老年三陰乳腺癌組織中MMP-9和CD147的表達(dá)及意義

張玉揚(yáng) 張 丹 孫麗麗 董奇觀 程 麗 張 偉 程日霞 趙 林

(撫順礦務(wù)局總醫(yī)院腫瘤內(nèi)二科，遼寧 撫順 113008)

老年三陰乳腺癌組織中MMP-9和CD147的表達(dá)及意義

張玉揚(yáng) 張 丹 孫麗麗 董奇觀 程 麗 張 偉 程日霞 趙 林

(撫順礦務(wù)局總醫(yī)院腫瘤內(nèi)二科，遼寧 撫順 113008)

目的 探討基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9和CD147在老年三陰乳腺癌(TNBC)中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響。方法 行手術(shù)切除治療的年齡≥60歲TNBC患者組織標(biāo)本63例，51例老年乳腺纖維瘤組織，采用免疫組化方法，檢測(cè)MMP-9和CD147的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征的相關(guān)性，通過Kaplan-Meier生存曲線法計(jì)算不同組別的老年TNBC的生存率。結(jié)果 MMP-9和CD147在老年TNBC中的表達(dá)明顯高于老年乳腺纖維瘤(P<0.05)；MMP-9和CD147的表達(dá)與老年TNBC腫瘤直徑、病理學(xué)分級(jí)、組織學(xué)分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移情況以及Ki67高表達(dá)(>30%) 有關(guān)(均P<0.05)，而與P53的表達(dá)無關(guān)(P>0.05)；34例MMP-9陽性的老年TNBC中位生存時(shí)間(OS)為28.0個(gè)月，95%CI為10.0～41.3個(gè)月，29例MMP-9陰性的老年TNBC OS為34.0個(gè)月，95%CI(12.0～49.6個(gè)月)，MMP-9陽性生存率明顯低于MMP-9陰性(P=0.015)；37例CD147陽性的老年TNBC OS為26.0個(gè)月，95%CI為10.0～35.2個(gè)月，26例CD147陰性的老年TNBC OS為35.0個(gè)月，95%CI為11.0～51.7個(gè)月，CD147陽性生存率明顯低于CD147陰性(P=0.007)。結(jié)論 MMP-9和CD147在老年TNBC中表達(dá)顯著增高，且與TNBC的惡性進(jìn)展密切相關(guān)，有可能成為老年TNBC臨床治療新靶點(diǎn)。

三陰乳腺癌；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；CD147

三陰乳腺癌(TNBC)是指孕激素受體(PR)、雌激素受體(ER)、人表皮生長因子受體(Her)-2均陰性的乳腺癌，是一種特殊類型的乳腺癌亞型，占乳腺癌的15%～25%〔1〕，但國內(nèi)外對(duì)老年人TNBC的研究甚少。老年TNBC的組織學(xué)特點(diǎn)表現(xiàn)為組織分級(jí)高、核分裂數(shù)目多、易發(fā)生局部浸潤轉(zhuǎn)移、總生存率和無瘤生存率較低〔2，3〕。由于其不表達(dá)激素受體和Her-2，則不能進(jìn)行內(nèi)分泌及抗Her-2靶向治療(曲妥珠單克隆抗體)。本研究通過免疫組化方法，檢測(cè)老年TNBC組織切片中CD147和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9蛋白表達(dá)水平，結(jié)合其臨床病理特征指標(biāo)以探討MMP-9和CD147在老年TNBC表達(dá)中的相關(guān)性及對(duì)預(yù)后的影響。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 選取2008年6月至2010年6月來撫順礦務(wù)局總醫(yī)院行手術(shù)切除治療的年齡≥60歲TNBC患者組織標(biāo)本63例，標(biāo)本均經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，經(jīng)病理學(xué)、免疫組化等證實(shí)。患者均為女性，年齡60～77〔平均(67.5±4.3)〕歲。根據(jù)《NCCN乳腺癌臨床實(shí)踐指南》(中國版)2014進(jìn)行分型〔4〕，其中Ⅰ期22例，Ⅱ期19例，Ⅲ期19例，Ⅳ期3例。腫瘤直徑≤2 cm 25例，>2 cm 38例。腋窩淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者33例，轉(zhuǎn)移者30例。病例分型：浸潤性導(dǎo)管癌48例，非浸潤性導(dǎo)管癌15例。本組研究所選的TNBC患者均經(jīng)過有效的臨床治療，包括保乳+腋淋巴結(jié)清掃術(shù)和乳腺癌根治術(shù)等。同時(shí)收集51例老年女性乳腺纖維瘤組織作為對(duì)照。本研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查，獲得批準(zhǔn)?；颊呒凹覍倬炇鹬橥鈺?。

