全二維氣相色譜–飛行時(shí)間質(zhì)譜分析紫藤種子提取物及其殺蚜活性研究

曹先爽，王 進(jìn)，宋 麗，姜 浩,2，姚 曦，湯 鋒，岳永德

(1 國(guó)際竹藤中心 國(guó)家林業(yè)局竹藤科學(xué)與技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100102；2 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 茶樹(shù)生物學(xué)與資源利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230036)

全二維氣相色譜–飛行時(shí)間質(zhì)譜分析紫藤種子提取物及其殺蚜活性研究

曹先爽1，王 進(jìn)1，宋 麗1，姜 浩1,2，姚 曦1，湯 鋒1，岳永德1

(1 國(guó)際竹藤中心 國(guó)家林業(yè)局竹藤科學(xué)與技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100102；2 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 茶樹(shù)生物學(xué)與資源利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230036)

【目的】通過(guò)對(duì)紫藤Wisteria sinensis種子提取物的化學(xué)成分分析及殺蚜活性測(cè)定和抗氧化活性評(píng)價(jià)，為紫藤種子資源在植物源農(nóng)藥領(lǐng)域的利用提供基礎(chǔ)。 【方法】以紫藤種子提取物為材料，采用全二維氣相色譜–飛行時(shí)間質(zhì)譜(GC×GC-TOF/MS)技術(shù)進(jìn)行成分分析，以微量點(diǎn)滴法開(kāi)展對(duì)棉蚜Aphis gossypii的觸殺毒力測(cè)定，用2,2–二苯基–1–苦基肼(DPPH)自由基清除法進(jìn)行抗氧化活性評(píng)價(jià)。 【結(jié)果】從紫藤種子石油醚提取物中檢測(cè)到61種化合物，主要包括酯類(lèi)、烷烴類(lèi)、芳香烴類(lèi)等化合物，其中相對(duì)含量大于9%的化合物有：對(duì)二甲苯(14.33%)、十一烷(11.89%)、1,4–二乙基苯(11.02%)和癸烷(9.54%)。紫藤種子提取物對(duì)棉蚜的致死中質(zhì)量濃度(LC50)為193.22 mg·L–1(處理后24 h)。同時(shí)，紫藤種子提取物具有抗氧化活性，對(duì)DPPH的抑制中質(zhì)量濃度(IC50)為4.15 g·L–1。 【結(jié)論】紫藤種子提取物具有較強(qiáng)的殺蚜活性，有望作為植物源殺蚜劑用于棉蚜的防治。

紫藤；種子提取物；全二維氣相色譜–飛行時(shí)間質(zhì)譜；化學(xué)成分；觸殺活性；棉蚜；抗氧化活性

植物源農(nóng)藥具有環(huán)境友好、低毒和不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點(diǎn)，是一種理想的生物農(nóng)藥，越來(lái)越受到關(guān)注。紫藤Wisteria sinensis是紫藤屬的藤本植物，在我國(guó)分布廣泛，資源豐富[1-2]。紫藤提取物具有抗氧化[3-4]、抑菌[5-6]、抗炎[7]和抗腫瘤[8]等生物活性，其中紫藤花提取物的抗氧化能力與其含有的總酚和總黃酮含量呈正相關(guān)[9]。在病蟲(chóng)害防治方面，Hirashiki等[10]報(bào)道了紫藤種子中含有的蛋白酶抑制劑在植物防御病蟲(chóng)害中擔(dān)當(dāng)重要角色。目前，對(duì)紫藤植物的花、莖和葉等部位的生物活性及化學(xué)成分的研究都有涉及，但對(duì)紫藤種子的研究相對(duì)較少[11-14]。在民間，紫藤種子晾干搗碎，經(jīng)水浸泡后的浸出液，可作為土農(nóng)藥用于殺蟲(chóng)[15]。據(jù)《本草拾遺》記載，紫藤種子味甘、性溫、有小毒。高希武[16]報(bào)道了紫藤種子的丙醇提取物對(duì)蘋(píng)果蠢蛾Cydia pomonella幼蟲(chóng)有毒性。陳凡等[17]從紫藤種子的蛋白粗提液中得到了紫藤凝集素，主要含有谷氨酸、天冬氨酸。朱立成[18]利用離子交換層析、凝膠過(guò)濾等色譜技術(shù)，從紫藤種子中分離純化出2種新的抗真菌肽，命名為WsAFP1和WsAFP2，它們對(duì)油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum和煙草赤星病菌Alternaria alternata的生長(zhǎng)具有抑制作用。棉蚜Aphis gossypii是一種重要的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)，對(duì)棉花等多種農(nóng)作物均有危害作用。它不僅吸食植物汁液，破壞植物生長(zhǎng)，還能傳播植物病毒病，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重的損失[19-20]。在生產(chǎn)中，常用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行棉蚜的防治，但容易造成棉蚜的抗藥性以及農(nóng)藥殘留等問(wèn)題，因此，利用植物源農(nóng)藥進(jìn)行棉蚜害蟲(chóng)的防治值得研究。本研究利用全二維氣相色譜–飛行時(shí)間質(zhì)譜(GC×GC-TOF/ MS)分析了紫藤種子石油醚提取物的化學(xué)成分，并評(píng)價(jià)了紫藤種子提取物對(duì)棉蚜的觸殺活性及抗氧化能力，旨在為紫藤種子提取物作為植物源農(nóng)藥應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

