銀屑平丸對銀屑病急性期患者表皮組織VEGF、KGF和AREG的影響*

張霞 康曉晶 繆澤群 王恒

（湖北省十堰市太和醫(yī)院，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北十堰442000）

銀屑平丸對銀屑病急性期患者表皮組織VEGF、KGF和AREG的影響*

張霞 康曉晶 繆澤群 王恒△

（湖北省十堰市太和醫(yī)院，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北十堰442000）

目的觀察銀屑平丸對銀屑病急性期患者表皮組織雙調(diào)蛋白（AREG）、角質(zhì)形成細胞生長因子（KGF）及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的影響。方法將316例銀屑病急性期患者按入院先后分為對照組和銀屑平丸組。對照組口服阿維A、窄譜中波紫外線局部（或全身照射）及外用鹵米松軟膏，銀屑平丸組在此治療基礎(chǔ)上加服銀屑平丸。采用皮損面積和嚴重程度指數(shù)（PASI）對病變皮膚評分；ELISA法定量測定治療前后表皮組織中AREG、KGF和VEGF蛋白量；測定表皮微血管密度（MVD），流式細胞儀檢測靜脈血清體外培養(yǎng)人永生角質(zhì)形成細胞株（HaCaT）細胞增殖和細胞周期，并觀察臨床療效。結(jié)果治療4周后，銀屑平丸組AREG、KGF、VEGF和PASI均顯著降低，HaCaT細胞抑制率提高、S期細胞數(shù)降低，有效率為83.54％，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論銀屑平丸通過降低表皮組織AREG、VEGF含量，抑制KGF誘導(dǎo)的HaCaT細胞增殖來減少表皮細胞角化和皮下組織血管新生，降低微血管的異常增生而達到治療銀屑病急性期的目的。

銀屑平丸急性期銀屑病雙調(diào)蛋白角質(zhì)形成細胞生長因子血管內(nèi)皮生長因子人永生角質(zhì)形成細胞株

銀屑病中醫(yī)學(xué)謂之“白疕”［1］。銀屑病具有泛發(fā)性、易復(fù)發(fā)性和頑固性特點，牛皮癬發(fā)病與鏈球菌感染、患者的遺傳和免疫異常等有關(guān)，臨床有不同程度的瘙癢、皮膚紅斑或銀白色鱗屑脫屑現(xiàn)象［2］。研究表明，表皮組織雙調(diào)蛋白（AREG）、角質(zhì)形成細胞生長因子（KGF）及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）蛋白過度表達可能與急性期銀屑病病理改變密切相關(guān)［3］。VEGF蛋白可刺激真皮乳頭微血管的異常增生，這會加重急性期銀屑病發(fā)生發(fā)展，導(dǎo)致嚴重皮損。KGF作用的靶細胞為上皮細胞，能促進上皮細胞的增殖和生長，可誘導(dǎo)HaCaT細胞過度增殖加重細胞角化不全［4］。中藥制劑銀屑平丸臨床用于治療銀屑病急性期。本臨床研究重點在于觀察AREG、KGF和VEGF蛋白表達、HaCaT細胞增殖、細胞周期與銀屑病急性期的相關(guān)性，探索銀屑平丸治療銀屑病急性期的機制，為臨床治療提供方案?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 病例選擇1）診斷標(biāo)準：參照《皮膚性病學(xué)》［5］中關(guān)于銀屑病急性期的診斷標(biāo)準制定。2）納入標(biāo)準：西醫(yī)診斷符合《皮膚性病學(xué)》急性期銀屑病診斷標(biāo)準；中醫(yī)診斷符合符合《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準》中血熱證的中醫(yī)辨證分型標(biāo)準［6］；本次治療前1個月內(nèi)未用皮質(zhì)類固醇激素、銀屑平丸或免疫抑制劑等藥物；年齡18～62歲；本人或患者家屬對治療方法知情同意，且本治療方案報請本院倫理委員會批準并接受監(jiān)督。3）排除標(biāo)準：本次治療前1個月內(nèi)應(yīng)用銀屑平丸或免疫抑制劑等藥物或6個月應(yīng)用皮質(zhì)類固醇激素藥物；有嚴重的電解質(zhì)紊亂及肝腎功能損害；哺乳期或妊娠期婦女；合并嚴重精神系統(tǒng)疾及臨床資料不全者。

