注射器加膠法在病理切片封片中的應(yīng)用及效果評價

張慶遠

（南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南南陽473061）

注射器加膠法在病理切片封片中的應(yīng)用及效果評價

張慶遠

（南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河南南陽473061）

病理切片制作過程中最后一步的樹膠封片操作至關(guān)重要，針對以往手工封片中存在的封片出現(xiàn)溢膠、蓋玻片下出現(xiàn)氣泡、不同技術(shù)人員操作水平不等、新手封片操作不熟練難以保證封片質(zhì)量、浪費樹膠、擦拭溢膠時的二甲苯污染問題，提出改進措施，提高手工封片質(zhì)量。

病理切片；中性樹膠；手工封片；溢膠；蓋玻片

制作一張合格的病理切片是準確進行病理組織學(xué)診斷的前提。一張合格的病理切片需要經(jīng)過許多步驟，如取材、固定、包埋、染色、封片等，以上過程都是相互聯(lián)系的，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都將導(dǎo)致制片失敗而影響診斷結(jié)果。其中，最后的封片操作看似簡單，但由于各種不可預(yù)知因素的影響，往往會出現(xiàn)氣泡、溢膠等問題。為提高病理切片封片質(zhì)量，在分析研究影響封片質(zhì)量相關(guān)因素的基礎(chǔ)上，對傳統(tǒng)手工封片加膠法加以改進。

1 材料與方法

1.1 材料

染色后的病理切片（未封片），吸管，自制加膠架，5m l玻璃注射器，5號注射器針頭，醫(yī)用棉簽，蓋玻片，100ml帶磨砂瓶塞玻璃試劑瓶，晾片托盤，一次性乳膠手套，200～400號粗砂紙，吹風(fēng)機，通風(fēng)操作櫥。

1.2 試劑

100ml裝中性樹膠，二甲苯。

1.3 傳統(tǒng)手工封膠法

左手拿染色并風(fēng)干后的組織切片，右手從裝有中性樹膠的瓶中吸膠后，將樹膠滴在組織切片上，再用右手拇指與食指將蓋玻片捏起后與載玻片呈45°角輕輕蓋下，用右手食指輕壓蓋玻片表面，使蓋玻片下的樹膠慢慢溢開攤平，此時注意檢查蓋玻片下樹膠是否完全展開覆蓋蓋玻片的四角及周邊。如加膠量少，蓋玻片下會有未覆蓋的空間，需用棉簽輕壓，盡量使中性樹膠展開到位。對于最后仍然無樹膠覆蓋的邊角，則用棉簽沾取二甲苯輕觸相應(yīng)邊角位置，利用虹吸原理，使二甲苯進入蓋玻片下，接觸樹膠助其展開。但如果加膠量過多，中性樹膠會從蓋玻片旁邊溢出，此時需用棉簽沾二甲苯擦拭，去掉多余樹膠。完成后即可放在晾片托盤中。具體操作見圖1。

圖1 傳統(tǒng)手工滴管封片法

圖2 改進后的手工注射器封片法

2 存在的問題及解決方法

2.1 傳統(tǒng)封片操作存在的問題

（1）加膠量不易控制，易造成膠量過多而溢出，導(dǎo)致封片過程中頻繁用棉簽沾二甲苯擦拭溢出蓋玻片的樹膠，最后可能弄臟蓋玻片；（2）蓋玻片下易產(chǎn)生氣泡，特別是出現(xiàn)一些肉眼看不到的小氣泡，影響封片質(zhì)量和醫(yī)師診斷；（3）頻繁用棉簽壓蓋玻片幫助樹膠展開或趕走氣泡時，偶爾因用力過大造成蓋玻片碎裂，需要返工重封，費時費力；（4）操作中頻繁使用二甲苯，污染空氣，對操作者身體造成傷害。

2.2 改進措施

針對傳統(tǒng)手工封片操作中存在的問題，做出如下改進。

（1）調(diào)整封片用中性樹膠的濃度。傳統(tǒng)封片使用的是上海標本模型廠生產(chǎn)的100ml裝中性樹膠，雖然已添加了二甲苯進行稀釋，但其濃度仍較高。我們參考王燦[1]提出的室溫下封片時樹膠與二甲苯5∶1的濃度配比，結(jié)合封片工作中實際應(yīng)用效果，將中性樹膠與二甲苯以5∶1.3的比例進行調(diào)配。（2）改進滴膠工具，自制專用滴膠架。自制滴膠架的方法：將抽裝中性樹膠的5 ml玻璃注射器插入專門的木制臺架孔中，將5號注射器針頭于距根部5mm處折斷并在砂紙上打磨鈍圓接上注射器。具體見圖2。

