胸腺瘤組織中表皮生長因子受體和胰島素樣生長因子-1受體的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系

李新宇 張海云 何榮琦 張萬飛 許榮譽(yù)

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院胸部腫瘤外科，福建 泉州 362000)

胸腺瘤組織中表皮生長因子受體和胰島素樣生長因子-1受體的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系

李新宇 張海云 何榮琦 張萬飛 許榮譽(yù)

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院胸部腫瘤外科，福建 泉州 362000)

目的 探討表皮生長因子受體(EGFR)、胰島素樣生長因子-1受體(IGF-1R)在胸腺瘤組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。方法 60例胸腺瘤患者及60例胸腺濾泡性增生患者，應(yīng)用免疫組化法測定胸腺瘤患者及胸腺濾泡性增生患者組織中EGFR、IGF-1R陽性表達(dá)情況，分析胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R的表達(dá)及與臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 胸腺瘤患者組織中EGFR、IGF-1R陽性表達(dá)率明顯高于胸腺濾泡性增生患者(P<0.05)。EGFR陽性表達(dá)與Masaoka分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，IGF-1R陽性表達(dá)與Masaoka分期有關(guān)(P<0.05)。EGFR陽性表達(dá)者5年生存率低于EGFR陰性表達(dá)者(χ2=5.040,P=0.025)；IGF-1R陽性表達(dá)者5年生存率低于IGF-1R陰性表達(dá)者(χ2=5.367,P=0.020)。結(jié)論 胸腺瘤患者組織中EGFR、IGF-1R高表達(dá)，其陽性表達(dá)可能與胸腺瘤發(fā)生及進(jìn)展相關(guān)，EGFR、IGF-1R高表達(dá)可影響胸腺瘤患者生存率，可提示患者預(yù)后不良。

表皮生長因子受體；胰島素樣生長因子-1受體；胸腺瘤

胸腺瘤是縱隔腫瘤中較常見的一種，其臨床病理特征表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞內(nèi)伴有非腫瘤性淋巴細(xì)胞浸潤〔1〕。胸腺瘤患者由于免疫系統(tǒng)失衡會產(chǎn)生多種免疫疾病(如常見的重癥肌無力等)〔2〕。關(guān)于胸腺瘤的發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚，但相關(guān)細(xì)胞因子的異常表達(dá)與胸腺瘤的發(fā)生有密切的關(guān)系。上皮生長因子(EGF)是機(jī)體中具有多種生物活性的細(xì)胞因子，可通過上調(diào)胸腺組織中上皮生長因子受體(EGFR)而促進(jìn)上皮細(xì)胞分化、增生、遷移及浸潤〔3〕。研究指出〔4〕，胸腺組織中EGFR異常表達(dá)與胸腺瘤發(fā)生、進(jìn)展有密切的關(guān)系。胰島素樣生長因子-1受體(IGF-1R)屬于糖蛋白跨膜受體，可促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移、抑制細(xì)胞凋亡，且與腫瘤發(fā)生、生長及新生血管形成有密切的關(guān)系〔5〕。本研究將旨在探討EGFR、IGF-1R在胸腺瘤組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料及方法

1.1 臨床資料 2011年1月至2016年1月選取福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院外科收治的60例胸腺瘤患者，均經(jīng)病理組織確診，術(shù)前均未接受過放化療治療。其中男35例，女 25例，年齡 40～78〔平均(61.2±2.4)〕歲，腫瘤直徑：<5 cm 20例，≥5 cm 40例；WHO分型：A型8例，AB型12例，B1型15例，B2型 15例，B3型10例；Masaoka分期：Ⅰ+Ⅱ 29例，Ⅲ+Ⅳ 31例；合并重癥肌無力 22例，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 25例。另選取同期收治的60例胸腺濾泡性增生患者為對照，男 32例，女 28例，年齡 28～80〔平均(60.8±3.2)〕歲，兩組性別、年齡比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 免疫組織化學(xué)法

