維生素D3 對異煙肼聯(lián)合利福平所致小鼠肝損傷的保護(hù)作用

宋佳奇，汪求真，遲菁華，寇廷艷，杜寶利，孫 立，李園園，胡一丹，李 茂，高曉麗，晉夢頔

(1. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)營養(yǎng)研究所，山東 青島 266021；2. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，山東 青島 266071)

維生素D3 對異煙肼聯(lián)合利福平所致小鼠肝損傷的保護(hù)作用

宋佳奇1，汪求真1，遲菁華2，寇廷艷1，杜寶利1，孫 立1，李園園1，胡一丹1，李 茂1，高曉麗1，晉夢頔1

(1. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)營養(yǎng)研究所，山東 青島 266021；2. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，山東 青島 266071)

維生素D(vitamin D,VD)的經(jīng)典生物學(xué)作用是調(diào)節(jié)鈣磷平衡，維持骨骼健康[1]。近年的研究發(fā)現(xiàn)，VD3具有抗炎、抗氧化等生物學(xué)作用。有文獻(xiàn)指出，VD3補(bǔ)充對四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷具有明顯的改善作用[2]。但其對藥物性肝損傷是否具有保護(hù)作用，尚未見報(bào)道。本研究以異煙肼聯(lián)用利福平建立小鼠肝損傷模型，探討不同劑量VD3補(bǔ)充對肝損傷是否具有保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料 異煙肼(安徽東盛制藥)，利福平(沈陽紅旗制藥)，維生素D滴劑(青島雙鯨藥業(yè))，復(fù)方甘草酸苷膠囊(濰坊中獅制藥)。

1.2 分組及檢測指標(biāo) 50只SPF級♂昆明種小鼠,體質(zhì)量(20±2)g，購自山東省魯抗制藥公司，合格證號：SCXK(魯)20140001。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成5組：正常對照組(NC)、模型組(M)、5倍、10倍VD3生理劑量組(5N、10N)、陽性對照組(PC)。除NC組外，其余4組一次性給予異煙肼和利福平各100 mg·kg-1·d-1，制備肝損傷模型[3]；NC組給予等劑量溶劑灌胃。1 h后，5N、10N組分別給予5倍、10倍生理劑量的VD3，劑量分別為180 IU·kg-1·d-1、360 IU·kg-1·d-1；PC組給予200 mg·kg-1·d-1復(fù)方甘草酸苷膠囊；NC組和M組均給予等劑量溶劑灌胃。連續(xù)灌胃2周后，測空腹血糖，處死小鼠，分離血清，檢測肝功能及脂質(zhì)指標(biāo)，計(jì)算肝臟指數(shù)，HE染色觀察肝臟病理學(xué)改變。

2 結(jié)果

2.1 VD3對小鼠體質(zhì)量、肝濕重和肝臟指數(shù)的影響 各組小鼠之間體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與NC組相比，M組的肝濕重、肝臟指數(shù)明顯增大；不同劑量的VD3干預(yù)后肝濕重和肝臟指數(shù)明顯降低(Tab 1)。

Tab 1 Effects of VD3 on body weight, liver weight and liver index in mice (±s, n=10 )

*P<0.05,**P<0.01vsNC;△△P<0.01vsM;#P<0.05vsPC

Tab 2 Effects of VD3 on serum biochemical levels in mice (±s, n=10)

*P<0.05,**P<0.01vsNC;△P<0.05,△△P<0.01vsM;##P<0.01vsPC

Tab 3 Effects of VD3 on glucose and lipid metabolism in mice(±s, n=10)

*P<0.05,**P<0.01vsNC;△△P<0.01vsM;##P<0.01vsPC;▲▲P<0.01vs10N

2.2 VD3對肝功能、血糖和脂質(zhì)代謝的影響 與NC組相比，M組血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate transaminase, AST)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、直接膽紅素(direct bilirubin,DBIL)、總膽紅素(total bilirubin,TBIL)的活性及空腹血糖、甘油三酯(triglyceride，TG)、膽固醇(cholestrol,CHOL)水平都明顯升高。VD3補(bǔ)充能降低ALT、ALP、DBIL、TBIL的活性及TG水平；5N、10N組之間差異沒有顯著性。但5N組能明顯降低血清AST活性、空腹血糖及CHOL水平 (Tab 2、3) 。

