雙須葉須魚人工繁殖研究

王萬良 張忭忭 王建銀 周建設(shè) 曾本和 張馳 牟振波

摘要 [目的]探討雙須葉須魚人工繁殖技術(shù)。[方法]試驗(yàn)采用2次胸鰭基部注射法，開展雙須葉須魚人工繁殖及魚苗培育技術(shù)研究。

[結(jié)果]第1針注射劑量為LRH-A2 4 μg/kg、PG 2 mg/kg，間隔48 h注射第2針，劑量為LRH-A2 10 μg/kg、PG 6 mg/kg，催產(chǎn)率可達(dá)86.7%；利用人工干法授精方式，2批次共獲得受精卵149 288粒，平均受精率為80.1%；在水溫12～13 ℃條件下，經(jīng)過微流水孵化，共獲得初孵仔魚120 327尾；在水泥池經(jīng)過30 d培育，獲得平均體長為（1.95±0.24）cm以上魚苗80 138尾，魚苗成活率可達(dá)66.5%。[結(jié)論]研究結(jié)果可為雅魯藏布江中游漁業(yè)資源保護(hù)與利用和開展增殖放流提供參考。

關(guān)鍵詞 雙須葉須魚；人工繁殖；催產(chǎn)率；受精率；孵化率

Study on the Artificial Propagation of Ptychobarbus dipogon

WANG Wan-liang1，ZHANG Bian-bian2， WANG Jian-yin3， MOU Zhen-bo1* et al

（1.Institute of Fishery Sciences，Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences， Lhasa，Tibet 850032；2.East China Sea Fisheries Research Institute， Chinese Academy of Fishery Sciences，Shanghai 200090；3.Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences， Lhasa， Tibet 850032）

Abstract [Objective] To discuss the artificial propagation techniques of Ptychobarbus dipogon. [Method] Using twice pectoral fin base injection method，the artificial propagation and fry rearing technique research of P. dipogon was conducted. [Result] The first injection dose was LRH-A2 4 μg/kg+PG 2 mg/kg. After 48 h， the second needle was injected with LRH-A2 10 μg/kg+PG 6 mg/kg， the ovulation rate reached 86.7%. Using artificial dry method of insemination， 149 288 fertilized eggs were obtained ，the average fertilization rate was 80.1%.Under the conditions of water temperature of 12-13 ℃，120 327 larvae were obtained by microfluidization. after 30 d cultivation in the cement pool， 80 138 fries with the average body length of more than （1.95 ± 0.24） cm were obtained， the fry survival rate was up to 66.5%. [Conclusion] The research results can provide references for the protection and utilization of fisheries resources and their enhancement and releasing in middle reaches of Yalutsangpo River.

Key words Ptychobarbus dipogon；Artificial propagation；Ovulation rate；Fertilization rate；Hatching rate

雙須葉須魚（Ptychobarbus dipogon），俗稱花魚，隸屬鯉形目（Cypriniformes）鯉科（Cyprinidae）裂腹魚亞科（Schizothoracinae）葉須魚屬（Ptychobarbus），是西藏重要的土著經(jīng)濟(jì)魚類之一，主要分布于雅魯藏布水系上中游干流及其支流[1-2]。近幾年，隨著西藏經(jīng)濟(jì)社會(huì)步入飛躍式發(fā)展軌道，旅游人員持續(xù)增長，西藏本土人民的生活習(xí)慣也隨之發(fā)生改變，對魚產(chǎn)品需求不斷加大，人為濫捕現(xiàn)象極為猖獗；加之水利建設(shè)破壞了魚類產(chǎn)卵場，生物入侵引起食物競爭等因素，導(dǎo)致雙須葉須魚資源量開始銳減，捕獲個(gè)體開始小型化。目前，有關(guān)雙須葉須魚的研究主要集中在其個(gè)體生物學(xué)方面。1999年，武云飛等[3]對雙須葉須魚的染色體核型進(jìn)行了分析；2010年，楊漢運(yùn)等[4]對拉薩河和雅魯藏布江中游的雙須葉須魚進(jìn)行了資源調(diào)查，表明其資源量已遭到嚴(yán)重破壞；2015年，楊鑫[5]對雅魯藏布江中游雙須葉須魚的年齡結(jié)構(gòu)和生長特征進(jìn)行了分析；2017年，王強(qiáng)等[6]對尼洋河的雙須葉須魚年齡和生長特性進(jìn)行了分析，結(jié)果表明雙須葉須魚個(gè)體低齡化和小型化日趨嚴(yán)重。筆者通過開展雙須葉須魚人工繁殖及魚苗培育技術(shù)研究，旨在為雅魯藏布江中游漁業(yè)資源保護(hù)與利用和開展增殖放流工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 親魚選擇

