PI3K/Akt/eNOS信號通路在葛根素抑制ox-LDL誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)中的作用*

鄧華菲， 李 堅， 周 琴， 譚玉林， 謝 明， 張?zhí)旖埽?韓 瑛， 張文龍

(1湘南學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 2郴州市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科， 湖南 郴州 423000)

PI3K/Akt/eNOS信號通路在葛根素抑制ox-LDL誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)中的作用*

鄧華菲1， 李 堅1， 周 琴1， 譚玉林1， 謝 明1， 張?zhí)旖?， 韓 瑛1， 張文龍2△

(1湘南學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，2郴州市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科， 湖南 郴州 423000)

目的： 探討磷脂酰肌醇 3-激酶/蛋白激酶B/內(nèi)皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)信號通路在葛根素(puerarin)抑制氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein， ox-LDL)誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子(tissue factor，TF)表達(dá)中的作用。方法: 實時熒光定量PCR檢測TF的mRNA表達(dá)，Western blot檢測TF和Akt的蛋白表達(dá)，硝酸鹽還原酶法檢測一氧化氮(nitric oxide， NO)含量。結(jié)果: 與對照組相比，ox-LDL孵育內(nèi)皮細(xì)胞后，內(nèi)皮細(xì)胞TF的mRNA和蛋白表達(dá)升高，Akt蛋白磷酸化水平降低，細(xì)胞內(nèi)NO產(chǎn)生減少；而葛根素預(yù)孵育內(nèi)皮細(xì)胞1 h后，再用ox-LDL孵育，內(nèi)皮細(xì)胞TF mRNA和蛋白表達(dá)下降，Akt蛋白磷酸化升高，細(xì)胞內(nèi)NO產(chǎn)生增多；PI3K抑制劑LY294002和葛根素共同預(yù)孵育內(nèi)皮細(xì)胞1 h后，再用ox-LDL孵育，內(nèi)皮細(xì)胞TF的mRNA和蛋白表達(dá)升高，Akt蛋白磷酸化降低，細(xì)胞內(nèi)NO產(chǎn)生減少；eNOS抑制劑NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)和葛根素共同預(yù)孵育內(nèi)皮細(xì)胞，也明顯阻斷葛根素對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞TF mRNA和蛋白表達(dá)、細(xì)胞Akt蛋白磷酸化和細(xì)胞內(nèi)NO產(chǎn)生的作用。結(jié)論: 葛根素可通過上調(diào)PI3K/Akt/eNOS信號通路抑制ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞TF mRNA和蛋白表達(dá)。

葛根素； 氧化型低密度脂蛋白； 組織因子； PI3K/Akt/eNOS信號通路； 血管內(nèi)皮細(xì)胞

冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂導(dǎo)致血栓形成是急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)最主要的發(fā)病機(jī)制。組織因子(tissue factor，TF)即凝血因子Ⅲ，是啟動體內(nèi)凝血過程的重要因子。Emekli-Alturfan等[1]研究發(fā)現(xiàn)，與穩(wěn)定性心絞痛患者和正常人相比，ACS患者血漿中TF抗原水平及其活性明顯升高(血漿TF水平常常作為ACS患者預(yù)后的重要指標(biāo)[2])。正常情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞和外周血細(xì)胞中測不到TF，故正常血液循環(huán)中不存在凝血的啟動，但在病理條件下血管內(nèi)皮細(xì)胞可誘發(fā)性表達(dá)TF，特別是血管內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷或炎性因子刺激時TF表達(dá)顯著增多[3-4]，增加動脈血栓及粥樣硬化危險。

氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL)作為獨立的危險因素在動脈粥樣硬化(atherosclerosis，As)的發(fā)生發(fā)展過程及ACS的形成中占有重要地位, ox-LDL不僅可以損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，使其由抗凝血向促凝血方向轉(zhuǎn)化，還能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)TF[4]。ox-LDL誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞TF表達(dá)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制尚不完全清楚。實驗研究表明磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)-蛋白激酶B(protein kinaseB，PKB/Akt)負(fù)調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞TF表達(dá)[5]。Akt磷酸化內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)中第 1 177 位絲氨酸可使該酶活化，促進(jìn)一氧化氮(nitric oxide，NO)產(chǎn)生。NO是強(qiáng)有力的血管舒張劑，能夠抑制平滑肌細(xì)胞增殖和血小板聚集，也能抑制TF在內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)[6]。

