一起霍亂疫情應(yīng)急處置的實(shí)驗(yàn)室檢測分析

胡倫文

湖北省松滋市疾病預(yù)防控制中心，湖北松滋 434200

一起霍亂疫情應(yīng)急處置的實(shí)驗(yàn)室檢測分析

胡倫文

湖北省松滋市疾病預(yù)防控制中心，湖北松滋 434200

目的進(jìn)一步發(fā)揮和完善實(shí)驗(yàn)室檢測在疫情處置中的重要作用，提高檢測技術(shù)水平。方法包括樣品采集器材、采樣方法、樣品種類和數(shù)量以及實(shí)驗(yàn)室檢測器材和檢測方法，檢測方法按霍亂防治手冊（第6版）和WS289-2008。結(jié)果全部所檢樣品中，8份患者第1次采集糞便和1份患者服藥后采集的肛拭樣品、2名未發(fā)病者的肛拭、6份外環(huán)境樣品(主要是病家?guī)S池消毒前標(biāo)本)為O139群霍亂弧菌陽性，其余均為陰性。結(jié)論檢測工作在疫情處置中起到至關(guān)重要作用，應(yīng)加大疫情應(yīng)急演練的力度和頻次，進(jìn)一步提高基層實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)急處置能力和檢測技術(shù)水平。

霍亂疫情；實(shí)驗(yàn)室檢測；應(yīng)急處理

霍亂屬于甲類傳染病，是由霍亂弧菌引起的一種急性腹瀉性傳染病。病發(fā)高峰一般在夏季，傳播途徑主要是通過水、水產(chǎn)品或海產(chǎn)品、生活接觸和蒼蠅傳播，人感染后能在數(shù)小時(shí)內(nèi)造成腹瀉脫水甚至死亡。目前發(fā)現(xiàn)的能引起人類致病的主要是血清型為O1和O139群霍亂弧菌。湖北省松滋市境內(nèi)于2016年10月發(fā)生了一起由O139群霍亂弧菌引起的霍亂疫情。由于衛(wèi)生部門反應(yīng)迅速、措施有效、處置得當(dāng)，在最短的時(shí)間內(nèi)有效控制了疫情的蔓延，未造成疫病流行。

1 疫情發(fā)生及流行病學(xué)調(diào)查經(jīng)過

2016年10月5日上午8:30，松滋市疾病預(yù)防控制中心接到該市第一人民醫(yī)院電話報(bào)告，該院收治了1例疑似霍亂患者。市疾病預(yù)防控制中心立即組織流調(diào)和檢驗(yàn)專業(yè)人員按照二級生物安全防護(hù)要求迅速趕赴現(xiàn)場。經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查，患者黎某，女，53歲，家住松滋市新江口鎮(zhèn)某小區(qū)，于10月1日到過家住松滋市陳店鎮(zhèn)某村的妹妹家參加了其侄子的結(jié)婚宴,晚上回家后出現(xiàn)腹瀉嘔吐，第2天到市人民醫(yī)院就診。入院時(shí)臨床表現(xiàn)以腹瀉稀水樣便并伴嘔吐為主，腹瀉物無粘液、濃血，嘔吐呈現(xiàn)噴射狀，無腹痛，無畏寒的發(fā)熱，呈重度脫水，神志清楚但呈煩燥不安狀。經(jīng)臨床診斷和該院實(shí)驗(yàn)室檢測為O139群霍亂弧菌血凝陽性。市人民醫(yī)院公共衛(wèi)生科遂迅速報(bào)告市疾病預(yù)防控制中心，并按甲類傳染病進(jìn)行隔離治療。市疾控中心實(shí)驗(yàn)室迅速派人到醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室收集該患者復(fù)核標(biāo)本并到病房采集患者糞便標(biāo)本，經(jīng)專人專車送回實(shí)驗(yàn)室。經(jīng)對患者的兩份培養(yǎng)標(biāo)本(堿胨水增菌液和慶大霉素平板)進(jìn)行復(fù)核,結(jié)果為O139群霍亂弧菌血凝陽性。市疾控中心迅速向荊州市疾控中心報(bào)告,并派專人專車將標(biāo)本送至荊州市疾控中心，經(jīng)省市專家復(fù)核結(jié)果為O139群霍亂弧菌陽性。于時(shí)湖北省和荊州市兩級專家組連夜趕赴松滋指導(dǎo)疫情處置工作。松滋市立即成立疫情處置指揮部,迅速啟動疫情應(yīng)急預(yù)案。經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查,這是一起由于婚宴集中進(jìn)餐引發(fā)感染事件。經(jīng)查明，2 d內(nèi)參加婚宴就餐的人數(shù)為222人，主要集中分布于松滋市的陳店鎮(zhèn)、新江口鎮(zhèn)、老城鎮(zhèn)、涴市鎮(zhèn)、八寶鎮(zhèn)、沙道觀鎮(zhèn)等6個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，另外對宜昌的20名就餐者和荊州市沙市區(qū)的6名就餐者分別向當(dāng)?shù)丶部夭块T發(fā)出協(xié)查通知。

