簡析禽白血病診斷及防控

王 研，周 浪，楊 蔚，周 群

（1.大理白族自治州州動物疫病預防控制中心，云南 大理 671000；2.大理農(nóng)林職業(yè)技術學院，云南 大理 671000）

1 ?禽白血病病毒生物學特性

禽白血病是由禽白血病病毒引起多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科α逆轉(zhuǎn)錄病毒屬，在形態(tài)上是典型的C型腫瘤型病毒，基因組大小約為7.2kb，病毒不耐高溫，在外界存活時間短，禽白血病病毒根據(jù)囊膜糖蛋白抗原差異可分為A-J及K共11個亞群，雞是本群所有病毒的自然宿主，具有致病性的主要為外源性的禽白血病，其中J亞群對家禽的傳播性、致病性和危害性最強，2018年我國爆發(fā)了J亞群禽白血病給我國養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的損失[1]。不同亞群病毒通常利用宿主細胞的不同受體介導感染，主要受體有Tva、Tvb、Tvc及chNHE1[2]。

2 ?禽白血病的危害

禽白血病感染的家禽會出現(xiàn)生長遲緩、產(chǎn)蛋下降、免疫抑制、腫瘤死淘等危害。禽白血病可通過水平及垂直傳播，垂直傳播時禽白血病的放大效應危害從曾祖代次逐漸放大，嚴重影響種系的培育。有研究表明陽性公雞的后代垂直傳播性要高于陽性母雞[3]，加強種公雞的管理對預防禽白血病具有重要意義。先天感染的雞產(chǎn)生免疫耐受可能會終生帶毒，禽白血病可引起禽淋巴細胞的凋亡進而造成免疫器官發(fā)生病變特別是法氏囊發(fā)育不良，禽白血病病毒可引發(fā)禽的免疫抑制，降低家禽的疫苗免疫抗體水平，李鑫等[4]通過將1日齡SPF雞接種禽白血病病毒后接種禽流感疫苗，結(jié)果顯示禽白血病對禽流感疫苗具有顯著的抑制作用。張桂芝等[5]在經(jīng)1日齡雞感染禽白血病病毒對疫苗免疫效果的檢測中發(fā)現(xiàn)禽白血病能顯著降低雞新城疫禽流感的抗體水平。做好禽白血病的防控，可消除其對家禽疫苗免疫的危害。同時禽感染禽白血病可能會引起禽的腹水及肝脾腫大[6]。做好禽白血病的防控不僅可以減少直接的經(jīng)濟損失，還有利于種系的培育。

3 ?禽白血病的診斷

禽白血病的凈化診斷是關鍵，禽白血病的檢測相對于其他禽病檢測較為復雜，主要是禽白血病病毒檢測如何排除內(nèi)源性禽白血病病毒的干擾，目前采用的主要方法有病毒分離、血清學檢測、分子生物學檢測等，各養(yǎng)禽場可根據(jù)不同目的選擇不同的檢測方法，

3.1 ?病毒分離

病毒分離作為禽白血病檢測的金標準，成為禽白血病凈化檢測的重要檢測方法，通常將樣本接種DF1細胞后培養(yǎng)1周左右。病毒分離時應根據(jù)檢測目的選擇不同的樣本，目前多選擇蛋清、胎糞、血液、精液等樣品，在病毒分離過程中不同樣本對檢測結(jié)果有差異，張亞文等[7]用種公雞精液雞血液病毒分離檢測地方雞禽白血病時結(jié)果存在差異。王明月等[8]用血清、血漿及蛋清樣品使用DF1細胞進行病毒分離檢測，結(jié)果顯示蛋清最敏感。病毒分離是檢測禽白血病最可靠的方法，可以排除內(nèi)源性禽白血病病毒干擾。但是對技術要求較高，操作比較繁瑣周期較長不適合大規(guī)模檢測，同時在病毒分離時要結(jié)合檢測目的選擇合適的樣本。

3.2 ?血清學檢測

血清學檢測是利用禽白血病特異性抗原與特異性抗體相結(jié)合的一種檢測方法，主要有ELISA、病毒中和試驗、瓊脂擴散試驗等。目前ELISA檢測方法以其快速、敏感、適合大批量檢測等特點，被廣泛用于禽白血病的診斷及凈化檢測中，現(xiàn)就最主要的檢測方法ELISA作簡要介紹，ELISA檢測方法可以檢測禽白血病的抗原及抗體，曹利利等[9]利用純化后的P27重組蛋白為包被抗原建立的ELISA方法具有良好的特異性及重復性，但不同樣本對結(jié)果會造成影響。陳晨等[10]利用原核表達P27蛋白作為抗原制備包被抗體，酶標兔抗P27作為酶標抗體，建立了雙抗體夾心ELISA檢測方法具有良好的特異性。不同樣本對檢測結(jié)果會有影響，徐國洋等[11]用20只10日齡雞進行攻毒試驗后采肝臟、血清、泄殖腔拭子和骨髓進行ELISA檢測，結(jié)果表明血清檢測結(jié)果更為可靠。檢測試劑盒對檢測結(jié)果也有影響，郭慧君等[12]用3種不同試劑盒檢測禽白血病病毒結(jié)果有差異。但在實際情況中應根據(jù)檢測目的選擇不同的樣本及方法。