1.2 臨床資料選擇十堰市太和醫(yī)院皮膚科2015年5月至2016年7月期間收治的住院急性期銀屑病患者316例。按照隨機數(shù)字表法分為對照組和銀屑平丸組，每組158例。對照組男性76例，女性82例；平均年齡（36.70±5.30）歲；平均病程（42.50±7.80）d。銀屑平丸組男性74例，女性84例；平均年齡（34.20±5.90）歲；平均病程（40.30±6.20）d。兩組病例在性別、平均年齡、平均病程等方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.3 治療方法對照組口服阿維A膠囊（重慶華邦制藥有限公司，批號B1420007670），每日25 mg/次，治療2周后效果不滿意及無明顯毒性反應(yīng)，劑量可逐漸增至每日50～75 mg/L次；皮損區(qū)局部涂抹鹵米松軟膏（香港澳美制藥廠，批號A201501011）；窄譜中波紫外線局部或全身照射治療，照射劑量參數(shù)為0.3～0.5 J/cm2，若無紅斑刺激等反應(yīng)，每次可增加0.1 J/cm2劑量，但最大不超過1.6 J/cm2。隔日1次，視病情恢復(fù)情況照射治療7～10次。銀屑平丸組患者在對照組的治療基礎(chǔ)上加服銀屑平丸（山西華元醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司，規(guī)格0.24 g/丸，批號A1400012047），每次2～4丸，每日3次，以上治療4周。

1.4 觀察項目在治療前后分別用ELISA法定量檢測患者表皮組織中的AREG、KGF、VEGF、MVD；流式細胞儀檢測靜脈血清體外培養(yǎng)HaCaT細胞周期G0/ G1、G2/M、S和HaCaT細胞抑制率。

1.5 PASI評分標(biāo)準及療效標(biāo)準1）PASI評分方法：皮損面積評價時先將全身分為頭部、上肢、軀干、下肢4個部位，PASI評分時對以上部位皮損面積和嚴重程度指數(shù)分別評定。PASI總分為4個部位相加。皮損面積評分為7分制（0～6）：0分為0％；1分為＜1 0％；2分為10％～29％；3分為30％～49％；4分為50％～69％；5分為70％～89％；6分為90％～100％。嚴重程度指數(shù)是對身體各部位脫屑、紅斑及浸潤評分（5分制，0～4）：0分為無癥狀；1分為輕度；2分為中度；3分為重度；4分為極其嚴重。2）療效評定分為治愈、顯效、好轉(zhuǎn)和無效。治愈為皮疹95％以上或完全消退；顯效為皮疹消退達60％～95％；好轉(zhuǎn)為皮疹消退在30％以上但不到60％；無效為不足30％或未消退。有效率=（治愈例數(shù)+有效例數(shù)）/總例數(shù)×100％。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，組間的均數(shù)檢驗采用多因素方差分析，率的比較用χ2檢驗，相應(yīng)的多因素分析分別采用雙向方差Cmh χ2檢驗，組間兩兩比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床療效比較見表1。銀屑平丸有效率明顯高于治療組（P＜0.05）。

表1 兩組臨床療效比較（n）

2.2 兩組患者治療前后AREG、KGF和VEGF含量的比較見表2。治療后，對照組AREG明顯降低（P＜0.05），但KGF和VEGF與同組治療前比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；銀屑平丸組治療后AREG、KGF和VEGF均較治療前明顯降低（P＜0.05）；銀屑平丸組治療后與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 兩組治療前后AREG、KGF和VEGF含量比較（±s）

表2 兩組治療前后AREG、KGF和VEGF含量比較（±s）

與同組治療前比較，*P＜0.05；與對照組治療后比較，△P＜0.05。下同。

組別時間VEGF（pg/mL）KGF（pg/mL）AREG（ng/mL）銀屑平丸組治療前21.58±2.81（n=158）治療后10.25±2.20*△對照組治療前22.17±3.42 59.62±7.2332.47±4.24 18.34±2.018*△15.56±2.07*△60.29±5.1231.73±4.51（n=158）治療后20.03±2.27 57.18±5.7724.02±2.75*

2.3 兩組患者治療前后PASI和MVD比較見表3。兩組治療后PASI和MVD均明顯降低（P＜0.05）；銀屑平丸組治療后PASI與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但MVD與對照組相當(dāng)（P＞0.05）。

表3 兩組治療前后PASI和MVD比較（±s）

表3 兩組治療前后PASI和MVD比較（±s）

組別時間MVD（％）PASI（分）銀屑平丸組治療前28.36±4.2311.56±1.39（n=158）治療后16.96±2.11*3.02±0.21*△對照組治療前29.14±2.7212.07±2.05（n=158）治療后18.71±2.45*4.72±0.53*

2.4 兩組患者靜脈血培養(yǎng)HaCaT細胞周期及HaCaT抑制率比較見表4。銀屑平丸組HaCaT細胞S周期低于對照組，HaCaT抑制率高于對照組（P＜0.05）。