1.2.1 試劑及儀器 EGFR鼠抗人單克隆抗體(美國Sigma公司)；EGFR試劑盒(上海酶聯(lián)實業(yè)有限公司)；IGF-1R鼠抗人單克隆抗體(美國NeoMarkers公司)；IGF-1R試劑盒(上海酶聯(lián)實業(yè)有限公司)；電子顯微鏡(深圳超眼科技有限公司)。

1.2.2 測定方法 應(yīng)用免疫組化法測定胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R蛋白表達(dá)，染色步驟：將胃癌組織及正常胃黏膜組織標(biāo)本蠟塊切成4 μm厚切片，常溫下乙醇梯度脫水，二甲苯脫蠟，應(yīng)用3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶，采用0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗標(biāo)本2次，常溫下應(yīng)用正常羊血清工作液封閉樣本10 min，依次加入EGFR鼠抗人單克隆抗體及IGF-1R鼠抗人單克隆抗體，采用PBS沖洗標(biāo)本2次，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素工作液，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中(型號：DNP-9022；上海精宏實驗設(shè)備有限公司)孵育25min，經(jīng)PBS沖洗后，經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色，蘇木素復(fù)染，采用中性樹膠封固。

1.3 結(jié)果判定 由病理科2名高年資醫(yī)生在雙盲情況下閱片，EGFR、IGF-1R陽性表達(dá)均以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為標(biāo)準(zhǔn)，采用半定量評分法對染色效果進(jìn)行評價，以高倍視野下500個細(xì)胞著色情況進(jìn)行積分，根據(jù)著色強(qiáng)度(深淺)分別計為0分(無色)～3分(棕褐色)；根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比計分：陽性細(xì)胞陰性為0分，≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。染色強(qiáng)度積分=著色強(qiáng)度計分×陽性細(xì)胞數(shù)，0～2分為陰性(-)，3～5分為弱陽性(+)，6～9分為陽性()，10～12分為強(qiáng)陽性()。陽性率=(弱陽性+陽性+強(qiáng)陽性)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2檢驗、Kaplan-Meier曲線分析。

2 結(jié) 果

2.1 EGFR、IGF-1R陽性表達(dá) 胸腺瘤患者組織中EGFR、IGF-1R陽性表達(dá)率〔54例(90.00%)，50例(83.33%)〕明顯高于胸腺濾泡性增生患者〔2例(3.33%)，3例(5.00%)；χ2=90.536，74.649，均P=0.000〕，見圖1。

2.2 EGFR、IGF-1R陽性表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系 EGFR陽性表達(dá)與Masaoka分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，IGF-1R陽性表達(dá)與Masaoka分期有關(guān)(P<0.05)。見表1。

2.3 EGFR、IGF-1R陽性表達(dá)與胸腺瘤預(yù)后的關(guān)系 2011年1月至2016年1月對患者進(jìn)行隨訪，隨訪時間12～60個月，平均35個月，共56例患者獲得隨訪，其中4例失訪，共32例(57.14%)患者生存。采用單因素Kaplan-Meier曲線分析數(shù)據(jù)顯示，EGFR陽性表達(dá)者5年生存率為52.00%(26/50)，低于EGFR陰性表達(dá)者100.00%(6/6)(χ2=5.040,P=0.025)。IGF-1R陽性表達(dá)者5年生存率為50.00%(23/46)，低于IGF-1R陰性表達(dá)者90.00%(9/10)(χ2=5.367,P=0.020)。

圖1 半定量評分法評價EGFR、IGF-1R表達(dá)(×400)