葛根素(puerarin，Pue)是從干燥葛根中提取的一種異黃酮類化合物，具有明顯的抗動脈粥樣硬化[7]、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞[8-9]、對抗鉛對腎臟的損傷[10]、影響骨的增殖和分化[11]、促進(jìn)胰腺β細(xì)胞生存[12]的作用，這些保護(hù)作用與PI3K/Akt/eNOS信號通路有關(guān)[7-12]。近年來有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)葛根素能降低ACS患者外周血TF的表達(dá)水平[13]；汪自龍等[14]進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)葛根素能降低ACS患者體外單核源巨噬細(xì)胞TF的表達(dá)，并降低其活性；冉文卓等[15]研究表明葛根素可呈劑量和時間依賴性地抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的TF表達(dá)。目前本實驗室已研究發(fā)現(xiàn)葛根素能抑制ox-LDL對TF的誘導(dǎo)作用(另文發(fā)表)，但是其機(jī)制尚不清楚，為此我們以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)為研究對象，觀察PI3K/Akt/eNOS信號途徑是否介導(dǎo)了葛根素抑制ox-LDL誘導(dǎo)的TF表達(dá)，進(jìn)一步探索葛根素對凝血系統(tǒng)活性的調(diào)控機(jī)制，為干預(yù)As血栓形成提供新的思路。

材 料 和 方 法

1 主要試劑和材料

葛根素購自Sigma； ox-LDL購自上海翊圣生物科技有限公司；PI3K抑制劑LY294002和eNOS抑制劑NG-硝基-L-精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester，L-NAME)購自Selleck；Trizol、cDNA合成試劑盒和SYBR熒光定量試劑盒分別購自Invitrogen、Fermentas和ABI；TF抗體購自Abcam； β-actin抗體購自Santa；Akt和p-Akt(Thr308)抗體購自CST；細(xì)胞蛋白抽提試劑盒購自碧云天生物技術(shù)有限公司；BCA蛋白定量試劑盒和增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光(ECL)試劑盒購自Pierce；胰蛋白酶和胎牛血清購自杭州四季青公司；TF和β-actin引物由上海生工生物工程有限公司合成。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和實驗分組 以含10%胎牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)HUVECs(中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院實驗中心提供，內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志CD31陽性率≥95%)，每2～3 d更換細(xì)胞培養(yǎng)液并傳代，取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞用于實驗。

實驗分組：正常對照(control)組：用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)HUVECs 24 h；ox-LDL組：用含ox-LDL(終濃度為50 mg/L)的DMEM孵育HUVECs 24 h；ox-LDL+葛根素組(ox-LDL+Pue組)：100 μmol/L葛根素預(yù)處理HUVECs 1 h后，再用50 mg/L ox-LDL孵育HUVECs 24 h；PI3K抑制劑組(LY294002組)：用PI3K抑制劑LY294002(10 μmol/L)和葛根素預(yù)處理HUVECs 1 h后，再加入50 mg/L ox-LDL處理HUVECs 24 h；eNOS抑制劑組(L-NAME組)：用eNOS抑制劑L-NAME(100 μmol/L)和葛根素處理HUVECs 1 h后，再加入50 mg/L ox-LDL處理HUVECs 24 h。

2.2 實時熒光定量PCR檢測TF的mRNA表達(dá) Trizol提取細(xì)胞總RNA后融于無RNase水中，用紫外分光光度計檢測RNAA260/A280的比值并計算其濃度。用M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶將RNA合成cDNA后進(jìn)行擴(kuò)增。人TF的上游引物序列為5’-GCCAAGATGTACCTGGGCTA-3’，下游引物序列為5’-CATTCATGATCTTGGCGATG-3’，產(chǎn)物長度為220 bp；內(nèi)參照采用β-actin，上游引物序列為5’-CATTAAGGAGAAGCTGTGCT-3’，下游引物序列為5’-GTTGAAGGTAG TTTCGTGGA-3’，產(chǎn)物長度為208 bp。SYBR Green法進(jìn)行實時熒光定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件為： 94 ℃ 20 s， 60 ℃ 20 s， 72 ℃ 20 s，共40個循環(huán)； 72 ℃ 5 min。用CFX Manager軟件分析得到Ct值，經(jīng)β-actin校正，以校正值2-ΔΔCt進(jìn)行統(tǒng)計分析。ΔCt = Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因，ΔΔCt =ΔCt刺激組-ΔCt對照組(相對定量以含量最低的樣本為標(biāo)準(zhǔn)，其余各樣本的含量均為相對該樣本的倍數(shù))。

