高效液相色譜法測定益康膠囊中23－乙酰澤瀉醇B含量

楊立志，姜雪敏

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江雞西158100）

·檢驗檢測·

高效液相色譜法測定益康膠囊中23－乙酰澤瀉醇B含量

楊立志，姜雪敏

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江雞西158100）

目的建立測定益康膠囊中23－乙酰澤瀉醇B含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Agilent Extend－C18柱(250 mm× 4.6 mm，5 m)，流動相為乙腈－水（72∶28），檢測波長為208 nm，流速為1.0 m L/min。結(jié)果23－乙酰澤瀉醇B進樣量在0.022 1～0.552 6 g內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r＝0.999 9；23－乙酰澤瀉醇B平均回收率為98.26%，RSD為0.30%(n＝6)。結(jié)論該法操作簡便、重復性好、結(jié)果準確，可作為益康膠囊的質(zhì)量控制方法。

23－乙酰澤瀉醇B；益康膠囊；高效液相色譜法；含量測定

益康膠囊是由人參、三七、黃芪、黃精、天花粉、何首烏、靈芝、丹參、澤瀉、珍珠粉層、維生素E、維生素A、甲基橙皮苷制成的中成藥，具有調(diào)節(jié)全身代謝、恢復細胞活力、改善心血管功能、健腦強身、延緩衰老、扶正固本的功效，用于冠心病、高血脂癥、腦動脈硬化、老年性視力減弱。其質(zhì)量標準收載于《衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第十三冊)》[1]，標準中無澤瀉的含量測定項。為完善質(zhì)量控制標準，參考文獻[2－12]，建立了測定益康膠囊中23－乙酰澤瀉醇B含量的高效液相色譜（HPLC）法，其重復性好，準確度高，可控制益康膠囊的質(zhì)量?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津2010A型高效液相色譜儀（島津紫外檢測器，LC solution色譜工作站）；XSE205DU型電子分析天平(瑞士梅特勒·托利多公司)；KQ－400KDE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

23－乙酰澤瀉醇B對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111846－201102）；益康膠囊（吉林吉春制藥股份有限公司，批號為131002；長春普華制藥股份有限公司，批號為130902；通化吉通藥業(yè)有限公司，批號為140802）；試驗用水為哇哈哈純凈水；乙腈(Merck公司）為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Extend－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；流動相：乙腈－水（72∶28）；流速：1.0mL/min；檢測波長：208 nm；柱溫：25℃；進樣量：10μL。理論板數(shù)按23－乙酰澤瀉醇B峰計不低于3 000，分離度大于1.5。

2.2 溶液制備

對照品溶液：稱取23－乙酰澤瀉醇B對照品（含量98.5%）11.22 mg，精密稱定，加乙腈制成質(zhì)量濃度為22.10μg/mL的溶液，即得。

供試品溶液：稱取本品粉末2.007 7 g（每粒含量為0.414 7 g），精密稱定，置錐形瓶中，加入乙腈25m L，稱定質(zhì)量，超聲處理30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用乙腈補足減失的質(zhì)量，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

陰性對照品溶液：按處方比例以相同工藝制成不含澤瀉的陰性對照樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗：精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液，按擬訂方法測定，其色譜圖見圖1。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液相應位置有一相同保留時間的色譜峰，陰性對照無干擾。

1.23－乙酰澤瀉醇BA.供試品溶液B.對照品溶液C.陰性對照品溶液圖1高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密吸取23－乙酰澤瀉醇B對照品溶液1，2，5，10，15，20，25μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對照品進樣量為橫坐標（X，μg）、峰面積積分值為縱坐標（Y）進行回歸分析，得回歸方程Y＝9.483 6×105X－1.479 6×103，r＝0.999 9(n＝7)。結(jié)果表明，23－乙酰澤瀉醇B進樣量在0.022 1～0.552 6μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結(jié)果23－乙酰澤瀉醇B的平均峰面積值為208 504，RSD為0.86%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品溶液（批號為131002），于0，2，4，8，12，24 h時分別進樣10μL，記錄峰面積。結(jié)果23－乙酰澤瀉醇B峰面積的平均值為240 477，RSD為0.92%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復性試驗：取同一批（批號為131002）樣品6份，精密稱定，依法制備供試品溶液，進樣測定。結(jié)果23－乙酰澤瀉醇B平均含量為每粒0.132mg，RSD為0.93%，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：稱取已知含量的同一批（批號為131002，含量為每粒0.132mg）樣品6份，每份約1.0 g，精密稱定，分成3組，每組分別加入0.302 g/L的23－乙酰澤瀉醇B對照品溶液0.8，1.0，1.2 m L，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，并計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取益康膠囊3批，依法制備方供試品溶液，按擬訂色譜條件測定含量。結(jié)果批號為131002，130902，140802的樣品中23－乙酰澤瀉醇B含量分別為每粒0.132，0.120，0.146mg（n＝6）。

3 討論

3.1 流動相選擇

曾考察了以乙腈－水、甲醇－0.2%甲酸溶液、甲醇－0.1%磷酸溶液為流動相，結(jié)果以乙腈－水為流動相時分離效果較好；并對其流動相比例進行了適當調(diào)整，結(jié)果乙腈－水（72∶28）分離度更好。

3.2 主要成分選擇

方中澤瀉為主藥，23－乙酰澤瀉醇B是其主要成分，質(zhì)量標準中尚未對其含量進行控制，該方法簡便易行，故采用測定處方中澤瀉量來控制該制劑的質(zhì)量。

3.3 提取條件選擇

分別考察了以水、乙腈、80%甲醇作為溶劑，結(jié)果乙腈提取效果好，故以乙腈為溶劑；樣品分別超聲提取15，30min及加熱回流1 h，結(jié)果超聲30min提取較完全，故選擇超聲30min。

表1 23－乙酰澤瀉醇B加樣回收試驗結(jié)果（n＝6）

3.4 檢測波長選擇

對23－乙酰澤瀉醇B對照品溶液于200～400 nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描，于208 nm波長處有最大吸收，故選擇該波長為檢測波長。

[1]WS3－B－2605－97.衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第十三冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：229.

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Content Determ ination of 23－Acetyl A lisol B in Yikang Capsu le by HPLC

Yang Lizhi,Jiang Xuemin
(Jixi Food and Drug Inspection and Testing Center,Jixi,Heilongjiang,China 158100)

Ob jective To establish an HPLC method for content determination of 23－Acetyl Alisol B in Yikang Capsule by HPLC.M ethods The separation was performed on a Agilent Extend－C18column(250 mm×4.6 mm,5μm)with acetonitrile－water(72∶28), The detection wave length was 208 nm and The flow rate was 1.0 m L/min.Resu lts There was good linearity between the peak area and injection volume in the ranges of 0.022 1－0.552 6μg(r＝0.999 9).The average recovery of 23－Acetyl Alisol B was 98.26%,RSD＝0.30%(n＝6).Conclusion The method is simple,reproducible and accurate,which can be used for quality control of Yikang Capsule.

23－Acetyl Alisol B;Yikang Capsule;HPLC;content determination

R927.2

A

1006－4931(2017)09－0033－03

2017－02－15)

10.3969/j.issn.1006－4931.2017.09.010

楊立志(1977－)，男，大學本科，副主任藥師，主要從事藥品檢驗檢測工作，(電子信箱)lizhi669＠sohu.com。