養(yǎng)心湯對慢性心力衰竭模型大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD的影響*

皇甫海全 孫靜

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150000）

·研究報(bào)告·

養(yǎng)心湯對慢性心力衰竭模型大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD的影響*

皇甫海全 孫靜△

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150000）

目的通過建立慢性心衰大鼠模型，觀察養(yǎng)心湯對慢性心力衰竭模型大鼠血漿腎素活性（PRA）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）的影響。方法SD雄性大鼠70只，隨機(jī)選取10只大鼠作為空白對照組，其余60只大鼠腹腔注射阿霉素每周4 mg/kg，連續(xù)6周，6周后全部大鼠予心臟超聲測定心功能，以LVEF＜60％為心力衰竭模型復(fù)制成功；將模型復(fù)制成功大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型對照組、養(yǎng)心湯組、卡托普利組?？瞻讓φ战M、模型對照組予等體積的蒸餾水灌胃；養(yǎng)心湯組予養(yǎng)心湯浸膏；卡托普利組予卡托普利，連續(xù)4周，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠腹主動(dòng)脈采血測定血清PRA、AngⅡ、ALD水平及心肌HE染色觀察心肌組織病理形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果與空白對照組比較，模型對照組大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平增加（P＜0.01）；與模型對照組比較，養(yǎng)心湯組、卡托普利組大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平降低（P＜0.01）；與卡托普利組比較，養(yǎng)心湯組大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論養(yǎng)心湯能降低慢性心力衰竭模型大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平，抑制RAAS活性，保護(hù)心肌組織，延緩心室重構(gòu)，其療效與卡托普利相當(dāng)。

養(yǎng)心湯PRAAngⅡALD慢性心力衰竭阿霉素

慢性心力衰竭（CHF）是由于心臟結(jié)構(gòu)改變，心肌收縮和舒張功能下降，心排血量不足，不能滿足機(jī)體代謝需求的臨床綜合征，臨床表現(xiàn)為不同程度的呼吸困難和日?；顒?dòng)受限，是多種心血管疾病的終末階段［1］。美國心臟病協(xié)會(huì)（AHA）［2］調(diào)查發(fā)現(xiàn)美國心衰患病率約為1.5％～2.0％，而65歲以上心衰的發(fā)病率約為6％～10％。在我國成人心力衰竭患病率為0.9％，隨年齡的增加心力衰竭的發(fā)病率呈上升趨勢。CHF的藥物治療以利尿、ACEI或ARB（抑制心室重構(gòu)）和β受體阻滯劑（降低心肌耗氧）為主。而非藥物療法因其價(jià)格昂貴，難以被大眾接受，臨床應(yīng)用少。中醫(yī)藥以辨證論治、整體觀念為指導(dǎo)，能明顯改善CHF患者癥狀，提高生活質(zhì)量，以阻止或延緩CHF的進(jìn)展，再加上毒副作用小，逐漸被廣大患者所接受，在治療CHF方面具有一定的優(yōu)勢。筆者所在的研究團(tuán)隊(duì)前期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明養(yǎng)心湯能明顯提高心力衰竭大鼠心臟射血分?jǐn)?shù)，降低血清TNF-α、ET-1水平，減輕心肌細(xì)胞損傷，改善心衰大鼠心功能，但其具體機(jī)制尚不明確。本研究團(tuán)隊(duì)以CHF大鼠為模型，觀察養(yǎng)心湯對慢性心力衰竭大鼠血漿腎素活性（PRA）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物采用普通級8周齡，雄性SD大鼠70只，體質(zhì)量180～220 g，大鼠購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號：2014001XYXK。

1.2 藥物與試劑養(yǎng)心湯浸膏由本院制劑室負(fù)責(zé)制備，藥物為炙黃芪、人參、茯神、白茯苓、五味子、法半夏、川芎、遠(yuǎn)志、炒酸棗仁、柏子仁、肉桂、當(dāng)歸、甘草組成，每克養(yǎng)心湯浸膏含生藥5.39 g；卡托普利（國藥準(zhǔn)字H32022823），規(guī)格25 mg/片，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)；阿霉素（國藥準(zhǔn)字H19990280），規(guī)格10 mg/支，浙江海正藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；PRA試劑盒、AngⅡ試劑盒、ALD試劑盒，美國R&D公司生產(chǎn)。