3.3 ?分子生物學檢測

在禽白血病的檢測中分子生物學檢測也扮演重要的角色，目前運用最多的是聚合酶鏈式反應、基因芯片檢測等方法。Pcr 檢測作為現(xiàn)代實驗室檢測方法已廣泛用于動物疫病的診斷，禽白血病的診斷也建立了多種pcr診斷方法，嚴立福等[13]用熒光定量PCR方法檢測30份七彩山雞血漿樣品的細胞培養(yǎng)物時具有良好的特異性及敏感性，但是此方法無法區(qū)分內(nèi)源性的禽白血病，適合臨床樣品的檢測。俞燕等[14]也建立了多重熒光定量PCR的方法檢測A、B、J、K亞群禽白血病用于禽白血病的流行病學調(diào)查。PCR方法的建立使禽白血病的檢測更加方便快捷，但由于禽白血病病毒的生物學特性禽白血病容易發(fā)生變異重組對PCR的引物探針特異性要求較高，可能會出現(xiàn)假陽性結(jié)果，另外使用PCR檢測方法不能區(qū)分內(nèi)源性禽白血病病毒，所以禽白血病在凈化過程中不建議以PCR檢測為主要依據(jù)?；蛐酒瑱z測方法已經(jīng)廣泛用于疫病檢測，具有高通量、快速、靈敏的特點，蘇霞等[15]利用禽白血病A、C、D亞群參考毒株設計擴增引物及探針制備基因芯片檢測禽白血病其靈敏度達到106cop-ies/mL，比 pcr敏感性高出100倍。張悅[16]根據(jù)用禽白血病B、E、J亞群參考毒株設計擴增引物及探針制備基因芯片對50份臨床樣品進行檢測具有較高的特異性和敏感性。為了檢測結(jié)果的準確性，基因芯片檢測方法對引物及基因芯片設計有較高要求，在實際檢測過程中更多用于實驗室研究。

4 ?禽白血病的防控

禽白血病的防控，對養(yǎng)禽業(yè)來說具有重要的意義，做好禽白血病的防控不僅能減少經(jīng)濟損失，還能提升養(yǎng)殖場形象有利于市場競爭。由于禽白血病病毒的生物學及傳播特性，還因其能夠垂直傳播，對種系的培育及禽類遺傳資源的保護帶來了巨大的挑戰(zhàn)。由于目前沒有有效的疫苗預防，且禽白血病沒有特效藥治療，防控主要依靠凈化及飼養(yǎng)管理。

4.1 ?加強種源管理

禽白血病是垂直傳播性疾病，加強種源管理對禽白血病的防控至關重要。種雞引進需來自非疫流行區(qū)，種源場取得國家的各項許可且場源固定，引種前應對種源加強檢測合格后方能引進，引進后還需隔離飼養(yǎng)觀察一個潛伏期，在隔離期間每隔一周采樣監(jiān)測結(jié)果無異常才能并群飼養(yǎng)，加強種源管理是凈化控制禽白血病的關鍵措施[17]。

4.2 ?加強飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)管理對于禽白血病的防控至關重要，除執(zhí)行常規(guī)飼養(yǎng)管理制度外，應嚴格控制人員和物品的流動，減少各種應急，由專人負責受精，加強飲用水管理水源無污染符合農(nóng)業(yè)標準，加強對禽糞便管理及時無害化處理避免交叉污染。雖然禽白血病沒有特效藥物但是據(jù)研究逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑類藥物有助于降低禽白血病垂直傳播感染的危害[18]，豆春峰等[19].在體外實驗中驗證了二甲雙胍具有抑制禽白血病增殖的作用。有研究表明黃芪、郁金、益母草、土茯苓對禽白血病gp37基因mRNA表達具有抑制作用，[20]銀杏種皮多糖具有抑制禽白血病-J亞群復制的能力[21]在飼養(yǎng)過程中可以定期投喂，同時對做好家禽基礎免疫工作，增強家禽抵抗力。

4.3 ?禽白血病凈化

目前凈化是防控禽白血病最有效的措施，也是種禽場的必要選擇。2012年我國提出了將禽白血病等16種動物疫病作為優(yōu)先防治動物疫病逐步進行控制、凈化、消除。在我國不少種禽場都著手禽白血病凈化，禽白血病凈化雞群在生產(chǎn)性能上明顯優(yōu)于非凈化雞群。張銳等[22]收集全國297個規(guī)?；B(yǎng)殖場的調(diào)查數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)凈化后的雞場可有效降低禽白血病的發(fā)病率。有研究表明種雞場禽白血病凈化后禽流感新城疫抗體合格率由48.5%提高到95%以上，雞白痢感染率由62.05%下降到9.37%[23]。然而在禽白血病的凈化過程中還存在一系列的困難，凈化需對檢出陽性的禽群進行淘汰，增加養(yǎng)殖場成本且周期較長短期內(nèi)的不會帶來經(jīng)濟效益，維持凈化場所開展的工作存在資金、技術、成本等壓力。禽白血病的凈化工作是一項復雜而漫長的過程，需要經(jīng)過數(shù)個世代不斷地凈化才能實現(xiàn)，如何保證每個世代孵化、育成、產(chǎn)蛋等各環(huán)節(jié)做到嚴格把控相互協(xié)調(diào)尤為重要，最為關鍵的是凈化后如何維持，在給禽群開展基礎免疫時一定要開展檢測不使用污染的疫苗[24]，盡管面臨著許多困難但禽白血病的凈化已是大勢所趨。