板藍(lán)根水提物對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和分化的影響

李吉萍，張文友，孫婷婷，馮薏婷，劉墨祥

(揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院 1. 藥理學(xué)教研室、2. 天然藥物研究室，江蘇 揚(yáng)州 225001)

板藍(lán)根水提物對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和分化的影響

李吉萍1，張文友1，孫婷婷1，馮薏婷1，劉墨祥2

(揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院 1. 藥理學(xué)教研室、2. 天然藥物研究室，江蘇 揚(yáng)州 225001)

目的 探討板藍(lán)根水提物(water extract ofRadixIsatidis，WERI)對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化的影響及其作用機(jī)制。方法 體外培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞，MTT法和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)WERI對(duì)細(xì)胞增殖的影響；雞尾酒誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞，油紅O染色和比色分析法觀察WERI對(duì)前脂肪細(xì)胞分化及脂肪積累的影響；采用RT-PCR檢測(cè)脂肪細(xì)胞的過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ)及CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein α，C/EBPα)mRNA的表達(dá)；Western blot法檢測(cè)PPARγ及C/EBPα蛋白表達(dá)。結(jié)果 WERI在一定濃度范圍內(nèi)能有效抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖，同時(shí)細(xì)胞周期呈現(xiàn)G0/G1向S期阻滯；與空白組相比，用不同濃度的WERI處理后，3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化受到明顯抑制，且細(xì)胞內(nèi)脂滴生成量明顯減少；PCR及Western blot結(jié)果顯示，WERI還可以抑制脂肪細(xì)胞PPARγ和C/EBPα基因及蛋白的表達(dá)。結(jié)論 WERI具有抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖作用，并可通過下調(diào)PPARγ和C/EBPα mRNA及蛋白表達(dá)來(lái)抑制細(xì)胞成脂分化。

板藍(lán)根水提物；3T3-L1前脂肪細(xì)胞；增殖；分化；PPARγ；C/EBPα;脂肪積累

脂肪是生物體儲(chǔ)能的主要形式，與機(jī)體的代謝密切相關(guān)。脂肪組織包括了脂肪前體細(xì)胞和處于分化各階段的脂肪細(xì)胞，而肥胖的產(chǎn)生是由于脂肪細(xì)胞的過度增殖與分化所導(dǎo)致[1]。而逆向肥胖過程[2]，如減少前脂肪細(xì)胞的分化和增殖，通過減少體內(nèi)脂肪合成或者加快其分解等便成了一項(xiàng)需要攻克的難題。國(guó)內(nèi)外一直有不少學(xué)者致力于研究從植物原料中分離提取的化合物是否有調(diào)節(jié)血脂代謝及脂肪分化方面的作用[3-5]。板藍(lán)根水提物(water extract ofRadixIsatidis，WERI)是從板藍(lán)根中提取分離獲得的活性多糖。WERI在前期研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)具有減肥、調(diào)節(jié)血脂及抗氧化作用[6]。本文研究了WERI對(duì)體外培養(yǎng)的3T3-L1前脂肪細(xì)胞[7]增殖和分化的影響，并從前脂肪細(xì)胞分化密切相關(guān)的兩個(gè)因子-過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ)和CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein α，C/EBPα)入手，對(duì)其相關(guān)機(jī)制進(jìn)行初步探討，為板藍(lán)根在減肥活性上的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 細(xì)胞 3T3-L1前脂肪細(xì)胞，購(gòu)自美國(guó)模式菌種收集中心(ATCC)。