1.2 主要試劑 免疫組化SP試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑、鼠抗人單克隆PR抗體、鼠抗人單克隆ER抗體、鼠抗人單克隆Her-2抗體、鼠抗人單克隆MMP-9抗體均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，兔抗人多克隆CD147抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組化染色及結(jié)果判定 對(duì)所有石蠟切片采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)法染色，具體操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行，采用已知陽性片作陽性對(duì)照，同時(shí)采用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。MMP-9定位組織細(xì)胞膜或胞質(zhì)，CD147蛋白表達(dá)定位組織細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，出現(xiàn)明顯的黃色或棕黃色顆粒視為著色陽性，參考袁中玉等〔5〕提出的染色標(biāo)準(zhǔn)(在高倍鏡下對(duì)每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞/視野，共1 000個(gè))綜合陽性細(xì)胞率合計(jì)染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合評(píng)估：未見陽性細(xì)胞為陰性(-)，陽性細(xì)胞數(shù)<10%為弱陽性(+)，10%～50%為中度陽性()，≥50%為強(qiáng)陽性()。

1.4 術(shù)后隨訪 隨訪至2015年12月，隨訪時(shí)間為10～80個(gè)月，中位隨訪時(shí)間49個(gè)月，總生存時(shí)間(OS)的計(jì)算為治療開始到死于任何疾病、最后隨診或觀察截止的時(shí)間。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，Kaplan-Meier法計(jì)算生存率、繪制生存曲線，各組生存率比較用Log rank檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 MMP-9和CD147在老年TNBC和乳腺纖維瘤組織中的表達(dá)情況 MMP-9和CD147均定位于乳腺癌切片組織細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)，染色陽性為黃色或棕黃色顆粒狀，分布不均，顯色深淺不同，呈現(xiàn)片狀、灶狀或散在分布，而在對(duì)照組乳腺纖維瘤病變中導(dǎo)管腺上皮細(xì)胞中輕度著色或不著色(見圖1)。63例老年TNBC切片組織中，MMP-9和CD147陽性率分別為54.0%(34/63，-29例，+14例，11例，9例)和58.7%(37/63，-26例，+12例，15例，0例)；51例老年乳腺纖維瘤組織中，MMP-9和CD147的陽性率分別為33.3%(17/51，-34例，+15例，2例，0例)和29.4%(15/51，-36例，+13例，2例，0例)，MMP-9和CD147在老年TNBC中的表達(dá)明顯高于老年乳腺纖維瘤(P<0.01)。

2.2 MMP-9和CD147在老年TNBC中的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系 MMP-9和CD147的表達(dá)與老年TNBC腫瘤直徑、病理學(xué)分級(jí)、組織學(xué)分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移情況及Ki67高表達(dá)(>30%)有關(guān)(P<0.05)，而與P53的表達(dá)無關(guān)(P>0.05)。見表1。

圖1 MMP-9和CD147在老年TNBC和老年乳腺纖維瘤中的表達(dá) (SP法，×200)

表1 老年TNBC中MMP-9和CD147的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n)

2.3 MMP-9和CD147表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響 對(duì)TNBC患者隨訪期間，死亡52例，其中46例死于乳腺癌的進(jìn)一步進(jìn)展，6例死于其他疾病。隨訪的34例MMP-9陽性的老年TNBC中29例死亡，生存率14.7%，中位生存時(shí)間28.0個(gè)月，95%CI為10.0～41.3個(gè)月，29例MMP-9陰性的老年TNBC中死亡23例，生存率為20.7%，中位生存時(shí)間為34.0個(gè)月，95%CI為12.0～49.6個(gè)月，MMP-9陽性生存率明顯低于MMP-9陰性(P=0.015)；37例CD147陽性的老年TNBC中32死亡，生存率為13.5%，中位生存時(shí)間為26.0個(gè)月，95%CI為10.0～35.2個(gè)月，26例CD147陰性的老年TNBC中死亡20例，生存率為23.1%，中位生存時(shí)間為35.0個(gè)月，95%CI為11.0～51.7個(gè)月，CD147陽性生存率明顯低于CD147陰性(P=0.007)。見圖2，圖3。