2.3 Western blot實驗 冰上提取細(xì)胞總蛋白后用BCA法定量各樣本蛋白濃度。蛋白樣品加入5×SDS上樣緩沖液后煮沸變性，每孔加入20 μg蛋白，經(jīng)10% SDS-PAGE后，蛋白被轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，用含5%脫脂奶的TBST封閉2 h，然后分別與抗TF抗體(1∶1 000)、p-Akt抗體(1∶1 000)、Akt抗體(1∶1 000)和β-actin抗體(1∶800)4 ℃ 孵育過夜；充分洗膜后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的 II 抗(1∶4 000) 繼續(xù)孵育；再次洗膜后化學(xué)發(fā)光法顯影，對各條帶的灰度值掃描，以β-actin作為內(nèi)參照，計算各樣本蛋白含量。

2.4 硝酸鹽還原酶法檢測細(xì)胞內(nèi)NO含量 收集培養(yǎng)的各組細(xì)胞，用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，硝酸鹽還原酶法檢測細(xì)胞內(nèi)NO含量，按NO檢測試劑盒說明，分光光度計于540 nm波長處測定各樣本吸光度值，并用BCA蛋白定量試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白含量，計算單位蛋白中所含NO。

3 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，結(jié)果用GraphPad Prism 6軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析和圖形繪制。多組間比較用單因素方差分析(one-way ANOVA)，各組間差異的兩兩比較用Student-Newman-Keuls檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 葛根素抑制ox-LDL誘導(dǎo)TF mRNA和蛋白的表達(dá)

如圖1所示，50 mg/L ox-LDL處理HUVECs 24 h后，TF的mRNA和蛋白的表達(dá)明顯高于正常對照組(P<0.01)；而用100 μmol/L葛根素預(yù)處理HUVECs 1 h后，再用50 mg/L ox-LDL孵育HUVECs 24 h，明顯減弱了ox-LDL誘導(dǎo)TF mRNA和蛋白表達(dá)的作用(P<0.01)。這些結(jié)果表明，葛根素抑制了ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs TF表達(dá)。

2 PI3K抑制劑和eNOS抑制劑對葛根素降低ox-LDL誘導(dǎo)的TF mRNA和蛋白表達(dá)的影響

有研究表明，PI3K-Akt信號通路對TF表達(dá)起負(fù)調(diào)控作用[5]，因此我們探討了葛根素是否通過活化PI3K-Akt通路抑制ox-LDL誘導(dǎo)TF表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PI3K抑制劑LY294002(10 μmol/L)和葛根素處理HUVECs 1 h后，再加入50 mg/L ox-LDL處理內(nèi)皮細(xì)胞24 h，葛根素對ox-LDL誘導(dǎo)的TF mRNA和蛋白表達(dá)的作用明顯被抑制。NO可以抑制微血管內(nèi)皮細(xì)胞TF表達(dá)[6]，因此我們也探討了葛根素是否通過增加NO的產(chǎn)生抑制ox-LDL誘導(dǎo)的TF表達(dá)。eNOS抑制劑L-NAME和葛根素處理HUVECs 1 h后，再加入50 mg/L ox-LDL處理內(nèi)皮細(xì)胞24 h，葛根素對ox-LDL誘導(dǎo)的TF mRNA和蛋白的作用被阻斷，見圖1。

Figure 1.The effects of various drugs on ox-LDL-induced TF mRNA (A) and protein (B) expression in HUVECs determined by real-time quantitative PCR and Western blot, respectively. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vsox-LDL group;#P<0.05,##P<0.01vsPue+ox-LDL group.

圖1 不同藥物對ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs TF mRNA和蛋白水平表達(dá)的影響

3 葛根素和LY294002對ox-LDL抑制內(nèi)皮細(xì)胞Akt蛋白磷酸化的影響

為了探討PI3K-Akt通路是否參與葛根素抑制ox-LDL誘導(dǎo)TF表達(dá)，本實驗進(jìn)一步檢測了各組細(xì)胞Akt蛋白的磷酸化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，50 mg/L ox-LDL處理HUVECs 24 h后，Akt蛋白磷酸化明顯下降(P<0.01)；而用100 μmol /L葛根素預(yù)處理HUVECs 1 h，再用50 mg/L ox-LDL處理24 h，明顯減弱了ox-LDL對Akt蛋白磷酸化的抑制作用(P<0.01)；PI3K抑制劑LY294002明顯逆轉(zhuǎn)了葛根素的上述作用，見圖2。這些結(jié)果表明，ox-LDL通過抑制PI3K-Akt通路誘導(dǎo)了TF的表達(dá)，而葛根素減弱了ox-LDL對PI3K-Akt通路的抑制作用，從而抑制了TF的表達(dá)。

Figure 2.The effect of puerarin and LY294002 on the inhibition of Akt phosphorylation induced by ox-LDL in the HUVECs. Akt protein was determined by Western blot. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsox-LDL group;##P<0.01vsPue+ox-LDL group.

