氣相色譜-質(zhì)譜法檢驗生物檢材中的戊丙酸類藥物

蔡玉剛，王 文

（1.瀘州市公安局 四川瀘州 646000；2.四川警察學院 四川瀘州 646000）

氣相色譜-質(zhì)譜法檢驗生物檢材中的戊丙酸類藥物

蔡玉剛，王 文

（1.瀘州市公安局 四川瀘州 646000；2.四川警察學院 四川瀘州 646000）

目的：建立生物檢材中戊丙酸類藥物的氣相色譜-質(zhì)譜（GC/MS）檢驗方法。方法：戊丙酸鈉/戊丙酸鎂在酸性條件下形成戊丙酸，利用戊丙酸易溶于有機溶劑的原理，液液提取然后供氣質(zhì)聯(lián)用儀檢驗。結果：在胃內(nèi)容中戊丙酸4ug-500ug/m l范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系，最低檢出限4ug/m l，方法回收率大于70%。結論 經(jīng)過實驗驗證該方法真實可靠，且靈敏度高，易于操作，能用于生物檢材中戊丙酸類藥物的檢驗。

戊丙酸；戊丙酸鈉；戊丙酸鎂；生物檢材；氣相色譜-質(zhì)譜法

戊丙酸類藥物包括：戊丙酸鈉和戊丙酸鎂等，是不含氮的廣譜抗癲癇藥。對各型癲癇如對各型小發(fā)作、肌陣攣性癲癇、局限性發(fā)作、大發(fā)作和混合型癲癇均有效?？诜湛於耆饕植荚诩毎庖?，在血中大部分與血漿蛋白結合。多用于其它抗癲癇藥無效的各型癲癇病人，尤以小發(fā)作為最佳。為原發(fā)性大發(fā)作和失神小發(fā)作的首選藥。用于抗癲癇外，還可用于治療熱性驚厥、運動障礙、舞蹈癥、卟啉癥、精神分裂癥、帶狀皰疹引發(fā)的疼痛、腎上腺功能紊亂，以及預防酒精戒斷綜合征。

戊丙酸類藥物系鎮(zhèn)定類藥物，中毒案例在媒體上鮮有報道。該類藥物服用過量，表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹瀉、畏食等消化道癥狀，繼而出現(xiàn)肌無力，四肢震顫，共濟失調(diào)，嗜睡，意識模糊或昏迷，肝功能異常，血小板減少，胰腺炎。急性中毒者早期多因呼吸中樞麻痹致窒息性死，晚期多因呼吸衰竭，腦水腫或合并肺部感染致死。

戊丙酸類藥物口服后在腸內(nèi)轉化為兩個丙戊酸，而延遲吸收。體內(nèi)的蛋白結合率為80%～94%，分布容積0.13～0.22L/kg，血漿半衰期為5～20h。過量時可延長到30h，因蛋白結合部位飽和，可引起較多的循環(huán)游離部分。治療的血清水平是50～100μg/ml。血清丙戊酸＞500μg/ml在臨床上出現(xiàn)嗜睡、反應遲鈍；＞1000μg/ml出現(xiàn)昏迷和代謝紊亂等急性中毒反應

目前，國內(nèi)文獻上可查的檢驗戊丙酸類藥物的方法有熒光光度法、化學顯色法、紅外吸收法和氣相色譜法等。戊丙酸類藥物在酸性條件下迅速形成戊丙酸（圖1），所以檢測檢材中的戊丙酸具有可操作性，由于此類藥物是不含氮的鎮(zhèn)定藥物且電負性較低，利用氣相色譜-氮磷檢測器（GC-NPD）和氣相色譜-電子捕獲檢測器（GC-ECD）靈敏度較低，可能會造成漏檢。氣相色譜-質(zhì)質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）方法檢測具有靈敏度高，檢測限低等特點，適用于各種生物檢材中戊丙酸的檢測。本方法吸取了氣相色譜分離效率高，質(zhì)譜靈敏度高的特點，為戊丙酸類藥物中毒案件中戊丙酸檢驗鑒定提供有效的方法。

一、儀器與試劑

（一）試劑及標準物質(zhì)。

1.對照品。戊丙酸，標準品由公安部物證鑒定中心提供。

2.試劑。乙醇、三氯甲烷、無水硫酸鈉（以上試劑均為分析純）硝酸。（二）儀器和設備。

1.安捷倫7890A-5975C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC/MS）。

2.ThermoTDZ5高速離心機。

3.振蕩器。

二、操作及實驗條件

（一）操作步驟。

1.溶液配制。（1）配制濃度均為0.1mg/mL的戊丙酸標準溶液乙醇工作液，低溫保存，有效期6個月；（2）配制2ug/ml戊丙酸標準乙醇醇溶液做為質(zhì)控，室溫保存，有效期3個月；（3）配制4ug/ml、10ug/ml、60ug/ml、100ug/ml、300ug/ml、500ug/ml戊丙酸乙醇標準溶液，作為標準曲線工作液；（4）配制1mol/L的硝酸溶液，供檢材調(diào)PH值使用。

2.檢材處理。平行取檢材兩份各2克（2m l），分別加入1mol/L的硝酸溶液適量調(diào)PH=4，震蕩5分鐘，然后加入三氯甲烷5毫升，超聲波萃取10min，渦旋振蕩10min，加入無水硫酸鈉適量（去乳化），在10000r/min高速離心條件下離心10min，重復提取兩次，合并有機相在35℃?水浴鍋上濃縮揮至近干，用100ul乙醇定容，供GC/MS檢驗。

