significantly increased (P<0.05). The superoxide dismutase activity in hepatopancreas of all surfactin supplementation groups was significantly increased compared with the control group (P<0.05). Compared with the control group, the catalase activity in hepatopancreas of 10 and 20 mg/kg surfactin supplementation groups was significantly increased (P<0.05), while that of the other surfactin supplementation groups was significantly decreased (P<0.05). The glutathione peroxidase activity in hepatopancreas of all surfactin supplementation groups (except the 10 mg/kg surfactin supplementation group) was significantly higher than that of control group (P<0.05). The malondialdehyde level in hepatopancreas of 10 and 20 mg/kg surfactin supplementation groups was significantly decreased compared with the control group (P<0.05). In conclusion, under the present trial condition, dietary cholesterol level and the interaction between cholesterol and lecithin levels can significantly affect the intermolt period of Pacific white shrimp, and the shortest intermolt period is obtained when dietary cholesterol and lecithin level are 0.4% and 2.0%, respectively. The 10 mg/kg surfactin supplemented in the diet with 0.4% cholesterol and 2.0% lecithin can shorten the intermolt period and improve the antioxidant ability in hepatopancreas of Pacific white shrimp.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(7)：2460-2467]

cholesterol; lecithin; surfactin; Pacific white shrimp; intermolt period

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.07.030

2016-12-05

農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)專項子項目“甲殼類代表種對蝦的新蛋白源飼料開發(fā)、養(yǎng)殖效果及產(chǎn)業(yè)推廣”(201303053)

翟少偉(1973—)，男，河北晉州人，副教授，博士，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料。E-mail: shaoweizhai@163.com

*通信作者：張春曉，副教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail: cxzhang@jmu.edu.cn

S963

A

1006-267X(2017)07-2460-08