紫藤種子于2015年10月從北京中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院采集，在室內(nèi)自然風(fēng)干，從紫藤莢中取出種子并粉碎，置于–20 ℃冰柜中備用。

甲醇、正己烷(色譜純)，美國(guó)Fisher公司產(chǎn)品；吡蟲(chóng)啉，純度為96%(w)，國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心產(chǎn)品；2,6–二叔丁基–4–甲基苯酚(butylated hydroxytoluene，BHT)和2,2–二苯基–1–苦基肼(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，DPPH)，美國(guó)Sigma-Aldrich公司產(chǎn)品；丙酮、乙酸乙酯、石油醚 (分析純)，北京化工廠產(chǎn)品。

1.2 供試蚜蟲(chóng)

供試棉蚜生活于棉花幼苗葉片表面，于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱溫度為(28±1)℃，相對(duì)濕度(RH)為70%±5%，光周期為16 h光照∶8 h黑暗。

1.3 紫藤種子提取物制備

取粉碎后紫藤種子樣品100 g 于700 mL石油醚中，超聲波提取30 min，重復(fù)提取3次，合并提取液，經(jīng)布氏漏斗抽濾，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(45 ℃)中濃縮去除石油醚相，濃縮后的提取物為黃色油狀物。取10 μL的紫藤種子提取物溶于1 mL正己烷中，用GC×GC-TOF/MS分析。

1.4 紫藤種子提取物的色譜層析餾分

將紫藤種子石油醚提取物用硅膠柱色譜分離，在玻璃柱(內(nèi)徑26 mm、柱長(zhǎng)500 mm)填充硅膠(200～300 目，青島海洋化工廠產(chǎn)品)后，按照質(zhì)量比1∶10的比例上樣，分別用石油醚、石油醚+乙酸乙酯(二者體積比為7∶3)、乙酸乙酯、乙酸乙酯+甲醇(二者體積比為6∶4)、乙酸乙酯+甲醇(二者體積比為2∶8)、甲醇進(jìn)行梯度洗脫，每個(gè)梯度使用2倍柱體積(柱體積約為200 mL)的洗脫液，收集每個(gè)梯度的餾分，在45 ℃條件下減壓濃縮，然后分別對(duì)每個(gè)餾分進(jìn)行殺蚜活性評(píng)價(jià)。

