胡椒堿含量檢測(cè)方法的改進(jìn)

林宜國(guó)

摘要： 胡椒堿屬于桂皮酞胺類生物堿，是胡椒果實(shí)的主要提取物，在食品生產(chǎn)、醫(yī)療臨床應(yīng)用、藥物理念、殺蟲(chóng)防菌等領(lǐng)域具有極其重要的地位。本文所論的胡椒堿含量檢測(cè)方法是在現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，進(jìn)一步簡(jiǎn)化胡椒堿的前處理方法，使得分析過(guò)程更加準(zhǔn)確，提高檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確率，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

Abstract： Piperine belongs to cinnamon phthalamide alkaloids， and is the main extract of pepper fruit. It plays an important role in the fields of food production， clinical application of medicine， drug concept， insecticide and insect control， and so on. The method of detecting the content of piperine in this paper is to simplify the pretreatment method of piperine on the basis of the current national standard， which makes the analysis process more accurate， improves the accuracy of the test result and shortens the experiment time.

關(guān)鍵詞： 胡椒堿；前處理；檢測(cè)

Key words： piperine；pretreatment；detection

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-4311（2017）24-0174-02

0 引言

胡椒堿是胡椒中主要的活性化學(xué)成分，屬于桂皮酞胺類生物堿，早在19世紀(jì)末，作為胡椒的主要成分胡椒堿就能被提純和合成，現(xiàn)今作為重要的一種化工中間體，更是被發(fā)現(xiàn)和研究出具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、促進(jìn)藥物代謝等作用。

胡椒堿含量是根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB/T 17528-2009 胡椒堿含量的測(cè)定 高效液相色譜法》實(shí)行檢驗(yàn)檢測(cè)，其檢測(cè)要點(diǎn)是“由于胡椒堿溶液不穩(wěn)定，見(jiàn)光易分解，避光操作很有必要。操作中用鋁箔或黑紙將燒瓶和容量瓶包裹起來(lái)，并盡可能快地測(cè)定”，但是在檢驗(yàn)檢測(cè)實(shí)踐中，胡椒等固體樣品“蒸餾回流三小時(shí)”這項(xiàng)針對(duì)提取胡椒堿的操作即使燒瓶、冷凝管按要求包裹避光，都不能很好地隔絕光源照射和蒸餾過(guò)程的操作誤差，從而極大地影響儀器檢測(cè)出峰值，由此得出的檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性、準(zhǔn)確性都存在很大的偏差。本方法通過(guò)對(duì)胡椒堿檢測(cè)前處理方法進(jìn)行改進(jìn)，在操作過(guò)程中利用恒溫超聲波系統(tǒng)批量處理樣品，大大提高了檢驗(yàn)檢測(cè)數(shù)據(jù)的真實(shí)性、穩(wěn)定性，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，提高工作效率。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 主要器材

高效液相色譜儀：MltiMate 3000 DGLC雙三元系列，包含有帶在線脫氣單元的雙三元梯度泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，帶有一個(gè)六通閥的柱溫箱，二極管陣列檢測(cè)器。

超純水機(jī)

臺(tái)式離心機(jī)

高速組織攪拌機(jī)

樣品篩：孔徑為500μm

恒溫超聲波系統(tǒng)

萬(wàn)分之一天平

微量移液器

1.2 主要試劑

去離子水；無(wú)水乙醇；甲醇（色譜純）；胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

1.3 操作步驟

1.3.1 胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：用25ml棕色瓶準(zhǔn)確稱取0.2140g胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用無(wú)水乙醇溶解并定容，此溶液濃度為：8.5600mg/ml。再用微量移液器吸取儲(chǔ)備液5.0ml，用無(wú)水乙醇定容50ml，此溶液濃度為：856.0μg/ml。

1.3.2 樣品制備

本方法使用整粒胡椒，產(chǎn)地茂名市。

①挑取顆粒飽滿胡椒粒約100g，用高速組織攪拌機(jī)將樣品粉碎，直至全部通過(guò)樣品篩，儲(chǔ)于棕色瓶中備用。

②準(zhǔn)確稱取制好的樣品約0.7g，置于100ml棕色瓶中，加入無(wú)水乙醇25ml，加塞搖勻后置于恒溫超聲波系統(tǒng)超聲處理45min，超聲條件：20℃，功率250W，頻率20kHz。超聲完畢取出流水冷卻，定容，用0.22μl有機(jī)過(guò)濾膜過(guò)濾上清液，取其中2.0ml于棕色樣品瓶，上機(jī)待測(cè)定。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

用微量移液器吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液以無(wú)水乙醇逐級(jí)稀釋濃度分別為：1.712μg/ml，4.8827μg/ml，17.12μg/ml，54.784μg/ml，171.2μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；再稀釋濃度為200.0μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)加標(biāo)溶液。

1.3.4 色譜條件

色譜柱：Thermo Hypersil GOLD，4.6x160mm（P/N：25005-154630）

流動(dòng)相：甲醇+水=72：28

流速：1.0ml/min

色譜柱溫度：30℃

檢測(cè)器波長(zhǎng)：343nm

進(jìn)樣量：10μl

2 數(shù)據(jù)與結(jié)論

2.1 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.1.1 胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（圖1）

依次進(jìn)樣濃度為1.712μg/ml，4.8827μg/ml，17.12μg/ml，54.784μg/ml，171.2μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值（%）為：1.2953；判定系數(shù)：0.99994。

2.1.2 加標(biāo)樣品色譜圖

本方法處理辣椒粉樣品檢測(cè)色譜圖，加標(biāo)量為：200.0μg/ml 1ml（圖2）。

檢測(cè)得出含量為198.8798μg/ml，本方法加標(biāo)回收率為99.44%。

國(guó)標(biāo)方法處理辣椒粉樣品檢測(cè)色譜圖，加標(biāo)量為：200.0μg/ml 1ml（圖3）。

檢測(cè)得出含量為172.2737μg/ml，國(guó)標(biāo)方法加標(biāo)回收率為86.14%。

2.1.3 樣品檢測(cè)色譜圖

本方法檢測(cè)結(jié)果平均值為27014.2860μg/ml，標(biāo)準(zhǔn)偏差17.0995，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.06%。（圖4）

國(guó)標(biāo)方法檢測(cè)結(jié)果平均值為24760.0502μg/ml，標(biāo)準(zhǔn)偏差1160.8453，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差4.69%。（圖5）

2.2 結(jié)論

總結(jié)對(duì)比兩方法的樣品處理檢測(cè)數(shù)據(jù)分析顯示本方法加標(biāo)回收率、樣品檢測(cè)重現(xiàn)性、樣品檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差等數(shù)據(jù)均優(yōu)于國(guó)標(biāo)方法，說(shuō)明本方法的準(zhǔn)確度較高。本方法操作較國(guó)標(biāo)方法，用恒溫超聲提取代替加熱回流提取，減少胡椒堿溶液見(jiàn)光易分解造成的檢測(cè)誤差，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；并且操作簡(jiǎn)便易行，大大縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 17528-2009，胡椒堿含量的測(cè)定[S].

[2]GB/T 12729.6-1991，香辛料和調(diào)味品 水分含量的測(cè)定（蒸餾法）[S].

[3]GB/T 12729.3-1991，香辛料和調(diào)味品 分析用粉末試樣的制備[S].