1.2 藥物與試劑 板藍(lán)根水提物，由揚(yáng)州大學(xué)藥物研究所中藥及天然藥物研究室提供，多糖含量80%以上，藥材原產(chǎn)地：江蘇省連云港市灌南縣；1-甲基-3-異丁基黃嘌呤(IBMX)、地塞米松(dexamethasone,Dex)、油紅O均購(gòu)自Sigma公司；胰島素(insulin)為醫(yī)用胰島素注射液，購(gòu)自萬(wàn)邦制藥；新生牛血清、胎牛血清，購(gòu)自杭州天杭生物有限公司；高糖DMEM培養(yǎng)基，購(gòu)自Gibco公司；TRNzol，購(gòu)自TIANGEN公司；兔抗鼠PPARγ及C/EBPα購(gòu)自美國(guó)CST公司；兔抗鼠GAPDH購(gòu)自Abcam公司；HRP標(biāo)記的抗兔二抗購(gòu)自CST公司。

1.3 儀器 倒置顯微鏡，OLYMPUS，型號(hào)CK-41；生物安全柜，Thermo公司；自動(dòng)酶標(biāo)分析儀，基因有限公司，型號(hào)EL800；CO2培養(yǎng)箱，上海力申科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)HF90；臺(tái)式低溫離心機(jī)，Eppendorf，型號(hào)5810R；立式壓力蒸汽滅菌器，上海申安醫(yī)療器械廠，型號(hào)LDZX-50KBS；恒溫浴槽，成都儀器廠，型號(hào)HS-4。

2 方法

2.1 3T3-L1前脂肪細(xì)胞的培養(yǎng) 3T3-L1前脂肪細(xì)胞用含10%新生牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，在37 ℃、10% CO2條件下培養(yǎng)。細(xì)胞達(dá)到70%融合后，用0.05%胰蛋白酶1 ∶5消化傳代培養(yǎng)。

2.2 WERI對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖的影響 3T3-L1前脂肪細(xì)胞以2×107·L-1細(xì)胞密度接種于96孔板中，每孔加入100 μL細(xì)胞懸浮液，于37 ℃、10% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育12 h后，更換含有不同濃度WERI(5、10、25、50、100 mg·L-1)的完全培養(yǎng)基，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組和調(diào)零組，每組設(shè)12個(gè)復(fù)孔，終體積200 μL。孵育72 h后，每孔加入20 μL 5 g·L-1MTT溶液，于37℃、10% CO2孵箱中繼續(xù)孵育，4 h后小心吸凈每孔中液體，并加入150 μL DMSO，在振蕩器上輕微振蕩10 min，將產(chǎn)生的紫色結(jié)晶充分溶解，于酶標(biāo)儀在570 nm處測(cè)量吸光度。根據(jù)吸光度計(jì)算細(xì)胞存活率。

2.3 WERI對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞周期的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期3T3-L1前脂肪細(xì)胞，以每孔5×104個(gè)細(xì)胞接種于24孔板。常規(guī)培養(yǎng)24 h后，換用以DMEM高糖培養(yǎng)基配制的含WERI的培養(yǎng)基500 μL，WERI的濃度分別為10、25、50 mg·L-1，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè)4個(gè)平行孔，繼續(xù)孵育48 h。PBS清洗細(xì)胞后，用0.25%胰酶消化并收集細(xì)胞，再用PBS洗3次，重懸后，加入75%冷乙醇固定15 min，4 ℃保存過夜。上機(jī)前，棄乙醇，再用PBS洗細(xì)胞2次，PBS重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為109·L-1，每組4個(gè)樣品。加RNase(40 mg·L-1)，于37 ℃水浴處理30 min，加PI(50 mg·L-1)，在冰浴中避光染色30 min，上機(jī)檢測(cè)。樣品分析測(cè)定及保存圖片。

2.4 3T3-L1前脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化 用含10% NBCS的高糖DMEM完全培養(yǎng)基于37 ℃、10% CO2條件下培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞接觸抑制，即融合度達(dá)到100%后，更換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48 h，之后移除含NBCS的培養(yǎng)基，向每孔中加入體積相同的含或不含WERI的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，并根據(jù)每孔體積加入相應(yīng)體積的IBMX、Dex及insulin原液，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，在d 3時(shí)更換含胰島素配制的各組培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h，每48 h更換不含胰島素配制的各組培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