1.3 儀器心臟多普勒彩色超聲機(jī)（SONOS5500），Agilnet公司；超低溫冰箱（MDF-U50V），日本三洋公司；德國SLEE石蠟切片機(jī)CUT4062；BS-51顯微鏡，日本奧林巴斯公司；匯松MB-530酶標(biāo)儀，深圳市匯松科技發(fā)展有限公司。

1.4 造模與分組采用腹腔注射阿霉素的方法復(fù)制CHF模型。將阿霉素配制成2 mg/mL溶液，根據(jù)大鼠體質(zhì)量每周4 mg/kg腹腔注射，連續(xù)6周。大鼠稱量用10％水合氯醛腹腔注射麻醉，仰臥操作臺固定，胸前區(qū)剃毛，測定大鼠心臟LVEF值，以LVEF＜60％為心力衰竭模型復(fù)制成功［3］。造模成功的大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，即養(yǎng)心湯組、卡托普利組、模型對照組，各9只。模型對照組和空白對照組大鼠予常規(guī)等容積蒸餾水灌胃，養(yǎng)心湯組、卡托普利組大鼠按人鼠劑量換算公式給藥，養(yǎng)心湯組灌胃養(yǎng)心湯浸膏每日8.1 g/kg，卡托普利組灌胃卡托普利片每日2.25 mg/kg，連續(xù)4周。

1.5 標(biāo)本制作大鼠給藥4周后，禁食不禁水12 h后，水合氯醛麻醉，將大鼠仰臥于操作臺上，固定四肢及頭部，剪胸毛備皮，充分暴露腹主動(dòng)脈，取血4 mL，離心，分離血清，-80℃冰箱凍存。

1.6 觀測指標(biāo)1）左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，麻醉大鼠，心臟超聲機(jī)續(xù)測量3個(gè)不同心動(dòng)周期收縮末期及舒張末期左心室內(nèi)徑，取其平均值，并計(jì)算LVEF。2）ELISA測定大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平。嚴(yán)格按照生物公司提供的酶聯(lián)免疫試劑盒說明書進(jìn)行。3）心肌組織HE染色。參照常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色步驟。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較應(yīng)用單因素方差分析，組間兩兩比較，方差齊時(shí)用LSD法，方差不齊用Dunntt′s T3。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平比較見表1。與空白對照組比較，模型對照組大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平增加（P＜0.01）。與模型對照組比較，養(yǎng)心湯組、卡托普利組大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與卡托普利組比較，養(yǎng)心湯組大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平比較（±s）

表1 各組大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平比較（±s）

與模型對照組比較，*P＜0.01；與空白對照組比較，△P＜0.01。

模型對照組91325.21±16.92△養(yǎng)心湯組9632.48±13.52*632.12±8.86△162.64±5.71△327.46±7.29*125.45±6.23*卡托普利組9621.50±8.21*318.68±8.57*116.35±5.47*

2.2 心力衰竭大鼠心肌組織HE染色結(jié)果見圖1?？瞻讓φ战M心肌細(xì)胞排列整齊，橫縱紋清晰，心肌纖維排列規(guī)整無斷裂缺損，細(xì)胞核大小、形態(tài)正常，細(xì)胞胞質(zhì)均勻，心肌細(xì)胞間質(zhì)未見炎細(xì)胞浸潤及纖維細(xì)胞增生。模型組心肌細(xì)胞呈波浪狀，間隙增寬、腫脹，看不見橫縱紋，心肌纖維斷裂缺損，細(xì)胞核固縮，細(xì)胞胞質(zhì)不均勻，心肌細(xì)胞間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤。養(yǎng)心湯組心肌細(xì)胞排列較整齊，可見橫縱紋，心肌纖維輕度顆粒樣變性，可見斷裂缺損，可見心肌細(xì)胞核呈圓形，細(xì)胞胞質(zhì)欠均勻?？ㄍ衅绽M心肌細(xì)胞排列整齊，可見橫縱紋，心肌纖維輕度顆粒樣變性，可見斷裂缺損，可見心肌細(xì)胞核呈圓形，細(xì)胞胞質(zhì)欠均勻。