3 討論

3.1 產(chǎn)生氣泡的原因

傳統(tǒng)手工封片時封好的蓋玻片下常常會產(chǎn)生小氣泡，究其原因，一是樹膠中本身就有氣泡，而這與手工加膠方法有關(guān)。傳統(tǒng)手工加膠一般是用帶小膠球的滴管從裝有中性樹膠的瓶中直接吸取后滴加組織切片上，這種操作存在的缺陷是：每次加膠都需要從瓶中吸膠，然后再放回膠瓶，如果松開膠球時恰好滴管尚未插入瓶中膠面下，就會有少量空氣進入滴管頭部，再次滴膠時就會有氣泡產(chǎn)生。另外，膠瓶使用中的振動等原因，也會使空氣進入膠中而產(chǎn)生氣泡。二是膠瓶中的膠量。手工加膠一般用50m l磨砂口棕色玻璃瓶來裝膠，當膠隨著使用而減少又沒有及時添加，瓶中膠面接近滴管口時，滴管吸膠時就可能因膠量減少使滴管口露出膠面而吸入空氣，這時滴管中的膠也會混入空氣產(chǎn)生氣泡。三是中性樹膠的濃度。濃度高的樹膠黏度較大，其中存在的大氣泡容易浮出膠面而排出，但小的氣泡則不易上浮而長時間存在，有些氣泡單憑肉眼難以發(fā)現(xiàn)。四是用滴管滴膠時，捏膠球的手指抖動，會使膠在滴管口反復(fù)進出，使空氣進入膠中。五是加膠后加蓋蓋玻片時，由于膠本身的黏度或是組織切片在載玻片厚薄不均等原因，膠在蓋玻片下彌散的速度不一，使部分氣泡被直接圈在蓋玻片下形成氣泡。

3.2 溢膠的原因

封片過程中出現(xiàn)溢膠的原因相對較簡單：一是加膠量過多，導(dǎo)致多余樹膠溢出，這是主要原因；二是加蓋蓋玻片時膠滴位置過于偏向載玻片一側(cè)，使一側(cè)膠溢出，另一側(cè)膠未能彌散到位，蓋玻片下出現(xiàn)無膠懸空現(xiàn)象。對于封片中溢出的樹膠，需要用沾有二甲苯的棉簽擦拭去除。這一方面增加了工作量，降低了封片速度；另一方面，擦拭過程中難免會有樹膠粘到蓋玻片上，影響切片外觀，而且增加了操作者與二甲苯接觸的機會，對其健康造成危害。

3.3 改進后的優(yōu)點

（1）將中性樹膠與二甲苯以5∶1.3的比例進行調(diào)配，降低其濃度和黏度，這樣在使用時即使其中有較小氣泡也易于上浮而排出，同時也易于在加蓋蓋玻片后彌散攤開。（2）以5m l玻璃注射器連續(xù)加膠，一次抽取便可以多次使用，且樹膠在針管中只出不進，避免滴管反復(fù)取放造成空氣進入滴管的問題。以5號注射器針頭加膠，每滴出膠量遠少于用滴管加膠時的一滴量，對出膠量進行微量控制。實際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，使用24mm×32mm蓋玻片封片時，加一滴半樹膠即可。

3.4 注意事項

（1）抽膠時去掉針頭，先抽滿一管膠排出，再抽取需要的膠量，目的是讓針筒管壁上黏附一層膠膜，增加筒芯和筒壁黏滯性，避免針筒由于針芯的重力作用而下墜引起膠液自動流出現(xiàn)象。（2）抽膠時要將針筒插入膠面下抽吸，避免吸入空氣產(chǎn)生氣泡，即使有少量空氣進入針筒，也可因針筒垂直放置而上浮不至于進入針頭。建議封片滴膠前，先將針筒內(nèi)膠液排出幾滴，清除針頭中可能存在的氣泡。（3）及時清除針頭處凝固的樹膠，以免其堵塞針頭而影響膠液流出。（4）封片完成后，及時將針管從木架上拔出，將剩余的樹膠注回膠瓶，并密封保存，以免二甲苯揮發(fā)而影響使用。將空針筒連同針頭一起用二甲苯連續(xù)抽吸幾次沖洗后，側(cè)立放入裝有適量二甲苯的廣口磨砂塞玻璃瓶中密封保存，避免因樹膠干固致針筒與針芯粘結(jié)。（5）封片時在組織切片上滴膠后，先將切片向一側(cè)傾斜，使樹膠順載玻片的長軸流開，然后再加蓋蓋玻片稍稍按壓，不必等樹膠完全展開，即可放在晾片托盤讓膠自行彌散攤開。

本方法在技術(shù)室推廣后，深受技術(shù)人員歡迎，既提高了封片速度，又提高了封片質(zhì)量，特別適合在尚未采用自動封片機的醫(yī)院使用。

[1]王燦.中性樹膠最佳封片濃度探討[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2014，30（7）：815.

G424.31

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1671-1246（2017）13-0100-03