表4 兩組靜脈血培養(yǎng)HaCaT細胞周期及HaCaT抑制率比較（±s）

表4 兩組靜脈血培養(yǎng)HaCaT細胞周期及HaCaT抑制率比較（±s）

與對照組比較，△P＜0.05。下同。

3 討論

銀屑病的發(fā)病多由寒濕、濕熱、風(fēng)熱、風(fēng)寒、燥毒之邪侵入肌膚引起，這類患者多先天稟賦不足或情志內(nèi)傷而致氣血運行不暢、內(nèi)外之邪相合而致體內(nèi)血氣瘀積，特別當(dāng)瘀血內(nèi)停后瘀久而化熱，瘀熱互結(jié)，搏于氣血而致?。?］。由于銀屑病的“血瘀、血熱和血燥”貫穿于疾病發(fā)展的全過程，故中醫(yī)治療多強調(diào)涼血養(yǎng)陰為主，兼以活血解毒為輔，銀屑平丸就是基于這一病機和治療原則擬方，具有清熱解毒、疏通氣血、軟堅消積、涼血養(yǎng)陰、除燥濕及殺蟲之效［8］。

VEGF可促進銀屑病急性期病變皮損處組織血管新生，這可能會激活真皮乳頭微血管的內(nèi)皮細胞，促進表皮細胞的生長而加重銀屑病急性期的病理改變［9］。而AREG也是一種與VEGF相似的表皮促生長因子，AREG可刺激人腫瘤細胞及成纖維細胞增殖，在銀屑病急性期表皮組織中高表達［10］。另有研究表明，KGF主要來源于T淋巴細胞和成纖維細胞，其在皮膚角化不全和過度增殖等形態(tài)學(xué)改變的過程中發(fā)揮主導(dǎo)作用。KGF主要由表皮組織上的T淋巴細胞活化后刺激成纖維細胞分泌而來，KGF分泌過多會造成表皮細胞角質(zhì)過度而加重銀屑病急性期的病理改變［11］。本臨床研究觀察了銀屑平丸對銀屑病急性期皮膚組織中AREG、KGF、VEGF和HaCaT細周期及抑制率的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，銀屑平丸組患者在治療4周后，AREG、KGF、VEGF和PASI均顯著降低，HaCaT細胞抑制率提高、S期細胞數(shù)降低，有效率達83.54％。這一結(jié)果提示銀屑平丸主要是通過抑制AREG、KGF和VEGF分泌、降低Ha-CaT細胞數(shù)達到治療銀屑病的目的。這與本方中白花蛇舌草、生地黃、大青葉、半枝蓮專清熱解毒、涼血化瘀養(yǎng)陰有關(guān)。銀屑平丸針對銀屑病急性期的熱瘀病機，方中赤芍、牡丹皮、丹參、紫草等具有清熱涼血、活血化斑的作用；白鮮皮以皮達皮、清熱祛風(fēng)止癢；旱蓮草和女貞子可養(yǎng)陰生津，還可助生地黃加強滋陰之功效，甘草清熱解毒兼調(diào)和諸藥，又可顧護脾胃；本方清熱之中兼以養(yǎng)陰、涼血與活血散瘀配伍并用，共奏清熱解毒、涼血散瘀、養(yǎng)陰生津之功［12］。在本臨床研究中，筆者還發(fā)現(xiàn)銀屑平丸可加強與阿維A膠囊抑制HaCaT細胞增殖的作用，阿維A膠囊為抗皮膚角化藥，可直接抑制表皮I型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶和T淋巴細胞增殖、促進角質(zhì)形成細胞分化，同時還會抑制角質(zhì)形成細胞增殖、調(diào)節(jié)表皮細胞分化和增殖作用［13-14］。銀屑平丸通過提高HaCaT細胞抑制率、降低S期細胞數(shù)來達到降低角質(zhì)形成細胞分化和增殖，減輕急性期銀屑病臨床癥狀，PASI評分得以降低。

總之，本研究表明，銀屑平通過抑制VEGF分泌，抑制表皮病變組織皮下血管新生、重建、降低真皮乳頭微血管的異常增生，提高HaCaT細胞抑制率、降低S期細胞數(shù)，與阿維A共同抑制T細胞增殖介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)［15］，抑制與VEGF同源的細胞因子AREG的分泌來減少成纖維細胞和腫瘤細胞的增殖，使KGF介導(dǎo)的表皮細胞過度角化現(xiàn)象減輕，從而達到治療尋常型銀屑病的目的。

［1］劉濤，朱建平.“白疕”及其相關(guān)病名考辨［J］．中國科技術(shù)語，2016，12（1）：54-57.

［2］鹿見香，白彥萍.白彥萍教授應(yīng)用清熱涼血方治療銀屑病經(jīng)驗總結(jié)［J］.中國中醫(yī)急癥，2014，23（1）：68-78.

