HPV DNA、HPV E6蛋白聯(lián)合檢測篩查宮頸癌的應(yīng)用價(jià)值

劉俊寶，徐 珍，郭亞花，朱 丹，曹 璐*

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 婦產(chǎn)科，吉林 長春130033；2.長沙市婦幼保健院)

*通訊作者

HPV DNA、HPV E6蛋白聯(lián)合檢測篩查宮頸癌的應(yīng)用價(jià)值

劉俊寶1，徐 珍2△，郭亞花1，朱 丹1，曹 璐1*

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 婦產(chǎn)科，吉林 長春130033；2.長沙市婦幼保健院)

高危型人乳頭瘤病毒(HPV)是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生最重要的致病因素，所有宮頸癌病例中約有70%的病例被發(fā)現(xiàn)感染高危人類乳頭瘤病毒16和18，但單純HPV DNA檢測不能代表HPV致病能力的高低[1-3]。本文通過聯(lián)合檢測HPV DNA與HPV E6蛋白在正常宮頸組織、各級別宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的檢出率,為宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)和宮頸癌早期診斷、治療以及病情評估和預(yù)后評價(jià)提供一定的參考依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2013年10月-2015年10月于吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院婦科門診就診的宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)為陽性者共681例(以ASC-U及以上病變?yōu)門CT陽性)的患者，同時均進(jìn)行HPV DNA檢測、HPV E6蛋白及宮頸活組織檢查。年齡20歲-84歲，平均年齡42歲。所有研究對象一年內(nèi)未行宮頸活檢，既往無宮頸癌病史并自愿行宮頸癌篩查，3天內(nèi)無性生活，無陰道感染，無陰道及宮頸操作或治療，檢查期間月經(jīng)未來潮，同時排除妊娠期患者。診斷結(jié)果以病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，病理診斷結(jié)果由兩名以上病理科醫(yī)師共同確定，其中子宮頸正?；?qū)m頸炎癥者共475例(正常組)；CINI 98例、CINII 57例、CINⅢ 35例，共190例(CIN組)；16例診斷為宮頸癌(宮頸癌組)。所有研究對象均知情同意。

1.2 試劑及儀器

HPV E6蛋白檢測試劑盒、宮頸采樣器(凱杰企業(yè)管理有限公司)、宮頸刷、Thinprep保存液(天津伊諾新康醫(yī)療器械科技有限公司)、Thinprep液基細(xì)胞學(xué)檢測儀(美國新柏氏公司)、RM2235型輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)、DML2000微孔板判讀器、65℃恒溫水浴箱、自動恒溫加熱器、冰箱、渦旋混合器、旋轉(zhuǎn)混合器、全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(重慶科斯邁生物科技有限公司)。

1.3 方法

液基薄層制片、巴氏染色、采用新TBS(The Bethesda System)分級系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)的診斷分類；第二代雜交捕獲試驗(yàn)檢測HPV DNA；利用PDZ，DLG-A，ZO-1結(jié)構(gòu)域只能與高危型HPV E6蛋白結(jié)合的這一特點(diǎn)檢測HPV E6蛋白[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)比較組間的差異，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同病變類型患者HPV DNA和E6蛋白的檢測情況

681例患者中CIN I有98例，CIN II有57例，CIN Ⅲ有35例，宮頸癌16例，其中475例為子宮頸正常的患者。將不同病變類型患者HPV DNA陽性率和HPV E6蛋白陽性率進(jìn)行趨勢χ2檢驗(yàn)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.1、P<0.05，χ2=234.4、P<0.001)，(見表1)。

2.2 比較單獨(dú)使用HPV E6蛋白檢測、HPV DNA檢測與聯(lián)合檢測結(jié)果方法的臨床應(yīng)用價(jià)值評價(jià)指標(biāo)

以病理檢測作為金標(biāo)準(zhǔn)，HPV DNA檢測的靈敏度為89.8%(185/206)，特異度為20.6%(98/475)，陽性預(yù)測值32.9%(185/562)，陰性預(yù)測值 82.4%(98/119)；HPV E6蛋白靈敏度為 60.7%(125/206)，特異度為90.5%(430/475)， 陽性預(yù)計(jì)值73.5%(125/170)，陰性預(yù)計(jì)值84.1%(430/511)。HPV E6蛋白和HPV DNA聯(lián)合檢測CIN和宮頸癌的靈敏度為93.7%。二者聯(lián)合檢測CIN I、CIN II、CIN Ⅲ及宮頸癌的陽性例數(shù)及陽性率分別為89(90.8%)、53(93.0%)、35(100%)、16(100%)。病理陽性者中，HPV E6蛋白、HPV DNA及二者在各CIN組和宮頸癌組的檢出率三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.9，P<0.05)。綜上，HPV E6蛋白檢測特異度雖高達(dá)90.5%，但靈敏度相對較低，僅60.7%；HPV E6蛋白檢測方法的特異度高于HPV DNA檢測方法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。HPV E6蛋白檢測方法的陽性預(yù)測值高于HPV DNA檢測方法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，其中聯(lián)合檢測檢出率高于單獨(dú)使用HPV E6蛋白檢測及HPV DNA檢測(見表2)。