表1 首發(fā)病例病原學(xué)檢測結(jié)果

2 實(shí)驗(yàn)室采樣及檢測

2.1 采樣及檢測材料

2.1.1 采樣器材 含10 mL堿性蛋白胨水試管、含濃縮10倍堿性蛋白胨水50 mL的廣口瓶、500 mL空無菌廣口瓶、15 mL無菌采樣管、肛拭采樣器、棉簽、一次性紙杯和塑料漏斗、封口膜、UN2814標(biāo)本運(yùn)送箱等。

2.1.2 檢測器材 堿胨水增菌培養(yǎng)基、慶大霉素瓊脂培養(yǎng)基、霍亂O1群和O139群診斷血清、霍亂O1群和O139群快速診斷金標(biāo)試紙、氧化酶試紙、生物顯微鏡、暗視野顯微鏡等。

2.2 采樣方法、種類及數(shù)量

2.2.1 采樣方法 糞便、嘔吐物用棉簽取少量于10 mL堿胨水管中；水樣（含污水）用一次性紙杯和漏斗取約450 mL于10倍濃縮堿胨水采樣瓶中；食品或水產(chǎn)品取一定數(shù)量于無菌食品袋中密封；肛拭用肛拭采樣器插入直腸內(nèi)3～5 cm輕輕轉(zhuǎn)動取出然后放入含10 mL堿胨水試管中，棄去尾部。

2.2.2 標(biāo)本種類及數(shù)量 收集復(fù)核標(biāo)本2份（患者糞便堿胨水增菌液1份、慶大平板培養(yǎng)物1份）；整個疫情處置過程中實(shí)驗(yàn)室共采集和收集本次霍亂疫情相關(guān)樣品480份。其中患者糞便樣品或肛拭樣品63份，外環(huán)境樣品（主要是廁所糞便樣品和水樣）47份，食品（含水產(chǎn)品）16份，物表樣品14份，參加集中就餐人員肛拭樣品61份，密切接觸者肛拭樣品29份，各疫點(diǎn)消毒效果監(jiān)測樣品120份，腹瀉病例主動監(jiān)測130人份。

2.3 檢測方法

檢測方法按霍亂防治手冊（第6版）[1]和WS289-2008[2]。

2.3.1 增菌 標(biāo)本接種于堿性蛋白胨水培養(yǎng)基中置37℃增菌6～8 h。為了提高檢出率，可進(jìn)行二次增菌。

2.3.2 分離培養(yǎng) 取增菌管中菌膜下表層一接種環(huán)培養(yǎng)物于慶大霉素瓊脂平板中劃線分離，置37℃培養(yǎng)18～24 h。

2.4 菌株鑒定

2.4.1 玻片凝集試驗(yàn) 直接挑取慶大霉素瓊脂平板上的呈半透明狀、表面光滑濕潤、邊緣整齊、菌落中央略呈灰黑色的可疑菌落與O1群霍亂弧菌多價(jià)診斷血清及O139群霍亂弧菌診斷血清做玻片凝集試驗(yàn)，同時(shí)以生理鹽水作對照，如玻片上在1 min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊即斷為陽性。