同時取等量空白相似檢材2份，1份添加2ug/ml戊丙酸乙醇標準液對照品作質(zhì)量控制檢材，另一份作空白比對檢材，與檢材平行操作。

（二）試驗條件。

色譜柱：HP-5MS石英毛細管柱 (30m×0.32mm×0.25um)（弱極性或者極性柱）；柱溫：100℃(1min） 30℃/min 280℃（6min）；進樣口溫度：280℃；接口溫度：250℃；載氣：高純氦，流速1mL/min，分流比10：1。

圖1 戊丙酸結構式

檢測器：EI，70eV，傳輸線溫度250℃，離子源溫度：230℃，四級桿溫度200℃，倍增器電壓自動調(diào)諧，掃描方式：SCAN（線性測試掃描方式為：SIM）掃描范圍40-500amu，掃描起始時間（溶劑延遲）3min。

三、檢驗與結果

（一）檢驗。

分別取0.1mg/m l戊丙酸標準、2.1.2的檢材提取液、空白添加提取液及空白液供氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC/MS）檢驗，每次進樣1ul，各進2次。

（二）結果。

1.線性關系考察。精密配制戊丙酸標準儲備液濃度分別為：4ug/ml、10ug/ml、60ug/ml、100ug/ ml、300ug/ml、500ug/ml，分別進行測定。以峰面積（y）為縱坐標，以濃度（x，ug/ml）為橫坐標做線性回歸，回歸方程為：y=3.578x-3.280；r2=0.99991.結果表明，戊丙酸在濃度4-500ug/ml范圍內(nèi)峰面積與濃度呈線性相關，最低檢測濃度為4ug/ml。

2.回收率和精密度實驗。取空白人血2ml，加入一定量的戊丙酸，制備成戊丙酸濃度為300ug/ ml和500ug/ml的樣品，利用相同的方法處理后供氣質(zhì)聯(lián)用檢驗，結果兩種濃度下戊丙酸的回收率分別為74.38%和76.59%。

3.結果評價。檢材提取液均檢出與0.1mg/ml戊丙酸標準液保留時間一致的色譜峰（檢材提取液保留時間為3.711min，戊丙酸標準液保留時間為3.731min，圖2），且質(zhì)譜特征離子碎片及相對豐度比與戊丙酸標準液一致 （戊丙酸的特征離子：m/z73、m/z41m/z102圖3），空白對照樣品無干擾。陽性結果可靠。

圖2 戊丙酸色譜圖

圖3 戊丙酸質(zhì)譜圖

四、討論與應用案例

（一）討論。

1.色譜柱的選擇。戊丙酸結構中含有-COOH是一類極性較大的物質(zhì)，選用弱極性柱或者中性柱分離比較好。本文考察了DP-1MS、HP-5MS、HP-INNOWAX(ms)和XO-17MS四種色譜柱，試驗表明HP-5MS和HP-INNOWAX(ms)兩種柱子峰形較好，無拖尾現(xiàn)象、分離效果較好。

2.去乳化劑的選擇。在生物檢材處理中，液液提取的乳化現(xiàn)象比較普遍，特別是血液提取，有效消除乳化現(xiàn)象是提高回收率的一個重要手段。本文選擇無水硫酸鈉作為去乳劑效果比較好，既能達到去乳化效果又沒有引入污染。

（二）應用案例。

2016年11月20日，XX市XX縣公安局接群眾報案稱：一男子在外出務工的路上出現(xiàn)身體不適，在送醫(yī)院搶救的過程中死亡。經(jīng)法醫(yī)解剖和病理結論，該男子系呼吸衰竭死亡，排除機械性窒息和疾病引起窒息死亡。筆者對常規(guī)的農(nóng)藥進行篩查均為陰性，對常見鎮(zhèn)定劑進行篩查的過程中檢出戊丙酸成分。經(jīng)查，該男子無癲癇史，偵查人員對死者關系人進行調(diào)查，最終鎖定一個與其有經(jīng)濟糾紛、有癲癇史的嫌疑人，其為了教訓死者，在死者吃的飯菜里加了大量戊丙酸鈉。

[1]中毒檢材中安定、利眠寧的定性及定量分析方法[S].GA/T 188-1998.

[2]中毒檢材中氯丙嗪、異丙嗪、奮乃靜的定性及定量分析方法[S].GA/T 189-1998.

[3]中毒檢材中巴比妥類藥物的定性定量分析方法[S].GA/T 102-1995.

[4]中國刑事科學技術大全.毒品和毒物檢驗[Z].2003.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[Z].

Analysis of Isoam yl Propionate Drugs in Biological Specimens by Gas Chromatography-M ass Spectrometry

CAIYu-gang WANGWen

Objective To establish themethod of Analysis of Isoamyl propionate drugs in biological specimens by GCMS.Methods The pentanoic acid sodium/pentanoic acid magnesium generated isoamyl propionate under acid condition,by using the easily soluble of isoamyl propionate in organic solvent,liquid-liquid extracted and then tested by GC-MS.Results within the scope of 4μg-500μg/mL,isoamyl propionate in gastric contents had good linear relationship with the peak area.The limits of detection was 4μg/mL,The recovery rate wasmore than 70%.Conclusion The method was reliable,high sensitivity,and easy to operate,can be applied for determination of isoamyl propionate drugs in biological specimens.

isoamyl propionate;pentanoic acid sodium;pentanoic acid magnesium;biological specimens,GC/MS

D918.93

：A

：1674-5612（2017）02-0072-04

（責任編輯：吳良培）

2017-02-11

蔡玉剛，（1980- ），男，四川遂寧人，瀘州市公安局刑事科學技術研究所工程師，研究方向：理化物證檢驗；王 文，（1967- ），男，四川宜賓人，四川警察學院副教授，研究方向：理化物證檢驗。