2.5 油紅O染色提取 細(xì)胞誘導(dǎo)方法及分組參照“2.4”。誘導(dǎo)d 8，3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化為成熟的脂肪細(xì)胞，此時(shí)棄去板內(nèi)培養(yǎng)基，每孔加入PBS清洗殘余培養(yǎng)基。棄去PBS，4%中性甲醛固定45 min，棄去固定液后，用PBS清洗細(xì)胞2次，并晾干30 min，加入油紅O染料靜置60 min后，棄去油紅O溶液，用60%異丙醇洗滌細(xì)胞2次，以去除多余未結(jié)合的染料，再用超純水清洗3～4次后，吸凈殘留液體，置于顯微鏡下觀察并拍照。測(cè)定總脂質(zhì)含量時(shí)加入異丙醇250 μL溶解油紅O，振蕩5 min后，吸取150 μL液體在酶標(biāo)板中，用酶標(biāo)儀在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各組吸光度A。

2.6 檢測(cè)PPARγ與C/EBPα mRNA的表達(dá) 采用半定量PCR法檢測(cè)(誘導(dǎo)方法及分組參照“2.4”)。引物由上海生工生物工程技術(shù)有限公司合成。PPARγ上游引物5′-TTTTCAAGGGTGCCAGTTTC-3′，下游引物5′-AATCCTTGGCCCTCTGAGAT-3′，產(chǎn)物長(zhǎng)度198 bp；C/EBPα上游引物5′-ACCCGGCCGCCTTCAACGAC-3′，下游引物5′-GTGGCGGCGGTGGCTGGTAG -3′，產(chǎn)物長(zhǎng)度354 bp。β-actin上游引物5′-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3′，下游引物5′-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3′，產(chǎn)物長(zhǎng)度540 bp。各組的細(xì)胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)至d 8，用TRNzol抽提細(xì)胞總RNA，根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明合成cDNA，PCR儀擴(kuò)增產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物，UVP凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行成像分析。

2.7 檢測(cè)PPARγ與C/EBPα蛋白表達(dá) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的3T3-L1細(xì)胞接種于6孔板進(jìn)行分組誘導(dǎo)(誘導(dǎo)方法及分組參照“2.4”)，取d 8細(xì)胞，用4 ℃預(yù)冷的PBS洗2次，加入細(xì)胞裂解液，置于冰上裂解，30 min后吸取細(xì)胞于1.5 mL離心管中，離心取上清液。吸取5 μL，用PBS稀釋10倍后進(jìn)行BCA法測(cè)定蛋白含量，將剩余樣品用裂解液及SDS稀釋到統(tǒng)一濃度，于95 ℃變性10 min，冷卻并渦旋混勻后，用8%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白，轉(zhuǎn)膜，脫脂奶粉封閉2 h后，一抗4℃孵育過夜，洗膜，二抗室溫孵育2 h后洗膜，上機(jī)測(cè)定蛋白表達(dá)情況。

3 結(jié)果

3.1 WERI對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖的影響 3T3-L1前脂肪細(xì)胞分別在含0、5、10、25、50、100 mg·L-1的WERI的培養(yǎng)液中培養(yǎng)72 h。5、100 mg·L-1的WERI對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖無(wú)明顯影響，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；WERI在10～50 mg·L-1濃度范圍內(nèi)能明顯抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但是細(xì)胞的存活率仍然保持在90%以上，細(xì)胞保持較高活性(Fig 1)。