2.3 VD3對肝組織病理學(xué)改變的影響 在相同放大倍數(shù)光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，M組與NC組肝細(xì)胞的直徑比為1 ∶0.7。M組大部分肝細(xì)胞腫脹，發(fā)生氣球樣變，點(diǎn)灶狀性壞死，并伴有大量炎性細(xì)胞浸潤。與M組相比，VD3干預(yù)組與PC組肝細(xì)胞損傷明顯減輕。

3 討論

血清中轉(zhuǎn)氨酶水平的升高是藥物引起肝細(xì)胞壞死性病變的標(biāo)志[3]，當(dāng)肝細(xì)胞膜及線粒體膜損傷導(dǎo)致通透性增加時(shí)，這些診斷標(biāo)記酶釋放進(jìn)入血液，導(dǎo)致血清中ALT、AST活性升高。VD3干預(yù)能明顯降低血清ALT、ALP、TBIL、DBIL水平。新近研究表明，抗結(jié)核藥物抑制膽汁分泌，導(dǎo)致膽固醇蓄積和肝臟脂質(zhì)代謝受損[4]。我們研究發(fā)現(xiàn)，VD3補(bǔ)充能夠降低CHOL、TG水平，推測其可能通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝對肝臟起保護(hù)作用。

從肝臟指數(shù)、AST、血糖、CHOL等指標(biāo)來看，5倍VD3補(bǔ)充對抗結(jié)核藥所致小鼠肝損傷的保護(hù)作用更為明顯，而10倍VD3補(bǔ)充對這些指標(biāo)未觀察到類似效果。因此，我們推測一定范圍內(nèi)大劑量VD3補(bǔ)充對抗結(jié)核藥所致肝損傷具有一定的保護(hù)作用，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)是在青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)營養(yǎng)研究所實(shí)驗(yàn)室完成，在此對實(shí)驗(yàn)過程給予指導(dǎo)和幫助的老師和同學(xué)表示感謝！)

[1] 竇曉娟, 汪求真, 韓孝紅, 等. 大劑量維生素D3補(bǔ)充對糖尿病大鼠淋巴細(xì)胞增殖活性的影響[J]. 中國藥理學(xué)通報(bào),2016, 32(4): 589-90.

[1] Dou X J, Wang Q Z, Han X H, et al. Effect of high dosage of vitamin D3 supplementation on lymphocyte proliferation activity in diabetic rats[J].ChinPharmacolBull, 2016, 32(4): 589-90.

[2] 樸美蘭.維生素D3對四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[D]. 延邊：延邊大學(xué), 2013.

[2] Piao M L. Protective effects of vitamin D3 on acute liver injury induced by CCl4in mice[D]. Yanbian: Yanbian University, 2013.

[3] Dong Y, Huang J, Lin X, et al. Hepatoprotective effects of Yulangsan polysaccharide against isoniazid and rifampicin-induced liver injury in mice[J].JEthnopharmacol, 2014, 152(1):201-6.

[4] Pal R, Rana S V, Vaiphei K, et al. Isoniazid-rifampicin induced lipid changes in rats[J].ClinChimActa, 2008, 389(1-2): 55-60.

Protective effects of vitamin D3 on liver injury induced by isoniazid and rifampicin in mice

SONG Jia-qi1, WANG Qiu-zhen1, CHI Jing-hua2, KOU Ting-yan1, DU Bao-li1, SUN Li1, LI Yuan-yuan1, HU Yi-dan1, LI Mao1, GAO Xiao-li1, JIN Meng-di1

(1.InstituteofHumanNutrition,MedicalCollegeofQingdaoUniversity,QingdaoShandong266021,China; 2.DeptofPathology,MedicalCollegeofQingdaoUniversity,QingdaoShandong266071,China)

VD3；異煙肼；利福平；肝損傷；AST；保護(hù)作用

VD3; isoniazid; rifampicin; liver injury; AST; protective effects

2017-04-26，

2017-05-23

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81472983)

宋佳奇(1992-)，女，碩士生，研究方向：營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)，E-mail：602855088@qq.com； 汪求真(1971-)，女，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)，通訊作者，E-mail：qdwangqiuzhen@126.com

時(shí)間：2017-7-7 11:05 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170707.1104.056.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.08.028

A

1001-1978(2017)08-1183-02

R-332；R322.47；R575.105；R977.24