1.5 GC×GC-TOF/MS分析

利用Pegasus 4D全二維氣相色譜–飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行樣品分析，儀器由美國(guó)LECO公司生產(chǎn)，分析條件：進(jìn)樣口及傳輸線溫度設(shè)為 240 和 280 ℃；進(jìn)樣量1 μL；色譜柱為一維柱，即Rxi-5 Sil MS石英毛細(xì)柱(內(nèi)徑0.25 mm×柱長(zhǎng)30 m，膜厚0.25 μm)，二維柱即Rxi-17 Sil MS石英毛細(xì)柱(內(nèi)徑0.18 mm×柱長(zhǎng)2 m，膜厚0.18 μm)。一維柱升溫程序：50 ℃保持0.2 min，以8.0 ℃·min–1速度升至280 ℃；二維柱爐溫補(bǔ)償5 ℃；熱脈沖0.8 s，調(diào)制周期4.0 s；載氣為高純氦氣1.0 mL·min–1；載氣分流比為50∶ 1。質(zhì)譜參數(shù)：離子源溫度 250 ℃；檢測(cè)器電壓1 420 V；質(zhì)量掃描范圍(m/z)33～550；采集頻率100 spec·s–1。

1.6 觸殺活性測(cè)定

采用微量點(diǎn)滴法進(jìn)行棉蚜觸殺活性的測(cè)定[21]，在棉花幼苗葉片上，用毛筆剔除若蟲(chóng)，選取健康活潑、大小一致的無(wú)翅成蚜(≥30頭)為供試對(duì)象，將紫藤種子提取物溶于丙酮溶劑中，采用倍半稀釋法將供試溶液的質(zhì)量濃度配成500.00、250.00、125.00、62.50和31.25 mg·L–1，用Burkard-900X型自動(dòng)微量施藥器對(duì)棉蚜背部進(jìn)行點(diǎn)滴施藥，設(shè)置丙酮溶劑為空白對(duì)照，吡蟲(chóng)啉為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次，然后用濕棉花包住葉柄保濕，放在培養(yǎng)皿(內(nèi)徑9.0 cm×高1.5 cm)中，將培養(yǎng)皿放置在光照培養(yǎng)箱中[θ=(28±1) ℃、RH=(70±5) %、光周期為16 h光照∶8 h黑暗]培養(yǎng)，24 h后檢查蚜蟲(chóng)死亡情況，并計(jì)算校正死亡率和致死中濃度(Median lethal concentration，LC50)。

1.7 紫藤石油醚提取物的抗氧化活性測(cè)定

采用Epidata 3.2進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查數(shù)據(jù)錄入，采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。定量資料比較采用t檢驗(yàn)和方差分析，兩兩比較釆用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

采用DPPH自由基清除法，評(píng)價(jià)紫藤提取物的抗氧化活性[22]，以乙醇為溶劑，分別配制0.125 mmol·L–1的DPPH溶液、10 mg·mL–1的紫藤提取物溶液和0.5 mg·mL–1的陽(yáng)性對(duì)照BHT的溶液，分別取上述樣品0.60、0.50、0.30、0.10和0.07 mL，加入乙醇定容至1 mL后，再加入2 mL DPPH，混合搖勻，以乙醇溶劑為空白對(duì)照，BHT為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次，在37 ℃搖床上反應(yīng)30 min，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定樣品在517 nm的光密度(D517nm)。

1.8 數(shù)據(jù)處理

1.8.1 棉蚜死亡率和校正死亡率 棉蚜死亡率和校正死亡率計(jì)算公式：死亡率=死亡蟲(chóng)數(shù)/總蟲(chóng)數(shù)×100%，校正死亡率=(處理組死亡率–對(duì)照組死亡率)/(1–對(duì)照組死亡率)×100%。

差異顯著性分析用統(tǒng)計(jì)軟件(Statistical product and service solutions, SPSS)在P=0.05時(shí)用單因素方差分析和鄧肯顯著性檢驗(yàn)，殺蟲(chóng)活性的致死中濃度(LC50)根據(jù)概率回歸分析計(jì)算。

1.8.2 DPPH自由基清除率 DPPH自由基清除率=(D0–D1)/D0×100%，其中：D0為空白對(duì)照樣品的光密度；D1為處理樣品的光密度。計(jì)算結(jié)果用于制作樣品質(zhì)量濃度和自由基清除率相關(guān)的曲線，并根據(jù)該曲線的回歸模型計(jì)算出抑制中濃度(Half maximal inhibitory concentration, IC50)，IC50的數(shù)值越小，所表征出的活性越高。