圖2 MMP-9陽性表達(dá)組與陰性表達(dá)組OS曲線比較

圖3 CD147陽性表達(dá)組與陰性表達(dá)組OS曲線的比較

3 討 論

TNBC的臨床特征包括病理組織學(xué)分級(jí)高、腫瘤體積大、易轉(zhuǎn)移、內(nèi)分泌及抗HER-2靶向治療無效，因而TNBC處于何種TNM分期，其預(yù)后均較差，5年生存率不足15%〔5〕。研究發(fā)現(xiàn)，TNBC與患者年齡和組織學(xué)分型相關(guān)，已證實(shí)老年TNBC中浸潤性導(dǎo)管癌占83%〔6〕，其次是腺癌和小葉癌。由于老年人生物功能有所減退，手術(shù)放化療耐受性差，同時(shí)TNBC的治療缺乏明確的治療靶點(diǎn)，揭示老年TNBC的預(yù)后更差。

MMP是Zn2+依賴性高度保守的內(nèi)肽酶，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)以及基底膜的所有膠原蛋白質(zhì)，目前共發(fā)現(xiàn)20種MMP，按照其靶向作用物的不同，將其分為4大類：肽原酶、明膠酶、膜型MMP和基質(zhì)降解素。MMP-9(明膠酶B，92 kD)隸屬于明膠酶中的一個(gè)亞型，具有MMP的共同結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，在細(xì)胞基質(zhì)的代謝調(diào)節(jié)中起重要作用，其可通過降解基底膜Ⅳ型膠原從而破壞其完整性，利于腫瘤的局部浸潤、生長以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移〔7〕。CD147是一種表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面的黏附分子，參與細(xì)胞間及細(xì)胞與基質(zhì)間的黏附，在惡性腫瘤細(xì)胞表面呈現(xiàn)過表達(dá)狀態(tài)。CD147在機(jī)體內(nèi)廣泛分布，具有不同的生理功能并參與多種生理及病理過程。研究表明〔8〕，CD147是MMP-9的上游調(diào)節(jié)因子，能夠通過多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑調(diào)控MMP的產(chǎn)生。研究發(fā)現(xiàn)〔9〕，在腫瘤組織中，CD147的高表達(dá)能夠刺激MMP-9基因高轉(zhuǎn)錄及其高分泌而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。Li等〔10〕通過將CD147的反義RNA轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞，MMP-9的分泌明顯減少，癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移也出現(xiàn)明顯抑制。

本研究結(jié)果表明，MMP-9和CD147在老年TNBC組織中的表達(dá)水平明顯增加，高于老年乳腺纖維瘤組織，而且，MMP-9與CD147的表達(dá)水平呈現(xiàn)正相關(guān)趨勢(shì)，這與前期文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果類似〔11〕。同時(shí)，本研究結(jié)果表明MMP-9和CD147在老年TNBC腫瘤細(xì)胞發(fā)生、生長以及轉(zhuǎn)移中相互影響，相互作用。黃曉曦等〔12〕研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌 MMP-2和(或)MMP-9的表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，薛松等〔13〕發(fā)現(xiàn)，CD147蛋白表達(dá)與轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)β1及其Ⅰ型受體(TGFβR I)表達(dá)均呈顯著正相關(guān)，這可能與它的生物學(xué)特性更具侵襲性及缺乏有效的減危手段有關(guān)，腫瘤惡性程度越高，轉(zhuǎn)移越早，陽性表達(dá)越高，提示患者的預(yù)后越差。

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〔2016-12-11修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

趙 林(1980-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事乳腺癌綜合治療研究。

張玉揚(yáng)(1980-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事腫瘤的綜合治療研究。

R73

A

1005-9202(2017)13-3257-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.061