［3］劉俊伶，馮燕艷，普雄明，等.急性期銀屑病與代謝綜合征的流行病學(xué)［J］.實用皮膚病學(xué)雜志，2014，7（6）：444-445.

［4］鹿見香，李锘，樸珉貞，等.祛銀顆粒對角質(zhì)形成細胞生長因子誘導(dǎo)的HaCaT細胞增殖及分泌TNF-α的影響［J］.中國中醫(yī)急癥，2014，23（6）：1025-1028.

［5］張學(xué)軍.皮膚性病學(xué)［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：141．

［6］國家中醫(yī)藥管理局.中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準［M］.南京：南京大學(xué)出版社，1994：154-155.

［7］席建元，張亞南，李小鵬，等.涼血養(yǎng)陰法對尋常型銀屑病患者外周血VEGF和OPN表達的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志，2014，13（4）：216-215.

［8］彭丹，席建元，祁林，等.銀屑平丸聯(lián)合阿維A膠囊治療尋常型銀屑病的療效觀察［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志，2015，14（1）：41-42.

［9］龍劍文，皮先明，涂亞庭，等.進行期尋常性銀屑病皮損β-連環(huán)蛋白、VEGF和VEGFR-2的mRNA表達［J］．中國皮膚性病學(xué)雜志，2015，1（1）：29-31.

［10］黃萍，郭俐宏，陳少秀，等.丹槐銀屑濃縮丸對銀屑病模型兔血管內(nèi)皮生長因子及其受體表達的影響［J］.國際中醫(yī)中藥雜志，2016，38（4）：345-349.

［11］趙一，胡晉紅.銀屑病皮膚過度增殖相關(guān)細胞因子研究進展［J］.免疫學(xué)雜志，2013，29（1）：74-77.

［12］席建元，陶璇，李小鵬，等.銀屑平丸治療尋常型銀屑病的療效及對血清IL-8的影響［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，32（1）：51-53.

［13］欒超，楊永紅，王焱，等.急性期銀屑病患者皮膚中原位記憶T淋巴細胞的檢測［J］.中華皮膚科雜志，2014，47（11）：800-802.

［14］劉旭星.阿維A聯(lián)合窄譜中波紫外線治療65例中重度尋常型急性期銀屑病療效觀察［J］.中國藥物與臨床，2012，12（6）：786-787.

［15］彭丹，席建元，祁林，等.銀屑平丸聯(lián)合阿維A膠囊治療尋常型銀屑病的療效觀察［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志，2015，14（1）：41-42.

Effect of Yinxieping Pill on Acute Epidermal Tissue of Patients with Psoriasis VEGF，KGF and AREG

Zhang Xia，Kang Xiaojing，Miu Zequn，et al.Shiyan Taihe Hospital of Hubei province（Affiliated Hospital of Hubei Medical College）；Shiyan 442000，Hubei Province，China

Objective：To observe the drugamphiregulin Yinxieping Pill on epidermal tissue of patients with acute psoriasis（AREG），keratinocyte growth factor（KGF）and vascular endothelial growth factor（VEGF）effect. Methods：316 cases of patients with acute psoriasis were divided into control group and Yinxieping pill group. The control group oral acitretin，A NB-UVB（local or systemic irradiation）and topical ointment Halometasone therapy，Ping pill group and psoriasis in Yinxieping pill.The psoriasis area and severity index（PASI）score of skin lesion；ELISA quantitative determination of AREG，KGF and VEGF protein before and after treatment in the epidermis of skin；Determination of microvessel density（MVD），flow cytometry detection serum in vitro cultured human immortalized keratinocytes strain（HaCaT）cell proliferation and cell cycle，and to observe the clinical curative effect.Results：After treatment，Yinxieping pill group AREG，KGF，VEGF and PASI were significantly decreased，HaCaT cell inhibition rate increased，the number of S cells decreased and the effective rate was 83.54％，compared with the control group and the same group before treatment（P＜0.05），the difference was statistically significant.Conclusion：Yinxieping pill by decreasing AREG and VEGF content of epidermal tissue，inhibit KGF induced proliferation of HaCaT cells to reduce angiogenesis of keratinized cells and subcutaneous tissue，hyperplasia of epidermal lesions，reduce microvascular and to treat psoriasis like pathological changes in acute stage

Yinxieping pill；Acute psoriasis；Amphiregulin；Keratinocyte growth factor；Vascular endothelial growth factor；Human immortalized keratinocyte cell line

R758.63

A

1004-745X（2017）06-1094-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.06.052

2016-09-09）

湖北省十堰市太和醫(yī)院科研項目（2016JJXM041）

△通信作者（電子郵箱：524078242@qq.com）