圖2 葛根素和LY294002對ox-LDL抑制HUVECs 的Akt蛋白磷酸化的影響

4 葛根素、LY294002和L-NAME對ox-LDL抑制內(nèi)皮細(xì)胞NO生成的影響

為了探討葛根素是否通過增加NO的產(chǎn)生抑制ox-LDL誘導(dǎo)TF表達(dá)，本實驗檢測了各組細(xì)胞內(nèi)NO的含量。與正常對照組相比，50 mg/L ox-LDL處理HUVECs 24 h后，細(xì)胞內(nèi)NO的產(chǎn)生明顯減少(P<0.01)；用100 μmol /L葛根素預(yù)處理HUVECs 1 h，再用50 mg/L ox-LDL處理HUVECs 24 h，細(xì)胞內(nèi)NO的含量明顯增加(P<0.01)。eNOS抑制劑L-NAME逆轉(zhuǎn)了葛根素的效應(yīng)，可見，NO的產(chǎn)生參與了葛根素降低ox-LDL對TF表達(dá)的誘導(dǎo)作用。同時，PI3K抑制劑LY294002也逆轉(zhuǎn)了葛根素降低ox-LDL對NO的抑制作用，因此，PI3K/Akt/eNOS信號通路參與了葛根素對ox-LDL誘導(dǎo)HUVECs TF mRNA和蛋白表達(dá)的抑制作用，見圖3。

Figure 3.The effect of puerarin, LY294002 and L-NAME on the inhibition of NO production induced by ox-LDL in the HUVECs. Intracellular NO content was determined by nitrate reduction method. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsox-LDL group;##P<0.01vsPue+ox-LDL group.

圖3 葛根素、LY294002和L-NAME對ox-LDL抑制內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生NO的影響

討 論

As是ACS的重要病理基礎(chǔ)，而血栓的形成在As的形成和發(fā)展過程中起著重要作用。TF是外源性凝血途徑的關(guān)鍵因子，影響急性心肌梗死的過程，由于絕大多數(shù)的心肌梗死是因不穩(wěn)定斑塊的破裂，繼而引起出血和管腔內(nèi)血栓形成，而導(dǎo)致管腔閉塞，引起相應(yīng)動脈部位的病變。生理狀態(tài)下，血管內(nèi)皮細(xì)胞并不表達(dá)TF，但是炎癥因子、ox-LDL等刺激可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)TF[3-4]。本實驗用50 mg/L ox-LDL孵育HUVECs 24 h后，細(xì)胞TF的mRNA和蛋白表達(dá)明顯增加，與上述研究結(jié)果一致。

ox-LDL對血管內(nèi)皮細(xì)胞TF表達(dá)的誘導(dǎo)機(jī)制尚不完全清楚。有研究報道，PI3K/Akt是血管內(nèi)皮細(xì)胞TF的負(fù)調(diào)控信號通路[5]。研究發(fā)現(xiàn)，PI3K抑制物wortmannin和LY294002孵育HUVECs，加強(qiáng)了VEGF對TF的誘導(dǎo)作用[16]；Akt去磷酸化還能促進(jìn)凝血酶誘導(dǎo)TF表達(dá)[17]。本實驗發(fā)現(xiàn)50 mg/L ox-LDL孵育HUVECs 24 h后，細(xì)胞內(nèi)Akt蛋白磷酸化降低，TF的mRNA和蛋白表達(dá)明顯增加，進(jìn)一步證實PI3K/Akt負(fù)調(diào)控TF的表達(dá)。Akt磷酸化后可以促進(jìn)eNOS活化，使細(xì)胞產(chǎn)生NO增多，而NO具有抑制血小板聚集和TF產(chǎn)生的作用[6]。本實驗發(fā)現(xiàn)50 mg/L ox-LDL使HUVECs內(nèi)NO產(chǎn)生減少而TF表達(dá)增加，由此可以得出抑制PI3K/Akt/eNOS信號通路促進(jìn)了ox-LDL誘導(dǎo)TF的表達(dá)。