2.4.2 氧化酶試驗(yàn) 挑取慶大平板上血清凝集呈陽性的可疑菌落接種于營養(yǎng)瓊脂平板中進(jìn)行純培養(yǎng)，取純培養(yǎng)物涂抹于氧化酶試紙條上，在1～2 min內(nèi)試紙變?yōu)樽霞t色至紫黑色的即判斷為氧化酶試驗(yàn)陽性，不變色判定為陰性。

2.4.3 革蘭氏染色 為革蘭氏陰性短小稍彎曲的桿菌，無芽孢，無莢膜，菌體兩端鈍圓或稍平。

2.4.4 動力試驗(yàn) 取純培養(yǎng)物在暗視野顯微鏡下可觀察到霍亂弧菌呈穿梭樣運(yùn)動。

2.4.5 黏絲試驗(yàn) 霍亂弧菌呈黏絲試驗(yàn)陽性。

2.4.6 快速試驗(yàn) 用霍亂O1群和O139群快速診斷金標(biāo)試紙做快速輔助檢測。為檢測贏得時(shí)間和提供下一步檢測方向。

3 結(jié)果

3.1 病原學(xué)檢測結(jié)果

因?yàn)樵撌写似鸹魜y疫情為湖北省2016年首發(fā)疫情，必須將首發(fā)病例標(biāo)本送至湖北省疾控中心復(fù)核鑒定。鑒定結(jié)果如表1。

3.2 病原菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果

該病原菌株對慶大霉素、阿奇霉素、氯霉素耐藥；氨芐西林、頭孢他啶中介；氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢噻肟、紅霉素、環(huán)丙沙星、甲氧芐啶等敏感。

3.3 相關(guān)樣品檢測結(jié)果

對本次霍亂疫情相關(guān)樣品480份經(jīng)檢測，O139霍亂弧菌血清凝集試驗(yàn)陽性的樣品共17份，其中患者9份（其中包含1例患者服藥后肛拭檢測仍為陽性樣品1份），健康帶菌者2份，外環(huán)境樣品6份（外環(huán)境陽性樣品主要是病家?guī)突S池消毒前的樣品）。其余463份樣品為O139霍亂弧菌血清凝集陰性。

4 討論與思考

①檢測工作在疫情處置中起到至關(guān)重要作用。在該次霍亂疫情應(yīng)急處置中，檢驗(yàn)人員有條不紊、夜以繼日地工作，在最短的時(shí)間內(nèi)迅速上報(bào)檢測結(jié)果，湖北省疾控中心和荊州市疾控中心的專家在第一時(shí)間內(nèi)趕到進(jìn)行復(fù)核確認(rèn)，使得松滋市政府及時(shí)啟動《突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急預(yù)案》四級應(yīng)急響應(yīng)，為疫情的聯(lián)防聯(lián)控、及時(shí)控制傳染源，切斷傳播途徑起到了非常重要作用。

②在處置疫情過程中，由于時(shí)間緊迫，對于患者早期的稀樣便標(biāo)本在進(jìn)行增菌培養(yǎng)的同時(shí)可直接接種于慶大霉素瓊脂培養(yǎng)上培養(yǎng)18～24 h，以節(jié)省時(shí)間[3]。

③增菌培養(yǎng)并不強(qiáng)求一定是6～8 h，應(yīng)注意觀察增菌液出現(xiàn)明顯的細(xì)菌生長現(xiàn)象，即可進(jìn)行分離培養(yǎng)。但原始樣品增菌時(shí)間超過20 h時(shí)，樣品中的大腸桿菌等大量繁殖，會給霍亂弧菌分離帶來較大影響[4]。

