血清HER-2neu ECD水平與乳腺癌臨床特征及組織中HER-2neu表達的相關性*

張毅敏，王明麗，潘志文，單綠虎

（浙江省腫瘤醫(yī)院 檢驗科，浙江 杭州 310022）

血清HER-2neu ECD水平與乳腺癌臨床特征及組織中HER-2neu表達的相關性*

張毅敏，王明麗，潘志文，單綠虎

（浙江省腫瘤醫(yī)院 檢驗科，浙江 杭州 310022）

目的 觀察乳腺癌患者血清人類表皮生長因子受體-2（HER-2neu）胞外域部分（ECD）水平，探討其與乳腺癌臨床特征及組織中HER-2neu表達的相關性。方法選取2013年1月-2015年12月浙江省腫瘤醫(yī)院乳腺癌患者50例作為乳腺癌組，健康志愿者50例作為對照組。采用化學發(fā)光法測定血清HER-2neu ECD水平。采用免疫組織化學法測定乳腺癌組織中HER-2蛋白的表達。結果乳腺癌組血清HER-2neu ECD水平高于對照組（P＜0.05），乳腺癌組血清HER-2neu ECD陽性率高于對照組（P＜0.05）。50例乳腺癌組織標本中，HER-2neu陽性表達20例，陽性率為40.0%。乳腺癌患者TNM分期Ⅲ期、雌激素受體（ER）陰性、孕激素受體（PR）陰性及腫瘤直徑≥3 cm患者血清HER-2neu ECD陽性率高于TNM分期Ⅰ、Ⅱ期及ER陽性、PR陽性、腫瘤直徑＜3 cm患者（P＜0.05）。20例乳腺癌組織HER-2陽性患者中，9例血清HER-2neu ECD陽性；30例乳腺癌組織HER-2陰性患者中，29例血清HER-2neu ECD陰性，兩種方法一致性較好（Kappa=0.455，P=0.000）。結論乳腺癌患者血清HER-2neu ECD水平升高、乳腺癌組織中HER-2蛋白表達的一致性較好、血清HER-2neu ECD水平與TNM分期、ER、PR及腫瘤大小相關，可作為乳腺癌組織中HER-2蛋白表達的補充檢測方法。

乳腺癌；人類表皮生長因子受體-2；免疫組織化學

乳腺癌是女性主要的惡性腫瘤之一，治療后復發(fā)轉移率比較高，對患者的健康造成嚴重危害。隨著對惡性腫瘤分子機制研究的不斷深入，生物治療成為惡性腫瘤的治療方法之一，腫瘤的靶向性治療受到關注，乳腺癌是惡性腫瘤靶向治療的成功典范。赫賽汀是一種靶向治療藥物，能夠與過度表達人類表皮生長因子受體-2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2neu）的乳腺癌細胞特異性結合，對過度表達HER-2neu的乳腺癌的治療效果顯著[1-3]。HER-2neu在乳腺癌的診療中具有指導意義[4-5]。因此選擇合理、準確的HER-2neu檢測方法具有重要意義。乳腺癌組織中HER-2neu的檢測結果判斷具有主觀性，具有石蠟切片儲存中組織抗原丟失、患者無法提供乳腺癌組織標本、難以對HER-2neu進行動態(tài)監(jiān)測等缺點。而HER-2neu胞外域部分（extracellular domain，ECD）能夠在血清中檢測出來[6-7]，如果血清HER-2neu ECD能夠反映乳腺癌組織中HER-2neu狀態(tài)，則可以彌補乳腺癌組織中HER-2neu檢測的不足。本文對乳腺癌患者血清HER-2neu ECD水平進行檢測，并對其與乳腺癌臨床特征及組織中HER-2neu表達的相關性進行探討。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2013年1月-2015年12月在浙江省腫瘤醫(yī)院就診的乳腺癌患者50例作為乳腺癌組。健康志愿者50例作為對照組。乳腺癌患者均經(jīng)病理確診。乳腺癌組年齡（53.23±12.32）歲；浸潤性導管癌48例，浸潤性小葉癌1例，黏液性腺癌1例；TNM分期Ⅰ期9例，Ⅱ期20例，Ⅲ期21例；對照組年齡（52.78±11.54）歲，兩組年齡比較差異無統(tǒng)計學意義。本研究經(jīng)浙江省腫瘤醫(yī)院倫理委員會審批，研究對象簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 資料收集 收集乳腺癌患者的年齡、乳腺癌分期、大小、淋巴結轉移、雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、Ki67等臨床病理資料。