葛根中的主要有效成分葛根素的化學(xué)名為4，7-二羥基-8-D-葡萄糖基異黃酮，具有多種藥理學(xué)作用[8-12]，其機(jī)制與PI3K/Akt/eNOS信號通路有關(guān)。臨床和實驗室研究發(fā)現(xiàn)，葛根素具有調(diào)節(jié)ACS患者外周血TF表達(dá)[13-14]、抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的TF表達(dá)[15]的作用。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，葛根素能抑制ox-LDL誘導(dǎo)HUVECs TF mRNA和蛋白的表達(dá)；同時，葛根素減弱了ox-LDL對Akt的蛋白磷酸化抑制作用，使細(xì)胞內(nèi)NO產(chǎn)生增加；而PI3K抑制物L(fēng)Y294002逆轉(zhuǎn)了葛根素的效應(yīng)，細(xì)胞內(nèi)TF mRNA和蛋白表達(dá)增高，Akt蛋白磷酸化減弱，NO產(chǎn)生減少；eNOS抑制劑L-NAME也取消了葛根素抑制ox-LDL對TF mRNA和蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)作用，細(xì)胞內(nèi)NO的產(chǎn)生也明顯減少。這些結(jié)果提示，葛根素通過上調(diào)PI3K/Akt/eNOS信號通路降低了ox-LDL對TF mRNA和蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)作用。

總的來說，本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)PI3K/Akt/eNOS信號通路可負(fù)調(diào)控ox-LDL誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞TF表達(dá)，而葛根素通過上調(diào)PI3K/Akt/eNOS信號通路降低了ox-LDL對TF mRNA和蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)作用。

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(責(zé)任編輯： 林白霜， 羅 森)

Role of PI3K/Akt/eNOS signaling pathway in inhibitory effects of puerarin on ox-LDL-induced TF expression in vascular endothelial cells

DENG Hua-fei1, LI Jian1, ZHOU Qin1, TAN Yu-lin1, XIE Ming1, ZHANG Tian-jie1, HAN Ying1, ZHANG Wen-long2

(1BasicMedicalCollege,XiangnanUniversity,2DepartmentofNeurology,TheFirstPeopleHospitalofChenzhou,Chenzhou423000,China.E-mail:zhangwenlong72@126.com)

AIM: To explore the role of phosphatidylinositiol 3-kinase/protein kinase B/endothelial nitric oxide synthase (PI3K/Akt/eNOS) signaling pathways in the inhibitory effects of puerarin on oxidized low-density lipoprotein (ox-LDL)-induced tissue factor (TF) expression in vascular endothelial cells. METHODS: The mRNA expression of TF was detected by real-time fluorescent quantitative PCR. The protein levels of TF and Akt was determined by Western blot. The content of the nitric oxide (NO) was measured by nitrate reduction method. RESULTS: Compared with control group, incubating endothelial cells with ox-LDL significantly induced TF expression at mRNA and protein levels and the dephosphorylation of Akt protein, and decreased NO production. Incubation of the endothelial cells with puerarin for 1 h and then treatment of the cells with ox-LDL decreased the TF expression at mRNA and protein levels, increased Akt protein phosphorylation and intracellular NO content. Co-incubation of the endothelial cells with PI3K inhibitor LY294002 and puerarin for 1 h and then treatment of the cells with ox-LDL augmented the TF expression at mRNA and protein levels and the Akt protein dephosphorylation, and decreased NO production. Co-incubation of the endothelial cells with eNOS inhibitorNG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) and puerarin significantly decreased the inhibitory effect of puerarin on ox-LDL-induced TF expression at mRNA and protein levels in the endothelial cells, and reduced Akt protein phosphorylation and NO production. CONCLUSION: Puerarin inhibits ox-LDL-induced TF expression at mRNA and protein levels in the human umbilical vein endothelial cells via activation of PI3K/Akt/eNOS signaling pathway.

Puerarin; Oxidized low-density lipoprotein; Tissue factor; PI3K/Akt/eNOS signaling pathway; Vascular endothelial cells

1000- 4718(2017)07- 1214- 05

2016- 12- 15

2017- 03- 13

湖南省教育廳資助科研項目(No. 13K113，11C1179)；湘南學(xué)院科研基金資助項目(No. 2015XB18)；湖南省衛(wèi)生計生委科研計劃課題項目資助(No. B2017043)；湖南省重點建設(shè)學(xué)科資金資助項目(湘教發(fā) [2011] 76 號)；湖南省郴州市科技局項目(No. [2011]29)；湘南學(xué)院重點建設(shè)學(xué)科資金資助項目(No. XNU-125-KD-019)

R965； R363.2+1

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.07.010

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