④對于帶菌狀況調(diào)查、恢復(fù)期患者檢測、水體樣品、食品、海水產(chǎn)品、物品涂抹標(biāo)本等可能目標(biāo)菌含量較少，為提高檢出率，需進(jìn)行二次增菌[5]。其方法是從第一次增菌的6～8 h培養(yǎng)物中，吸取0.1～0.2 mL表層培養(yǎng)物，接種到新鮮堿性蛋白胨水中，再放置37℃培養(yǎng)6～8 h后，進(jìn)行選擇性培養(yǎng)基的劃線分離。

⑤該次疫情的成功處置得益于湖北省近年來在疾控系統(tǒng)經(jīng)常性開展應(yīng)急演練。松滋市疾控中心在2008年全省舉行的縣級《霍亂疫情應(yīng)急處置》演練中，獲得了全省第一名。該次實(shí)戰(zhàn)正是應(yīng)急演練的翻版。正因?yàn)樵诙啻窝菥氈腥〉玫慕?jīng)驗(yàn)，才使得檢驗(yàn)人員在應(yīng)急采樣及檢測中能有條不紊、臨危不亂、快速準(zhǔn)確，不做無用功，少走彎路，為控制疫情蔓延贏得寶貴時(shí)間。希望今后象類似的應(yīng)急演練能夠在基層長期開展下去。

⑥該市的這次霍亂疫情為一起集中進(jìn)餐引發(fā)的群體性感染事件,雖然目前疫源檢索還沒有明確結(jié)論,但在此次疫情的發(fā)現(xiàn)和處置過程中,衛(wèi)計(jì)部門快速準(zhǔn)確的處置,流調(diào)組、檢測組、消殺組密切配合,僅僅只用了10 d的時(shí)間就控制住了疫情,沒有讓疫情蔓延和擴(kuò)散,沒有發(fā)生第二代病例,特別是檢驗(yàn)組人員在省市專家組的指導(dǎo)下，通過夜以繼日的辛勤工作，在第一時(shí)間內(nèi)發(fā)現(xiàn)陽性病例和帶菌者，讓醫(yī)療部門迅速采取治療和隔離措施，對防止疫情擴(kuò)散起到了至關(guān)重要的作用。這充分說明該省基層疾控中心實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)水平有了很大的提高。

[1]霍亂防治手冊（第6版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2013.

[2]WS289-2008霍亂診斷標(biāo)準(zhǔn)[S]中華人民共和國衛(wèi)生部,2008.

[3]吳強(qiáng)，王樹坤，楊汝松，等.2009年通?？h一起食源性O(shè)139型霍亂暴發(fā)疫情的調(diào)查與應(yīng)急處置[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇，2010（12）：1097-1099.

[4]涂正波，唐麗君，吳景文，等.一起輸入性O(shè)139型霍亂的暴發(fā)調(diào)查[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38（14）：2844-2845.

[5]趙江義，付小強(qiáng)，李莎，等.一起群體聚餐引起的O139型霍亂疫情分析[J].疾病監(jiān)測，2013，28(6)；508-510.

Analysis of Laboratory Test of Emergency Handling of a Cholera Epidemic

HU Lun-wen
Songzi Disease Control and Prevention Center,Songzi,Hubei Province,434200 China

ObjectiveTo further give play to and improve the important effect of laboratory test in the handling of epidemic and improve the test technical level.MethodsThe sample apparatus collection,collection method,sample species and number and laboratory test apparatus and test method were included and the test method was based on the cholera control handbook (sixth edition)and WS289-2008.ResultsOf all tested samples,the first stool collection of 8 cases,anal swab samples after medication collected of 1 case,anal swab of 2 cases without disease and 6 external environment samples were the positive vibrio cholerae O139 and the others were negative.ConclusionThe test work is of important significance to the handling of epidemic,and we should increase the emergency exercises force and frequency of epidemics and further improve the emergency handling ability and test technical level of the primary laboratories.

Cholera epidemic;Laboratory test;Emergency treatment

R115

A

1672-5654（2017）05（c）-0015-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.15.015

2017-02-20）

胡倫文（1965-），男，湖北松滋人，本科，副主任技師，研究方向：衛(wèi)生檢驗(yàn)。