圖1 各組大鼠心肌組織形態(tài)（HE染色，100倍）

3 討論

3.1 養(yǎng)心湯組方分析及現(xiàn)代藥理研究CHF的病因病機(jī)多為心氣不足、瘀血阻脈、心神失養(yǎng)，臨床表現(xiàn)為氣短、心悸、水腫、喘促不能平臥等。養(yǎng)心湯出自《證治準(zhǔn)繩·雜病證治類方》，該書曰“主治心虛血少，驚惕不寧”。其組成包括黃芪、人參、茯神、白茯苓、五味子、法半夏、川芎、遠(yuǎn)志、炒酸棗仁、柏子仁、肉桂、當(dāng)歸、甘草13味中藥［4］。方中黃芪、人參為君，補(bǔ)脾益氣；臣以當(dāng)歸補(bǔ)血養(yǎng)心，與黃芪、人參配伍以培氣血不足之本；茯神、茯苓養(yǎng)心安神，以治心神不寧之標(biāo)；佐以柏子仁、酸棗仁、遠(yuǎn)志、五味子補(bǔ)心安神定悸；法半夏燥濕化痰和胃，配黃芪、人參補(bǔ)脾和中，以資氣血生化之源；肉桂引火歸元，并可鼓舞氣血生長增加溫養(yǎng)之功；川芎調(diào)肝和血，且使諸藥補(bǔ)而不滯；甘草調(diào)和諸藥，與參、芪相伍，以增強(qiáng)益氣之功，共為佐使?？v觀全方，氣血并補(bǔ)，標(biāo)本兼治，重在養(yǎng)心安神?，F(xiàn)代藥理研究顯示黃芪有效成分黃芪甲苷可抑制心肌肥厚大鼠的腎素-血管緊張素激活，延緩心室重構(gòu)同時(shí)可增強(qiáng)心臟功能［5-6］。人參可提高心肌收縮力，降低心肌的耗氧量，改善心功能［7-8］。酸棗仁有增強(qiáng)免疫力、抗心律失常、心肌缺血的作用，與抑制迷走神經(jīng)興奮以及β1受體阻斷作用有關(guān)［9］。有研究表明，五味子有抑制氧自由基的活性、保護(hù)缺血的心肌、降低血脂、抗血小板聚集等作用［10］。肉桂提取物桂皮醛具有擴(kuò)張血管、促進(jìn)血液循環(huán)、增加動(dòng)脈血流、降低血管阻力等作用，同時(shí)具有預(yù)防血栓形成的作用［11］。本研究結(jié)果顯示，養(yǎng)心湯能夠保護(hù)心肌細(xì)胞，減少心肌細(xì)胞的損傷，因此我們認(rèn)為其機(jī)制可能是由于養(yǎng)心湯發(fā)揮益氣養(yǎng)血、寧心安神的功效，補(bǔ)益心氣，心氣充足，血脈通暢，心神得以濡養(yǎng)，從而達(dá)到治療心衰的療效。

3.2 養(yǎng)心湯對RAAS系統(tǒng)的影響RAAS系統(tǒng)既存在于循環(huán)系統(tǒng)中，也存在于心臟、腦、神經(jīng)、血管壁、腎臟和腎上腺等組織中［12］，共同參與對靶器官的調(diào)節(jié)。RAAS對心血管系統(tǒng)的正常運(yùn)作、心血管功能的平衡、電解質(zhì)和體液平衡的維持、血壓的調(diào)節(jié)都具有重要作用。CHF的發(fā)生機(jī)制并未完全明確，現(xiàn)有研究認(rèn)為除血流動(dòng)力學(xué)異常（如心臟前負(fù)荷和后負(fù)荷的增加、心肌收縮力減弱等）外，神經(jīng)內(nèi)分泌-體液因子的激活亦是慢性心衰的一獨(dú)立發(fā)病機(jī)制，最終導(dǎo)致心室重塑加重心衰。RAAS的激活貫穿整個(gè)CHF的發(fā)生發(fā)展的始終，對CHF的形成有至關(guān)重要的作用［13］。交感神經(jīng)興奮后，腎素活性隨之增加，從而激活RAAS，使AngⅡ形成增多，ALD分泌增加，導(dǎo)致血管收縮，水鈉潴留。隨著CHF的進(jìn)展，AngⅡ明顯升高。在器官組織方面，AngⅡ引起血管平滑肌收縮，阻力增加，心室前后負(fù)荷增加導(dǎo)致心肌肥厚及心室重塑［14］。ALD能促使心肌肥厚和纖維化，導(dǎo)致心肌順應(yīng)性的下降，心室舒張功能不全，長期應(yīng)用可導(dǎo)致心律失常，血容量增加，水鈉失衡，CHF加重［15］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示養(yǎng)心湯能降低CHF模型大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平以抑制RAAS的活性，從而延緩心室重構(gòu)，減緩心衰進(jìn)程。本研究結(jié)果顯示養(yǎng)心湯能夠降低CHF模型大鼠血清PRA、AngⅡ、ALD水平，抑制RAAS的活性，延緩心室重構(gòu)，減緩心衰進(jìn)程，其機(jī)制可能為：（1）養(yǎng)心湯可通過抑制腎臟近小球細(xì)胞產(chǎn)生、儲(chǔ)存、分泌腎素來降低腎素活性，使其不能與血管緊張素原相作用，從而切斷RAAS激活的最初源頭，以延緩心衰。（2）養(yǎng)心湯使肝臟中的血管緊張素原形成減少，腎素不能與血管緊張素原相作用形成血管緊張素Ⅰ，從而阻斷AngⅡ的生成，RAAS不能激活，從而延緩心衰。（3）養(yǎng)心湯具有抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的作用，使AngⅠ不能轉(zhuǎn)換為AngⅡ，又或是養(yǎng)心湯可拮抗AngⅡ的受體，阻斷AngⅡ發(fā)揮縮血管的作用，延緩心室重構(gòu)。（4）養(yǎng)心湯可抑制醛固酮的分泌，維持血容量，抑制腎素活性，從而抑制RAAS的激活，延緩心衰。