1.2.2 血清HER-2neu ECD水平測定 乳腺癌患者在入院未進行任何治療前抽血，對照組志愿者于體檢時抽血，均抽取空腹肘靜脈血，離心后留取血清，采用化學發(fā)光法測定血清HER-2neu ECD水平（HER-2neu ECD試劑盒購自上海西門子科技有限公司）。血清 HER-2neu ECD＞15 ng/ml為血清HER-2neu ECD陽性。

1.2.3 乳腺癌組織中HER-2neu蛋白表達測定取乳腺癌患者手術切除的新鮮乳腺癌組織標本，采用免疫組織化學法（免疫組織化學檢測試劑購自福州邁新生物科技有限公司）測定乳腺癌組織中HER-2neu蛋白的表達，結果判斷：細胞膜無著色或≤10%著色不完整、著色弱為（-）；＞10%細胞膜著色不完整、著色弱為（+）；＞10%細胞膜著色不完整、著色中，或≤10%著色完整為（++）；＞10%著色完整、著色強為（+++）。（-）或（+）為陰性；（++）為可疑，（+++）為陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，用t檢驗，計數(shù)資料以百分比或率表示，用χ2檢驗，血清HER-2neu ECD與乳腺癌組織中HER-2neu的一致性用Kappa檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清HER-2neu ECD水平比較

兩組血清HER-2neu ECD水平比較，經(jīng)t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），乳腺癌組患者血清HER-2neu ECD水平高于對照組。兩組血清HER-2neu ECD陽性率比較，經(jīng)χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），乳腺癌組血清HER-2neu ECD陽性率高于對照組。見表1。

2.2 乳腺癌組織中HER-2neu蛋白的表達

50例乳腺癌組織標本中，HER-2neu陽性表達20例，陽性率為40.0%，HER-2neu陰性表達30例，陰性率為60.0%。見附圖。

2.3 乳腺癌患者血清HER-2neu ECD與乳腺癌臨床病理特征的關系

乳腺癌患者血清HER-2neu ECD與TNM分期、ER、PR 及腫瘤大小有關（P＜0.05），與年齡、Ki67、淋巴結轉移無關（P＞0.05），其中TNM分期Ⅲ期、ER陰性、PR陰性及腫瘤直徑≥3 cm患者血清HER-2neu ECD陽性率高于TNM分期Ⅰ、Ⅱ期及ER陽性、PR陽性、腫瘤直徑＜3 cm患者（P＜0.05）。見表2。

表1 兩組患者血清HER-2neu ECD水平比較（n=50，±s）

表1 兩組患者血清HER-2neu ECD水平比較（n=50，±s）

血清HER-2 neu ECD陽性 例（%）乳腺癌組 14.65±7.74 10（20.0）對照組 4.71±1.83 0（0.0）χ2/t值 8.836 11.111P值 0.000 0.001組別 血清HER-2neu ECD/（ng/ml）

附圖 乳腺癌組織中HER-2neu蛋白的表達（免疫組織化學法×200）

表2 乳腺癌患者臨床病理特征與血清HER-2neu ECD的關系臨床病理特征

續(xù)表2

2.4 乳腺癌組織中HER-2與血清HER-2neu ECD的關系

20例乳腺癌組織HER-2neu陽性患者中，9例血清HER-2neu ECD陽性，30例乳腺癌組織HER-2neu陰性患者中，29例血清HER-2neu ECD陰性，兩種方法一致性較好（Kappa=0.455，P=0.000）。見表3。

表3 乳腺癌組織中HER-2與血清HER-2neu ECD的關系 例

3 討論

HER-2neu是人表皮生長因子受體家族成員，具有酪氨酸激酶活性，定位在17q21染色體上，為跨膜糖蛋白。HER-2neu的蛋白結構由細胞外段（extracellular-domain，ECD）、跨膜區(qū)域、胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)域組成。ECD富含半光氨酸，具有穩(wěn)定構型和激活配體的功能；跨膜區(qū)域為親脂區(qū)域；胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)域是HER2neu的功能區(qū)，是腺嘌呤核苷三磷酸的結合位點，具有酪氨酸激酶活性。乳腺癌患者HER-2neu狀態(tài)在乳腺癌的診斷和治療中具有重要意義[8-9]，組織中HER-2neu的表達是乳腺癌靶向和內(nèi)分泌治療的選擇依據(jù)[10-11]。目前HER-2neu的檢測方法主要為免疫組織化學法和熒光原位雜交法，這2種方法都是對乳腺癌病理組織標本進行檢測，具有一定局限性。免疫組織化學法在標本處理過程中蛋白容易變形、破壞，有產(chǎn)生假陰性和假陽性的風險；熒光原位雜交法穩(wěn)定性、敏感性及重復性好，但費用較高。兩者對病理標本進行檢測，無法動態(tài)觀察HER-2neu的變化。