2 結(jié)果與分析

2.1 紫藤種子提取物的GC×GC-TOF/MS分析結(jié)果

表1 紫藤種子石油醚提取物化學(xué)成分全二維氣相色譜–飛行時(shí)間質(zhì)譜分析Tab. 1 Chemical compounds identified from the petroleum ether extract of Wisteria sinensis seeds by GC×GC-TOF/MS

續(xù)表 1 Tab. 1 continued

2.2 紫藤種子提取物及其洗脫餾分的殺蚜活性篩選

采用微量點(diǎn)滴法，對(duì)供試的紫藤種子提取物及其不同洗脫餾分進(jìn)行殺蟲(chóng)活性評(píng)價(jià)，計(jì)算每個(gè)供試樣品在處理24 h后的棉蚜死亡率，結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，紫藤種子石油醚提取物具有較好的殺蚜活性，在處理質(zhì)量濃度為500 mg·L–1時(shí)，蚜蟲(chóng)的死亡率達(dá)到80.33%。通過(guò)硅膠柱對(duì)紫藤種子石油醚提取物進(jìn)行色譜分離，獲得了6個(gè)色譜洗脫餾分(表2中編號(hào)1～6)，在不同餾分的殺蚜活性篩選中，發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯+甲醇(二者體積比為2∶8)洗脫餾分的殺蟲(chóng)活性最高，棉蚜的死亡率達(dá)到85.80%，說(shuō)明紫藤種子石油醚提取物中的殺蚜活性組分，主要集中在該餾分，因此，進(jìn)一步對(duì)乙酸乙酯+甲醇(二者體積比為2∶8)洗脫餾分和紫藤種子石油醚提取物進(jìn)行毒力回歸分析。

表2 紫藤種子提取物及其不同洗脫餾分處理24 h后的殺蚜活性Tab. 2 Insecticidal activity of the seed extract of Wisteria sinensis and different elution fractions against Aphis gossypii after 24 h treatment

2.3 紫藤種子提取物對(duì)棉蚜的觸殺毒力回歸分析

將紫藤種子石油醚提取物和乙酸乙酯+甲醇(二者體積比為2∶8)洗脫餾分的樣品對(duì)棉蚜的觸殺生物活性進(jìn)行毒力回歸分析，并與陽(yáng)性對(duì)照吡蟲(chóng)啉進(jìn)行比較，分析結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可知，供試的紫藤種子石油醚提取物及其洗脫餾分，均對(duì)棉蚜蟲(chóng)有較好的觸殺作用，其致死中濃度(LC50)分別為193.22和86.88 mg·L–1。用LC50值表征紫藤種子提取物的觸殺能力，LC50值越小代表觸殺能力越強(qiáng)，紫藤種子石油醚提取物的LC50值是農(nóng)藥吡蟲(chóng)啉LC50值的15倍，但作為植物源提取物來(lái)說(shuō)，其殺蟲(chóng)活性值得研究。

表3 紫藤種子石油醚提取物及洗脫餾分對(duì)棉蚜24 h的觸殺活性Tab. 3 Contact toxicity of petroleum ether extract of Wisteria sinensis seeds and the elution fraction against Aphis gossypii after 24 h treatment

2.4 紫藤石油醚提取物的抗氧化活性

采用DPPH自由基清除法，測(cè)定紫藤種子石油醚提取物的抗氧化活性，以BHT為陽(yáng)性對(duì)照，結(jié)果見(jiàn)表4。從表4看出，在試驗(yàn)設(shè)置的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，紫藤種子石油醚提取物的質(zhì)量濃度與其抗氧化活性呈線性關(guān)系(R2≥0.968 8)，紫藤石油醚提取物具有一定的抗氧化能力，其抑制中濃度(IC50)為4.15 g·L–1。用IC50表征紫藤種子石油醚提取物的抗氧化能力，IC50越小所表征的抗氧化能力越強(qiáng)。

表4 紫藤種子石油醚提取物的抗氧化活性Tab. 4 Antioxidant activity of the petroleum ether extract of Wisteria sinensis seeds