綜上所述，養(yǎng)心湯能保護(hù)心衰大鼠心肌細(xì)胞損傷，降低血清PRA、AngⅡ、ALD水平，抑制RAAS的活性，延緩心室重構(gòu)，減緩心衰進(jìn)程。由于實(shí)驗(yàn)條件所限，本研究未對CHF大鼠模型辨證分型，只是初步探討其對心衰的作用，本團(tuán)隊(duì)將在下一步具體對CHF辨證分型研究，以符合中醫(yī)辨證治療的特色，病從基因、蛋白水平進(jìn)一步探討?zhàn)B心湯治療CHF的作用機(jī)制。

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The Effect of Yangxin Decoction on PRA，Ang II and ALD of Rats of Chronic Heart Failure Model

HUANGPU Haiquan，SUN Jing.Heilongjiang University of Chinese Medicine，Heilongjiang，Harbin 150000，China.

Objective：To observe the effect of Yangxin Decoction on PRA，AngⅡand ALD by establishing rat model of chronic heart failure.Methods：10 rats were selected as the blank control group among 70 ones，and the remaining 60 ones

intraperitoneal injection of adriamycin 4 mg/kg per week，for 6 weeks.6 weeks later，all rats received cardiac ultrasound measurement of cardiac function，with LVEF＜60％for heart failure model established successfully.The successful models were randomly divided into the model control group，Yangxin Decoction group，and Captopril group.The blank control group and the model control group were given equal volume of distilled water by gavage；Yangxin Decoction group was given Yangxin Decoction extract；Captopril group was given Captopril，for 4 weeks.After the experiment，blood samples were obtained from abdominal aorta to detect PRA，AngⅡand ALD level and morphological changes of myocardial tissue were observed by myocardial HE staining.Results：Yangxin Decoction had an effect on serum PRA，AngⅡand ALD level of rats with chronic heart failure.Compared with the blank control group，the levels of serum PRA，AngⅡand ALD increased in model control group（P＜0.01）；compared with the model control group，the levels of serum PRA，AngⅡand ALD in Yangxin Decoction group and Captopril group were decreased（P＜0.01）；compared with Captopril group，the levels of serum PRA，AngⅡand ALD increased in Yangxin Decoction group，but the difference was not statistically significant（P＞0.05）.Conclusion：Yangxin Decoction can reduce serum PRA，AngⅡand ALD level of rats with chronic heart failure，inhibit the activity of RAAS，protect myocardial tissue，and delay ventricular remodeling.The curative effect is quite the same as Captopril.

Yangxin Decoction；PRA；Ang；ALD；Chronic heart failure；Adriamycin

R285.5

A

1004-745X（2017）06-0963-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.06.007

2017-03-26）

黑龍江省博士后基金項(xiàng)目LBH-Z08007；黑龍江省普通高等學(xué)校青年學(xué)術(shù)骨干支持計(jì)劃

△通信作者（電子郵箱：hfhq890902@126.com）