3.2 WERI對(duì)前脂肪細(xì)胞周期的影響 本實(shí)驗(yàn)使用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析，通過PI染色法檢測(cè)WERI處理3T3-L1前脂肪細(xì)胞24 h后，對(duì)細(xì)胞周期阻滯的影響。如Tab 1所示，不同濃度WERI對(duì)前脂肪細(xì)胞的周期分布具有明顯影響。實(shí)驗(yàn)組比較發(fā)現(xiàn)，隨著WERI濃度的增加，G0/G1期比例呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，且各組與對(duì)照組相比，明顯上升(P<0.01)。S期細(xì)胞則隨實(shí)驗(yàn)組濃度增大而逐漸下降，與對(duì)照組細(xì)胞差異有顯著性(P<0.01)。WERI在細(xì)胞生長(zhǎng)過程中能使其阻滯在G0/G1，導(dǎo)致細(xì)胞不能正常地從G0/G1向S期過渡。

Fig 1 Cytotoxicity of WERI measured by cell viability assays(±s，n=12)

*P<0.05，**P<0.01vscontrol group

Tab 1 Effect of WERI treatment on cell cycle arrest in 3T3-L1 cells(±s，n=3)

**P<0.01vscontrol group

3.3 WERI對(duì)前脂肪細(xì)胞分化的影響 對(duì)照組3T3-L1前脂肪細(xì)胞經(jīng)過誘導(dǎo)分化后，細(xì)胞形態(tài)已經(jīng)由原先的成纖維樣變?yōu)閳A形或橢圓形，誘導(dǎo)d 8的細(xì)胞經(jīng)過油紅O染色后，光鏡下可見對(duì)照組90%的細(xì)胞由前體脂肪細(xì)胞分化為成熟的脂肪細(xì)胞，且形成獨(dú)特的戒環(huán)狀脂滴，細(xì)胞胞體膨大變圓，見Fig 2。隨著WERI給藥濃度的增加，鏡下可見紅色脂肪滴逐漸減少，證明了WERI可以抑制脂肪細(xì)胞分化。以異丙醇溶解結(jié)合于細(xì)胞內(nèi)的油紅O，使用酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度來(lái)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)脂肪含量，F(xiàn)ig 3結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，WERI各劑量組細(xì)胞內(nèi)的脂肪含量明顯降低(P<0.01)，且表現(xiàn)出明顯的劑量依賴，100 mg·L-1的WERI作用于細(xì)胞后，光鏡下可以發(fā)現(xiàn)細(xì)胞分化幾乎被完全抑制。

3.4 WERI對(duì)成熟脂肪細(xì)胞中PPARγ與C/EBPα mRNA表達(dá)的影響 Fig 4 RT-PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，WERI各劑量組均能不同程度下調(diào)脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵調(diào)控因子PPARγ與C/EBPα mRNA的表達(dá)水平，并且隨著WERI劑量增加，表達(dá)量逐漸下降，表現(xiàn)出了明顯的劑量依賴性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

Fig 2 Effect of WERI on differentiation of 3T3-L1 cells

A:Control group;B:WERI 25 mg·L-1group;C:WERI 50 mg·L-1group;D:WERI 100 mg·L-1group

Fig 3 Effect of WERI on lipid accumulation after adipogenic induction of differentiation for 8 days(±s，n=6)

**P<0.01vscontrol group

3.5 WERI對(duì)成熟脂肪細(xì)胞中PPARγ與C/EBPα蛋白表達(dá)的影響 Fig 5 Western blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，隨著WERI劑量增加，脂肪細(xì)胞PPARγ及C/EBPα的蛋白表達(dá)量明顯下降，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

4 討論

脂肪組織是機(jī)體最大的能量?jī)?chǔ)庫(kù)，在能量代謝和平衡方面發(fā)揮著重要的作用。一旦脂肪細(xì)胞出現(xiàn)分化失常，包括脂肪細(xì)胞的增殖與分化而導(dǎo)致的脂肪組織堆積及脂肪分化相關(guān)因子的表達(dá)異常，將引起肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化等代謝方面疾病的發(fā)生和發(fā)展[8]，并使機(jī)體產(chǎn)生一系列炎癥反應(yīng)[9]。因此，研究出一種能對(duì)脂肪細(xì)胞增殖、分化有抑制效果的藥物，對(duì)于調(diào)節(jié)機(jī)體脂肪代謝具有重要的意義。