在3月中旬，選擇體格健壯、體色正常、無傷無畸形、發(fā)育良好的野生雙須葉須魚作為親本。雌魚個(gè)體相對較大，身體光滑，腹部明顯膨大、松軟、有彈性、生殖孔明顯突出圓潤，臀鰭末端鰭條不分叉（圖1A），體質(zhì)量為0.46～1.65 kg，平均體質(zhì)量為（0.94±0.36）kg；雄魚個(gè)體相對較小，腹部扁平，手摸身體粗糙，臀鰭末端鰭條分叉（圖1B），輕輕擠壓腹部有乳白色精液流出，并能在水中很快散開，體質(zhì)量為0.32～1.02 kg，平均體質(zhì)量為（0.75±0.27）kg。將雌雄魚分別暫養(yǎng)于貼瓷磚的水泥池，提前3 d用濃度500 mg/L的高猛酸鉀侵泡水泥池，再用清水清洗干凈。保持溶解氧在6.5 mg/L以上，水溫為12～13 ℃。

1.2 人工催產(chǎn)及授精

2017年3月下旬，共分2批次進(jìn)行人工催產(chǎn)，使用催產(chǎn)藥物為促黃體生成素釋放激素類似物（LRH-A2）和鯉魚腦垂體（PG）混合物，采用2次注射法。具體如表1所示，雄魚注射時(shí)間與雌魚第2針同步，劑量為雌魚的1/3?？刂扑髁繛? 200 L/h，溶解氧在6.5 mg/L以上，水溫12～13 ℃。

第1批授精方式采用干法授精，即將雄魚精液直接擠入裝有卵的瓷盆中，迅速攪拌受精；第2批在擠卵之前先收集雄魚精液，鏡檢合格后再進(jìn)行人工干法授精，不合格精液直接淘汰。

1.3 魚卵孵化

在水溫12～13 ℃、溶解氧7.5 mg/L條件下，采用木質(zhì)孵化盤，孵化盤大小為30 cm×20 cm，每個(gè)放卵3 000粒，每天定期檢查受精卵發(fā)育情況，當(dāng)胚胎發(fā)育至原腸胚中期時(shí)計(jì)算受精率。孵化期間及時(shí)將死卵剔除。當(dāng)魚苗開始出膜時(shí)，每天統(tǒng)計(jì)出膜情況，待全部破膜時(shí)，將其轉(zhuǎn)入直徑60 cm的圓形塑料盆中，每盆放養(yǎng)魚苗2 500尾，盆壁開1個(gè)10 cm×5 cm的缺口，再用細(xì)網(wǎng)密封，以保障流水狀態(tài)。

1.4 魚苗培育

魚苗破膜7～9 d后，大量仔魚開始上浮，投喂使用350目篩絹過濾的雞蛋蛋黃和0.2 mm微粒子配合飼料混合液，每天投喂4次，06∶00—07∶00、11∶00—12∶00、17∶00—18∶00、22∶00—23∶00，每次一個(gè)圓形塑料盆為10 mL，15～20 min后將水換掉，連續(xù)投喂8 d；然后，再將魚苗轉(zhuǎn)入水泥池中培育，放養(yǎng)密度為10 000尾/m3，投喂經(jīng)350目篩絹過濾的0.2 mm微粒子配合飼料和鹵蟲蟲卵混合液，連續(xù)投喂10 d后轉(zhuǎn)為直接投喂0.2 mm微粒子配合飼料，每天利用虹吸方法清理殘餌及污垢1次，連續(xù)培育23 d，幼魚平均體長達(dá)（1.95±0.13）cm時(shí)移至網(wǎng)箱培育，放養(yǎng)密度為8 000尾/m3。

2 結(jié)果與分析

2.1 親魚催產(chǎn)及受精情況

由表2可知，將雙須葉須魚分2批次進(jìn)行人工催產(chǎn)，第1批催產(chǎn)雌魚13尾，平均體長為（36.3±3.0）cm，平均體質(zhì)量為（0.85±0.32）kg，其中產(chǎn)卵親魚6尾，產(chǎn)卵55 058粒，獲得受精卵40 247粒，催產(chǎn)率為46.2%，平均受精率為73.1%；第2批催產(chǎn)15尾，平均體長為（37.1±3.4）cm，平均體質(zhì)量為（1.02±0.38）kg，其中產(chǎn)卵親魚13尾，產(chǎn)卵116 093粒，獲得受精卵109 041粒，催產(chǎn)率為86.7%，平均受精率為87.0%。