3 討論與結(jié)論

在紫藤種子提取物的化學(xué)成分分析中，發(fā)現(xiàn)一些化合物的保留時(shí)間相似，在一維色譜中難以分開(kāi)，而在二維色譜中能夠較好地分離，結(jié)合飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行定性，鑒定結(jié)果的可靠度更高。徐敬東[5]采用氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)分析了紫藤種子超臨界CO2提取物，鑒定出了21種化合物，相對(duì)含量較高的為亞油酸(62.13%)和十六碳烯酸(17.46%)，從水蒸氣蒸餾法制備的紫藤提取物中，鑒定出47種化合物，相對(duì)含量較高的化合物為棕櫚酸(19.10%)和油酸(7.58%)。上述研究結(jié)果與本研究中的紫藤種子提取物成分差異較大，可能由于種子產(chǎn)地來(lái)源以及提取工藝方法的不同，造成了檢出化學(xué)成分的差異。另外，紫藤植物不同組織部位的化學(xué)成分也存在差異，如，金振國(guó)等[23]采用GC-MS分析紫藤莢提取物的化學(xué)成分，其中2,3–環(huán)氧基–1–丁醇和乙酸乙酯的相對(duì)含量較高。Mohamed 等[8]從紫藤葉甲醇提取物中分離鑒定出9種化合物，其中6種為黃酮類(lèi)化合物。植物化學(xué)成分是其生物活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，上述結(jié)果對(duì)于紫藤的生物活性研究具有重要意義。

本研究采用GC×GC-TOF/MS技術(shù)對(duì)紫藤種子石油醚提取物進(jìn)行分析，共鑒定出61種成分，相對(duì)含量較高的成分有：對(duì)二甲苯(14.33%)、十一烷(11.89%)和1,4–二乙基苯(11.02%)等。李軻軻等[24]研究了二甲苯對(duì)蚜蟲(chóng)的行為反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)二甲苯在較低劑量時(shí)就可以引起蚜蟲(chóng)死亡。另外，楊紅等[25]研究表明，二甲苯以 φ 為 4%的體積分?jǐn)?shù)，就能對(duì)菜青蟲(chóng)細(xì)胞產(chǎn)生78%的致死率。因此，本研究中紫藤種子提取物中相對(duì)含量較高的對(duì)二甲苯對(duì)殺蚜活性起到重要作用。

本研究表明，紫藤種子石油醚提取物對(duì)棉蚜蟲(chóng)有較好的觸殺作用，其LC50為193.22 mg·L–1，通過(guò)對(duì)紫藤種子提取物的硅膠柱色譜分離表明，其殺蚜活性成分集中在乙酸乙酯+甲醇(二者體積比為2∶8)的洗脫餾分，有文獻(xiàn)報(bào)道，從駱駝蓬Peganum harmala中分離出的駱駝蓬堿具有較好的殺蟲(chóng)活性，合成制備的2種駱駝蓬堿單體化合物對(duì)芥末蚜蟲(chóng)的LC50為53.16和68.05 mg·L–1(處理48 h)[26]。華北白前Cynanchum mongolicum精油對(duì)大豆蚜蟲(chóng)的LC50為37.8 μL·mL–1(處理24 h)[27]。和紫藤植物一樣，華北白前和駱駝蓬2種植物也在民間用于殺蟲(chóng)。本研究中，紫藤種子石油醚提取物具有一定的抗氧化能力，其IC50為4.15 g·L–1。一般來(lái)說(shuō)，植物源農(nóng)藥具有穩(wěn)定性差、易降解的特點(diǎn)，通過(guò)加入抗氧化劑來(lái)清除氧自由基或阻斷鏈?zhǔn)阶杂苫趸磻?yīng)，是增加或改善植物源農(nóng)藥穩(wěn)定性的方法之一[28]。本研究表明，紫藤種子提取物具有一定的抗氧化活性，將有助于其制劑的穩(wěn)定性。因此，紫藤種子石油醚提取物具有開(kāi)發(fā)成植物源殺蚜劑的潛力。

[1]蔣新龍. 紫藤紅色素的提取工藝及性質(zhì)研究[J]. 浙江樹(shù)人大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2010, 10(1): 10-15.