表1 不同病變類型患者 HPV DNA和HPV E6蛋白的檢測結(jié)果

表2 兩種檢測方法單獨(dú)及聯(lián)合檢測臨床應(yīng)用價(jià)值評價(jià)指標(biāo)的對比

3 討論

宮頸癌是全球女性中第二高發(fā)的惡性腫瘤，尤其在發(fā)展中國家更為嚴(yán)重。由于從宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變發(fā)展到宮頸癌是一個較長期的過程，因此對宮頸癌前病變早期診斷和治療可有效地預(yù)防宮頸浸潤癌的發(fā)生[5]。大量研究表明引發(fā)宮頸癌及其癌前病變的重要因素是HPV感染，美國FDA唯一認(rèn)可的HPV檢測方法是第二代雜交捕獲技術(shù)(Hybrid capture，HC-II)，是世界上普遍應(yīng)用一種宮頸癌篩查方法[6,7]。由于有報(bào)道表示HPV DNA在凋亡細(xì)胞及細(xì)胞碎屑中也可表達(dá)，所以HC-II檢測技術(shù)的陽性預(yù)測值及特異度是有限的，無法區(qū)分良性感染與有臨床意義的癌前病變，那么在篩查過程中有可能造成過度診療，對婦女身心造成不必要的傷害[8]。

同時應(yīng)用于宮頸癌篩查的還有液基薄層細(xì)胞術(shù)(TCT)，有報(bào)道稱此方法對于宮頸癌細(xì)胞的檢出率可高達(dá)95%以上，在檢測過程中同時還有可能發(fā)現(xiàn)是否有其他的微生物感染。然而在臨床工作中我們發(fā)現(xiàn)TCT檢測對于非典型鱗狀細(xì)胞的重復(fù)性比較差，特別是當(dāng)遇到不典型鱗狀上皮細(xì)胞，意義不明的情況下，檢驗(yàn)科醫(yī)師一般難以做出非常準(zhǔn)確的判斷，不過由于檢驗(yàn)科技師在取材以及制片的過程中也有可能存在某些客觀因素導(dǎo)致的缺陷，有時結(jié)果有可能會被誤判。

能否選出更加有效的篩查方法以減少宮頸癌的發(fā)生越來越受到各研究者的關(guān)注，大量研究表明E6基因是HPV致宮頸癌及其癌前病變的主要基因，E6蛋白的過度表達(dá)與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)，此次試驗(yàn)是采用一種快速檢測HPV E6癌基因蛋白的方法，是一種以“試紙條檢測”形式的捕獲試驗(yàn)，可以提供即時的檢測結(jié)果。此次研究對HPV DNA檢測及HPV E6蛋白檢測兩種方法單獨(dú)及聯(lián)合在宮頸癌篩查中的價(jià)值，并根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)對各自利弊做出評價(jià)。

高危HPV DNA 檢測具有較高的靈敏度及陰性預(yù)測值，目前已廣泛應(yīng)用于臨床，HPV E6蛋白檢測有較高的特異度，對高度子宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌有一定的臨床預(yù)測價(jià)值，隨著宮頸病變嚴(yán)重程度的升高，HPV DNA與HPV E6蛋白在各級宮頸病變中的檢出率增加，將二者聯(lián)合檢測可提宮頸病變檢出的靈敏度，為宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌早期診斷、治療以及病情評估和預(yù)后評價(jià)提供一定的參考依據(jù)。

[1]Stein U,Walther W,Arlt F,et al.MACCl,a newly identified key regulator of HGF-MET signaling,predicts colon cancer metastasis[J].Nat Med,2009,15(1):59.

[2]Qiu J,Huang P,Liu Q,et al.Identification of MACCl as a novel prognostic marker in hepatocellular carcinoma[J].J Transl Med,2011,9:166.

[3]王 剛.MACCl在胰腺癌中的表達(dá)及其對增殖、遷移及耐藥等功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[D].浙江大學(xué),2012.

[4]尚 超,張 輝,宋永勝.腎癌細(xì)胞增殖過程MACCl和c-MET調(diào)控機(jī)制的探討[J].中華腫瘤防治雜志,2011,(14):1065.

[5]Hough SR,Clements I,Welch PJ,et al.Differentiation of mouse embryonic stem cells after RNA interference-mediated silencing of OCT4 and Nanog[J]. Stem Cells,2006,24 (6):1467.

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[7]Tai MH,Chang CC,Kiupel M,et al.Oct4 expression in adult human stem cells:evidence in support of the stem cell theory of carcinogenesis[J].Carcinogenesis,2005,26(2):495.

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1007-4287(2017)07-1213-03

2016-05-26)

△與第一作者同等貢獻(xiàn)