Fig 4 Effect of WERI on expressions of PPARγ and C/EBPα mRNA after adipogenic induction of differentiation for 8 days(±s，n=3)

**P<0.01vscontrol group

1: Control group; 2: WERI 25 mg·L-1group; 3: WERI 50 mg·L-1group; 4: WERI 100 mg·L-1group.**P<0.01vscontrol group

脂肪細(xì)胞的分化是一個(gè)高度精細(xì)的調(diào)控過程，研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子過氧化物酶體增殖劑活化受體家族(peroxisome proliferator-activated receptors，PPARs)和CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白家族(CCAAT/enhancer binding proteins，C/EBPs)是脂肪細(xì)胞分化的兩個(gè)最重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子[10]。PPARs受體家族包括PPARα、PPARβ和PPARγ，其中PPARγ與脂肪細(xì)胞的分化最為相關(guān)，對(duì)脂肪細(xì)胞的分化成熟和脂肪生成均具有正向調(diào)節(jié)作用。C/EBPs家族有C/EBPα、β、δ等成員，其中，C/EBPα與PPARγ通過協(xié)調(diào)作用來(lái)影響脂肪細(xì)胞的分化[11]。PPARγ可通過促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞內(nèi)C/EBPα基因及蛋白表達(dá)，而使前體細(xì)胞向脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化，同時(shí)C/EBPα又能促進(jìn)PPARγ的高表達(dá)，保持分化細(xì)胞的表型[12]。

本研究以3T3-L1細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察WERI對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖及分化的影響。增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，WERI可以阻滯細(xì)胞從G0/G1→S期發(fā)展，從而抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖；油紅O結(jié)果顯示，WERI能夠明顯抑制脂肪細(xì)胞的分化率，降低細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚，并且分化率隨著WERI的給藥濃度的增加而降低，表現(xiàn)出了劑量依賴性。PCR及Western blot結(jié)果可以看出，與對(duì)照組相比，各給藥組PPARγ和C/EBPα的基因及蛋白表達(dá)量明顯下降，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，提示W(wǎng)ERI抑制前脂肪細(xì)胞分化的機(jī)制可能是通過降低分化途徑相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)。

綜上所述，WERI能夠抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖，并可通過降低PPARγ和C/EBPα mRNA及蛋白表達(dá)，從而抑制前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化，減少其脂質(zhì)生成，說明WERI具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝及治療肥胖癥的潛在藥理作用。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)是在揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室完成的，謹(jǐn)向全體課題組實(shí)驗(yàn)人員表示衷心感謝。)

[1] Wang Y W，Jones P J.Conjugated linoleic acid and obesity control: efficacy and mechanisms[J].IntJObesRelatMetabDisord, 2004,28(8):941-55.

[2] Frühbeck G.Overview of adipose tissue and its role in obesity and metabolic disorders[J].MethodsMolBiol,2008,456:1-22.

[3] Rashid A M,Lu K,Yip Y M,et al.Averrhoa carambola L.peel extract suppresses adipocyte differentiation in 3T3-L1 cells[J].FoodFunct,2016,7(2):881-92.

[4] 劉慶豐, 劉 毅, 焦 正, 等. 三黃湯對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞糖脂代謝的影響[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2016, 32(6):868-73.

[4] Liu Q F,Liu Y,Jiao Z,et al.Effect of Sanhuang Decoction on glucose and lipid metabolism in 3T3-L1 adipocytes[J].ChinPharmacolBull, 2016,32(6):868-73.

[5] Lee M S,Cho S M,Lee M H,et al.Ethanol extract of Pinus koraiensis leaves containing lambertianic acid exerts anti-obesity and hypolipidemic effects by activating adenosine monophosphate-activated protein kinase(AMPK)[J].BMCComplementAlternMed,2016,16:51.