[2]戴振倫, 程傳宏, 馬維軍, 等. ?？悼h紫藤資源調(diào)研初報(bào)[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 34(S1): 228-230.

[3]OH W G, JANG I C, JEON G I, et al. Antioxidative activity of extracts from Wisteria floribunda flowers[J]. J Korean Soc Food Sci Nutr, 2008, 37(6): 677-683.

[4]李會(huì)端. 酶解法提取紫藤總黃酮及自由基清除活性研究[J]. 河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2014, 42(3): 79-84.

[5]徐敬東 紫.藤提取物抑真菌活性及其化學(xué)成分研究[D].合肥: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué), 2014.

[6]姜艷華, 樊曉暉, 姜華. 紫藤活性成分的提取與抑菌作用初探[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009, 38(3): 60-62.

[7]TAI B H, TRUNG T N, NHIEM N X. A new flavan-3-ol and the anti-inflammatory effect of flavonoids from the fruit peels of Wisteria floribunda[J]. J Asian Nat Prod Res, 2011, 13(11): 1061-1068.

[8]MOHAMED M A, HAMED M M, ABDOU A M, et al. Antioxidant and cytotoxic constituents from Wisteria sinensis[J]. Molecules, 2011, 16(12): 4020-4030.

[9]傅茂潤(rùn), 王曉, 陳慶敏, 等. 紫藤花提取物的抗氧化作用[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2009, 35(12): 82-85.

[10]HIRASHIKI I, OGATA F, YOSHIDA N, et al. Puri-fication and complex formation analysis of a cysteine proteinase inhibitor (cystatin) from seeds of Wisteria floribunda[J]. J Biochem, 1990, 108(4): 604-608.

[11]董愛(ài)文, 向中, 王國(guó)慶. 不同處理的紫藤花萼中黃色素提取及理化性質(zhì)研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2014, 35(7): 255-259.

[12]宋曉, 姜國(guó)良, 趙雪梅. 紫藤根莖葉化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2013, 34(11): 832-835.

[13]吳培云, 劉勁松, 陳愛(ài)民, 等. 紫藤瘤提取物抗病原真菌活性研究[J]. 中成藥, 2012, 34(10): 2018-2020.

[14]許應(yīng)生, 吳培云, 劉勁松, 等. 紫藤瘤不同溶劑提取部位抗農(nóng)作物病原真菌活性研究[J]. 廣西植物, 2013, 33 (1): 133-135.

[15]王利民. 如何自制植物性殺蟲(chóng)劑[J]. 中國(guó)花卉盆景, 2001(6): 21.

[16]高希武. 介紹幾種殺蟲(chóng)植物[J]. 農(nóng)藥, 1987(2): 44.

[17]陳凡, 陳海芳, 傅俊. 紫藤凝集素的分離純化及理化性質(zhì)研究[J]. 武漢植物學(xué)研究, 1994, 12(3): 270-276.

[18]朱立成. 中國(guó)紫藤種子抗真菌肽的研究[D]. 上海: 中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院, 2010.

[19]KOO H N, AN J J, PARK S E, et al. Regional susceptibilities to 12 insecticides of melon and cotton aphid, Aphis gossypii (Hemiptera: Aphididae) and a point mutation associated with imidacloprid resistance[J]. Crop Prot, 2014, 55(1): 91-97.

[20]胡道武, 高雪珂, 張帥, 等. 棉蚜寄主植物與棉平突蚜繭蜂寄生選擇的關(guān)系[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào), 2016, 32 (5): 581-586.

[21]JIANG H, WANG J, SONG L, et al. GC×GC-TOFMS analysis of essential oils composition from leaves, twigs and seeds of Cinnamomum camphora L. Presl and their insecticidal and repellent activities[J]. Molecules, 2016, 21(4): 423.

[22]WANG J, CAO X, JIANG H, et al. Antioxidant activity of leaf extracts from different Hibiscus sabdariffa accessions and simultaneous determination five major antioxidant compounds by LC-Q-TOF-MS[J]. Molecules, 2014, 19(12): 21226-21238.