表1 EGFR、IGF-1R陽性表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

EGFR是具有酪氨酸激酶活性的細(xì)胞膜表面糖蛋白受體，廣泛存在于哺乳動物上皮細(xì)胞膜表面，并在上皮惡性腫瘤中陽性表達(dá)〔6〕。EGFR與相關(guān)配體在胞內(nèi)發(fā)生磷酸化作用而激活細(xì)胞內(nèi)一系列信號傳導(dǎo)通路，從而啟動機(jī)體多種生命活動〔7〕。EGFR自身突變會導(dǎo)致配體表達(dá)增多，非配體持續(xù)活動，從而導(dǎo)致細(xì)胞生長失去調(diào)控性，使得細(xì)胞無限增生〔8〕。研究指出〔9〕，EGFR過表達(dá)與惡性腫瘤發(fā)生、增殖、浸潤性、活動性、黏連性、新生血管形成及細(xì)胞凋亡抑制有密切的關(guān)系。在腦膠質(zhì)細(xì)胞癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌等多種癌癥組織中均發(fā)生EGFR過表達(dá)的情況〔10〕。本研究結(jié)果提示在胸腺瘤患者中存在EGFR高表達(dá)的情況，且EGFR在胸腺瘤的發(fā)展中起到重要的作用，可促進(jìn)胸腺瘤從包膜完整性進(jìn)展到浸潤周圍組織器官。Kaplan-Meier曲線分析提示EGFR陽性表達(dá)與胸腺瘤患者不良預(yù)后有密切關(guān)系。EGFR在胸腺瘤中的作用機(jī)制可能與其異常激活PI3K-AKT信號通路及RAS-RAD-MAPK信號通路、誘導(dǎo)細(xì)胞增生、抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。

IGF-1R屬于糖蛋白跨膜受體，廣泛存在于人胞質(zhì)區(qū)、跨膜區(qū)及胞外區(qū)。研究顯示〔11〕，IGF-1R在多種惡性腫瘤中均存在過表達(dá)，如前列腺癌、胃腸道惡性腫瘤、卵巢癌、乳腺癌、肺癌等。Zucali等〔12〕研究指出，IGF-1R可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、分化及抑制細(xì)胞凋亡，與腫瘤增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。Girard等〔13〕對56例胸腺惡性腫瘤及7例胸腺良性病變患者應(yīng)用免疫組化法測定IGF-1R，結(jié)果表明惡性病變組IGF-1R陽性表達(dá)率為86%，而良性病變組為43%，且IGF-1R表達(dá)水平與胸腺組織惡性病變患者臨床病理特征有關(guān)。本研究結(jié)果提示在胸腺瘤患者中存在IGF-1R過表達(dá)的情況，且IGF-1R可能參與胸腺瘤病理浸潤、分化過程。另外IGR-1R過表達(dá)可影響胸腺瘤患者生存率，通過測定胸腺瘤組織IGF-1R表達(dá)情況可預(yù)測胸腺瘤患者遠(yuǎn)期預(yù)后情況。IGF-1R在胸腺瘤中的作用機(jī)制可能由于IGF-1R異常表達(dá)可促使血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)上調(diào)，促使腫瘤血管形成及生長。此外，IGR-1R信號轉(zhuǎn)導(dǎo)可改變腫瘤細(xì)胞黏附性，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞向惡性方向發(fā)展，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長、浸潤及轉(zhuǎn)移。

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2 張云峰,于 磊,景 筠,等.合并重癥肌無力的胸腺瘤治療與預(yù)后特點(diǎn)分析〔J〕.中華外科雜志,2015;53(8):612-6.

3 馬遇慶,師 藝,崔文麗,等.EGFR異常表達(dá)與胸腺上皮性腫瘤組織學(xué)分型關(guān)系研究〔J〕.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2014;37(9):1144-7.

4 李文姍,余 琦,李 寧,等.胸腺瘤中EGFR和IGF-1R的表達(dá)及其意義〔J〕.臨床與實驗病理學(xué)雜志,2016;32(3):297-300.

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〔2017-04-07修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

泉州市科技計劃項目(No.2012Z6)

許榮譽(yù)(1964-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事胸部腫瘤外科研究。

李新宇(1979-)，男，主治醫(yī)師，主要從事胸部腫瘤外科研究。

R73

A

1005-9202(2017)13-3240-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.054