[6] 李吉萍, 江 鴻, 劉墨祥. 板藍(lán)根多糖減肥調(diào)血脂與抗氧化作用研究[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2007, 26:58-9.

[6] Li J P,Jiang H,Liu M X.Polysaccharide of radix isatidis for regulating blood lipid and resisting lipid peroxidation[J].HeraldMed,2007,26:58-9.

[7] Green H,Meuth M.An established pre-adipose cell line and its differentiation in culture[J].Cell,1974,3(2):127-33.

[8] Caro J F,Dohm L G,Pories W J,et al.Cellular alterations in liver,skeletal muscle,and adipose tissue responsible for insulin resistance in obesity and type II diabetes[J].DiabetesMetabRev,1989,5(8):665-89.

[9] 楊永玉, 胡長(zhǎng)平. 肥胖與脂肪組織重構(gòu)[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2016, 32(1):9-13.

[9] Yang Y Y,Hu C P.Obesity and adipose tissue remodeling[J].ChinPharmacolBull,2016, 32(1):9-13.

[10]Huang B,Yuan H D,Kim D Y,et al.Cinnamaldehyde prevents adipocyte differentiation and adipogenesis via regulation of peroxisome proliferator-activated receptor-γ(PPARγ) and AMP-activated protein kinase(AMPK) pathways[J].JAgricFoodChem,2011,59(8):3666-73.

[11]Guo L,Li X,Tang Q Q.Transcriptional regulation of adipocyte differentiation：a central role for CCAAT/enhancer-binding protein(C/EBP) β[J].JBiolChem,2015,290(2):755-61.

[12]Rosen E D,Walkey C J,Puigserver P,et al.Transcriptional regulation of adipogenesis[J].GenesDev,2000,14(11):1293-307.

Effects of water extract ofRadixIsatidison proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadipocytes

LI Ji-ping1, ZHANG Wen-you1, SUN Ting-ting1, FENG Yi-ting1, LIU Mo-xiang2
(1.DeptofPharmacology,2.InstituteofNaturalDrugResearch,YangzhouUniversity,YangzhouJiangsu225001,China)

Aim To explore the effect of water extract ofRadixIsatidis(WERI) on proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadipocytes.Methods 3T3-L1 preadipocytes were cultured to explore the effect of WERI on their proliferation measured by MTT and flow cytometry. Oil red O staining was applied to investigate the effect of different concentrations of WERI on the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes. Intracellular fat accumulation was quantified using colorimetry. Semi-quantitative PCR was used to measure the expressions of PPARγ and C/EBPα mRNA. Western blot was applied to detect the expressions of PPARγ and C/EBPα.Results The proliferation of 3T3-L1 preadipocytes was significantly inhibited by treating with a certain range of concentration of WERI, and the cell cycle was also blocked from G0/G1to S. After being treated with different concentrations of WERI, the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes was significantly inhibited compared with control group, and the accumulation of lipid droplets within the cells were obviously decreased. It also down-regulated the expressions of PPARγ and C/EBPα both in mRNA and protein.Conclusion WERI can inhibit the proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadipocytes and reduce the accumulation of lipid drops, which may be associated with its effects in inhibiting the expressions of PPARγ and C/EBPα both in mRNA and protein.

WERI; 3T3-L1 preadipocytes; proliferation; differentiation; PPARγ; C/EBPα;fat accumulation

2017-03-07,

2017-03-27

江蘇省蘇北星火帶科技攻關(guān)項(xiàng)目(No BE2004339)

李吉萍(1960-)，女，碩士，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥藥理學(xué)，E-mail：jipingli2005@126.com； 劉墨祥(1954-)，男，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：天然藥物，通訊作者，E-mail:lmx9378@126.com

時(shí)間：2017-7-7 11:05 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170707.1104.046.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.08.023

A

1001-1978(2017)08-1159-06

R284.1；R329.24；R392.12；R977.6