[23]金振國(guó), 劉萍, 王香婷. 氣相色譜/質(zhì)譜法分析紫藤莢揮發(fā)油化學(xué)成分[J]. 商洛學(xué)院學(xué)報(bào), 2012, 26(4): 3-5.

[24]李軻軻, 吳孔明, 叢斌, 等. 農(nóng)藥常用有機(jī)溶劑對(duì)煙蚜、棉蚜和大豆蚜定居行為的影響[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 6(1): 67-70.

[25]楊紅, 周青春, 王家坤, 等. 利用菜青蟲(chóng)細(xì)胞檢測(cè)幾種有機(jī)溶劑和有機(jī)磷農(nóng)藥的毒力[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào), 1996, 23(1): 79-83.

[26]ZENG Y, ZHANG Y, WENG Q, et al. Cytotoxic and insecticidal activities of derivatives of harmine, a natural insecticidal component isolated from Peganum harmala[J]. Molecules, 2010, 15(11): 7775-7791.

[27]YANG W, ZHAO A, CONGAI Z, et al. Composition of the essential oil of Cynanchum mongolicum (Asclepiadaceae) and insecticidal activities against Aphis glycines (Hemiptera: Aphidiae)[J]. Pharmacogn Mag, 2014, 10(Sl1): S130-S134.

[28]代光輝, 顧振芳, 陳曉斌. 植物源農(nóng)藥穩(wěn)定性研究進(jìn)展[J]. 世界農(nóng)藥, 2002, 24(4): 25-27.

【責(zé)任編輯 李曉卉】

GC×GC-TOF/MS analysis of the seed extract of Wisteria sinensis and the insecticidal activity

CAO Xianshuang1, WANG Jin1, SONG Li1, JIANG Hao1,2, YAO Xi1, TANG Feng1, YUE Yongde1
(1 SFA Key Laboratory of Bamboo and Rattan Science and Technology, International Centre for Bamboo and Rattan, Beijing 100102, China; 2 State Key Laboratory of Tea Plant Biology and Utilization, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China)

【Objective】To analyze the chemical composition, insecticidal and antioxidant activities of the seed extract of Wisteria sinensis, and provide a basis for developing botanical pesticide from W. sinensis germplasm resources.【Method】The seed extract of W. sinensis was analyzed by comprehensive two-dimensional gas chromatographytime-of-flight mass spectrometry (GC×GC-TOF/MS). The toxicity against Aphis gossypii was determined by topical application bioassay. The antioxidant activity was evaluated using the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging method. 【Result】A total of 61 components were identified from the seed extract of W. sinensis, mainly including esters, alkane, arene, etc. The constituents with higher than 9% relative content were p-xylene (14.33%), undecane (11.89%), 1,4-diethyl-benzene (11.02%) and decane (9.54%). The seed extract of W. sinensis showed insecticidal activity against A. gossypii with the LC50value of 193.22 mg·L–1after 24 h treatment, and also showed antioxidant activity with the IC50value of 4.15 g·L–1against DPPH. 【Conclusion】The seed extract of W. sinensishas strong insecticidal activity, and has the potential to be developed into a natural insecticide for controlling A. gossypii.

Wisteria sinensis; seed extract; GC×GC-TOF/MS; chemical composition; contact toxicity; Aphis gossypii; antioxidant activity

S482.1；S433

A

1001-411X(2017)05-0067-07

曹先爽, 王進(jìn), 宋麗, 等. 全二維氣相色譜–飛行時(shí)間質(zhì)譜分析紫藤種子提取物及其殺蚜活性研究[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2017, 38(5): 67-73.

2016-11-19 優(yōu)先出版時(shí)間：2017-07-14

優(yōu)先出版網(wǎng)址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/44.1110.s.20170714.0859.024.html

曹先爽(1992—)，女，碩士研究生，E-mail: 18811717100@163.com； 通信作者： 王 進(jìn)(1977—)，男，副研究員，博士，E-mail: wangjin@icbr.ac.cn

“十三五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFD0600801)；國(guó)際竹藤中心基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)(1632014009)