HER-2neu ECD無高度親和的特異性配體，與其他家族成員形成的異二聚體能夠導致酪氨酸激酶磷酸化，引起信號連鎖反應，抑制細胞凋亡，促進細胞增殖，從而導致腫瘤形成。HER-2neu ECD能夠在血清中被檢測到，可以作為一種血清學標志物。有研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者血清HER-2neu ECD水平升高，在乳腺癌的診斷和治療中具有一定臨床價值[12-13]。樊璠等[14]研究發(fā)現(xiàn)，晚期乳腺癌患者血清HER-2neu水平與乳腺癌的大小、脈管瘤栓、遠處轉移數(shù)目及化療療效有關；晚期乳腺癌患者血清HER-2neu ECD與乳腺癌組織中HER-2neu一致性較好，而在早期乳腺癌中兩者無相關性；陳詩強[15]研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者血清HER-2neu水平升高，血清HER-2neu可作為乳腺癌的療效評價指標。本研究結果發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組患者血清HER-2neu ECD水平高于對照組，乳腺癌組血清HER-2neu ECD陽性率高于對照組。乳腺癌患者TNM分期Ⅲ期、ER陰性、PR陰性及腫瘤直徑≥3 cm患者血清HER-2neu ECD陽性率高于TNM分期Ⅰ、Ⅱ期及ER陽性、PR陽性、腫瘤直徑＜3 cm患者，乳腺癌組織中HER-2neu和血清HER-2neu ECD陽性符合率為45.0%，陰性符合率為96.7%，2種方法一致性較好。由此可見，血清HER-2neu ECD檢查能夠對HER-2neu狀況進行動態(tài)、實時、量化監(jiān)測，且與組織中HER-2neu的一致性較好，可以彌補乳腺癌組織中HER-2neu檢測的不足，在乳腺癌的治療期間可以為治療方案提供依據(jù)，實施個體化治療，在乳腺癌的隨訪及療效檢測中具有重要意義。

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（童穎丹 編輯）

Correlations of serum HER-2neu ECD with clinical features and HER-2neu expression of breast cancer tissues in breast cancer patients*

Yi-min Zhang,Ming-li Wang,Zhi-wen Pan,Lv-hu Shan
(Clinical Laboratory,Zhejiang Cancer Hospital,Hangzhou,Zhejiang 310022,China)

ObjectiveTo observe the level of extracellular domain (ECD)of human epidermal growth factor receptor-2 (HER-2neu)in patients with breast cancer,and to investigate its relationship with the clinical characteristics of breast cancer and the expression of HER-2neu in breast cancer tissues.MethodsFifty patients with breast cancer were selected as the breast cancer group and 50 cases of healthy volunteers were selected as the control group in Zhejiang Cancer Hospital from January 2013 to December 2015.The serum level of HER-2neu ECD was measured by chemiluminescence.The expression of HER-2 protein in breast cancer tissues was detected by immunohistochemistry.ResultsThe serum level of HER-2neu ECD in the breast cancer group was significantly higher than that in the control group(P＜0.05).The positive rate of serum HER-2neu ECD in the breast cancer group was higher than that in the control group (P＜0.05).In the 50 cases of breast cancer tissue specimens,20 cases had positive expression of HER-2neu,the positive rate was 40.0%.The positive rates of HER-2neu ECD in the patients with TNM stageⅢ,negative ER,negative PR and tumor≥3 cm were higher than those in the patients with TNM stageⅠ andⅡ,positive ER,positive PR and tumor＜3 cm (P＜0.05).Of the 20 breast cancer patients with positive HER-2 in the breast cancer tissues,9 patients were positive for serum HER-2neu ECD.Of the 30 breast cancer patients with negative HER-2 in breast cancer tissues,29 cases were negative for serum HER-2neu ECD.The two methods were consistent (Kappa=0.455,P=0.000).ConclusionsThe serum level of HER-2neu ECD in patients with breast cancer is increased,and it is consistent with the expression of HER-2 protein in breast cancer tissues.The serum level of HER-2neu ECD is associated with TNM stage,ER,PR and tumor size,therefore it can be used as the supplementary method for detection of HER-2 protein expression in breast cancer tissues.

breast cancer;human epidermal growth factor receptor-2;immunohistochemistry

R737.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.12.017

1005-8982（2017）12-0084-04

2017-01-23

2016年浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃（No：2016KYB034）