2.2 人工孵化情況

由表3可知，在雙須葉須魚在水溫12～13 ℃、溶解氧7.5 mg/L的條件下，2批次雙須葉須魚魚苗出膜時(shí)間主要集中在192～204 h，孵化仔魚分別為28 375和91 952尾，孵化率依次為70.5%和84.3%，第2批孵化率比第1批高13.8百分點(diǎn)。

2.3 魚苗培育情況

由圖2可知，第1批雙須葉須魚魚苗死亡時(shí)間段主要集中在出膜后22～30 d，其中25～27 d出現(xiàn)死亡高峰，死亡魚苗4 857尾；第2批死亡時(shí)間段主要集中在出膜19～27 d，其中22～24 d為死亡高峰，死亡魚苗8 743尾。經(jīng)初步診斷，魚苗死亡原因可能是水霉病。第1批死亡率為40.7%，第2批死亡率為31.2%，主要原因是第2批使用濃度50 mg/L的甲醛浸泡20 min，有效降低了雙須葉須魚幼魚的死亡率。

3 討論

3.1 雙須葉須魚人工繁殖

許多魚類的人工繁殖技術(shù)最早通過模仿自然繁殖習(xí)性進(jìn)行，鯉魚的人工繁殖技術(shù)采用人工制作的魚巢進(jìn)行產(chǎn)卵，鰱魚的人工繁殖技術(shù)建立了孵化環(huán)道及利用水流刺激促使親魚產(chǎn)卵。人工催產(chǎn)的原理是通過注射外源激素在“下丘腦-垂體-性腺”功能軸的某一種或幾種水平上，調(diào)節(jié)魚體自身的內(nèi)分泌活動(dòng)，激發(fā)內(nèi)源激素的產(chǎn)生或代替內(nèi)源激素的作用，從而誘導(dǎo)性腺發(fā)育成熟并排出精子和卵子[7-15]。目前，在裂腹魚類人工繁殖技術(shù)方面，青海湖裸鯉和齊口裂腹魚人工繁殖技術(shù)較為成功，特別是青海湖裸鯉，已推廣至甘肅、河北、四川等地區(qū)進(jìn)行人工養(yǎng)殖和繁育[16]。

大多數(shù)魚類在人工繁殖過程中，親魚培育是前提，而此次人工繁殖，選擇野生雙須魚作為親本，其主要原因是雙須葉須魚人工馴養(yǎng)技術(shù)還未突破，人工養(yǎng)殖死亡率為100%。目前西藏的主要裂腹魚包括巨須裂腹魚、異齒裂腹魚和拉薩裂腹魚，雖然人工馴養(yǎng)條件下能夠攝食顆粒飼料，并能越冬存活，但在次年繁殖季節(jié)，雌魚性腺均發(fā)育至4期后卵粒發(fā)白，處于死亡狀態(tài)，無法進(jìn)行人工繁殖，而雄魚性腺發(fā)育正常，精子活力良好，其原因有待進(jìn)一步研究。選擇促黃體素釋放激素類似物和鯉魚腦垂體合劑，采用2次注射法，催產(chǎn)效果較好，這與大多數(shù)鯉科魚類催產(chǎn)類似。在人工干法授精時(shí)，擠卵前先收集雄魚精液，鏡檢后選擇活力旺盛的精子，是提高受精率的有效途徑之一。

3.2 雙須葉須魚魚苗培育及病害防治

魚苗培育是水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)過程重要的環(huán)節(jié)之一，對大多數(shù)魚類而言，水溫、溶解氧、水質(zhì)、放養(yǎng)密度及餌料選擇都是魚苗培育過程中關(guān)鍵因素[17-21]。該試驗(yàn)結(jié)果表明，水質(zhì)管理、餌料選擇和適時(shí)投喂都會(huì)影響雙須葉須魚魚苗培育的成活率，所以，水質(zhì)在蓄水池經(jīng)過曝氣，保證充足的溶解氧，用過濾棉過濾后再流入水泥池，待魚苗平游口膜打開后，用350目篩絹過濾蛋黃和0.2 mm過濾的配合飼料進(jìn)行開口，魚苗攝食良好。

在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，一定遵循預(yù)防為先，防治結(jié)合的原則。此次魚苗培育階段中發(fā)現(xiàn)雙須葉須魚易得水霉病，必須做到勤觀察、早預(yù)防，使用甲醛浸泡可以預(yù)防水霉病的發(fā)生，有效提高魚苗成活率。

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