HPLC法測定感冒止咳膏中黃芩苷的含量

許慶+何繼祥+安艷蘇?í?

【摘要】目的：建立高效液相色譜法（HPLC）測定感冒止咳膏中黃芩苷含量的方法。方法： 采用BDS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×46mm，5μm）；以甲醇（A）-0.2%磷酸溶液（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0～11min，55%B；11～12min，55%B→20%B；12～19min， 20%B；19～20min，20%B→55%B；20～25min，55%B）；流速為10mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：280nm。結(jié)果：黃芩苷濃度在570～9112μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=09999，平均回收率為9788%（RSD為116%）。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、快速、簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于感冒止咳膏中黃芩苷的含量測定。

【關(guān)鍵詞】感冒止咳膏；黃芩苷；高效液相色譜法

【中圖分類號】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）11-0043-03

Dtermination of the Content of Baicalin in Cold Cough Relieving Ointment by HPLC

XU QingHE JixiangAN Yansu

Qujing Food and Drug Inspection Test Center of Yunnan，Qujing 655000，China

Objective To establish an HPLC method for the determination of Baicalin in cold cough relieving plaster （HPLC）. Methods Using BDS HYPERSIL C18 column （250mm×46mm， 5μm）； （A） in methanol -02% phosphoric acid solution （B） as mobile phase， gradient elution （0～11min， 11～12min， 55%B； 55%B， 20%B； 20%B； 12～19min， 19～20min， 20%B， 55%B； 20～25min. 55%B）； the flow rate was 10mL/min； column temperature： 30 C； detection wavelength： 280nm. Results Baicalin concentration in the range of 570～9114μg and peak area showed a good linear relationship， r=09999， the average recovery was （RSD=11%）. Conclusion The method is accurate， rapid， simple， reliable and stable. It can be used to determine the content of Baicalin in cold cough relieving ointment.

Cold Cough Ointment； Baicalin； HPLC

感冒止咳膏為曲靖市第一人民醫(yī)院制劑室研制的制劑，由黃芩、南沙參、柴胡、款冬花、百部、荊芥、紫菀等十六味中藥制成。該品具有解表驅(qū)邪、清熱潤肺、止咳化痰的作用，主要用于傷風(fēng)感冒引起的喉嚨腫痛，咳嗽、痰多等癥。其中黃芩為制劑中的君藥，來源于唇形科黃芩屬植物黃芩（ Scutellaria baicalensis Georgi） 的干燥根，是常用中藥之一。黃芩藥用歷史悠久，始列于《神農(nóng)本草經(jīng)》。性寒、味苦； 歸肺、心、肝、大腸經(jīng)，能清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎，為清熱燥濕常用藥[1]。黃芩中主要藥理活性成分為黃芩苷，已被證明有廣泛的藥理活性，具有消炎、解熱、抗病毒、抗菌的作用[2-4]。但有研究發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地、不同栽培年限及不同部位的黃芩藥材中的黃芩苷含量差別較大[5]。感冒止咳膏為多味藥材制成的膏狀液體制劑，其中所含成分較為復(fù)雜，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[6]中僅以薄層色譜來鑒別其中的金蕎麥、桔梗兩種藥材，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)滯后，急需建立一些對制劑中君藥成分定量控制的方法。筆者參照文獻(xiàn)[1，7]，以黃芩中黃芩苷為定量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜法對黃芩苷進(jìn)行含量測定，為有效控制“感冒止咳膏”質(zhì)量提供可靠且簡便易行的方法。

1儀器與材料

11儀器Agilent1260型高效液相色譜儀（包括G1311C系列四元泵，G1314F VWD檢測器，G1316A柱溫箱，G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器）；KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLE MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；PURELAB Flex 3一體式超純水儀（英國ELGA公司）

12材料黃芩苷對照品（批號：110715-201318，中國食品藥品檢定研究院，含量為933%）；磷酸（分析純，批號：2015071401，成都市科龍化工試劑廠）；甲醇（色譜純，CAS號：67-56-1，賽默飛世爾科技（中國）有限公司）；乙醇（分析純，批號：20160708，成都市科龍化工試劑廠）；水為純化水。感冒止咳膏（批號：20160714、20160806、20160923，曲靖市第一人民醫(yī)院制劑室）。陰性樣品用藥材南沙參、柴胡、款冬花、百部、荊芥、紫菀等十六味中藥來源于曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心中藥標(biāo)本室經(jīng)檢驗(yàn)合格的留樣標(biāo)本。

2方法與結(jié)果

21色譜條件色譜柱：BDS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×46mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇（A）-02%磷酸溶液（B），梯度洗脫（0～11min，55%B；11～12min，55%B→20%B；12～19min，20%B；19～20min，20%B→55%B；20～25min，55%B）；流速：10mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：280nm；進(jìn)樣量：10μL。

22溶液制備

221供試品溶液制備取本品內(nèi)容物10g，精密稱定，置50mL燒杯中，加入70%乙醇攪拌使溶化，再轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，用70%乙醇洗滌燒杯，洗液并入量瓶中，超聲（頻率：45KHz，功率：300W）15min，取出，放冷，用70%乙醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

222對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品（含量933%）1221mg置50mL量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，即得黃芩苷質(zhì)量濃度為02278mg/mL的對照品溶液。

223陰性樣品溶液的制備按感冒止咳膏處方比例，分別稱取除黃芩外的其它藥材，依感冒止咳膏工藝制備不含黃芩的陰性樣品，并按“221”項(xiàng)下制備陰性樣品溶液。

23線性關(guān)系的考察分別精密吸取“222”項(xiàng)下黃芩苷對照品溶液0625、125、25、50、100mL，分別置25mL量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，制得含黃芩苷570、1039、2278、4556、9112μg/mL的系列對照品溶液。在“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以對照品濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），計(jì)算線性回歸方程，得黃芩苷的回歸方程Y=354007X-60126（r=09999）。結(jié)果表明：黃芩苷濃度在570～9112μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

24精密度試驗(yàn)精密吸取同一黃芩苷對照品溶液（含黃芩苷4556μg/mL）在“21”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積值，RSD為08%，表明儀器的精密度良好。

25重復(fù)性試驗(yàn)取同1批感冒止咳膏（批號：20160714）6份，按“221”項(xiàng)下的方法處理，記錄峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果每1g樣品中平均含黃芩苷166mg，RSD為12%，表明該方法的重復(fù)性良好。

26穩(wěn)定性試驗(yàn)取同1份供試品溶液（批號：20160714），分別于0、2、8、12、16、24h按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，記錄峰面積。結(jié)果黃芩苷的RSD為11%，表明供試品溶液在24h內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。

27加樣回收率試驗(yàn)分別取已知含量的同一批感冒止咳膏（批號：20160714）約05g，精密稱定，共6份，分別精密加入對照品溶液（濃度為02278mg/mL）4mL，按“221”項(xiàng)下的方法處理，制備供試液，分別測定，計(jì)算回收率。平均回收率為9788%，RSD為116%。見表1。

28專屬性試驗(yàn)將陰性樣品溶液按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果色譜圖中在黃芩苷相應(yīng)出峰位置未出現(xiàn)干擾峰。

29樣品含量測定取不同批號的供試品3批按“221”項(xiàng)下的方法處理，制備供試品溶液，按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，按上述色譜條件測定峰面積積分值，以外標(biāo)法計(jì)算黃芩苷含量。見表2。

3討論

31流動(dòng)相的選擇研究先后試用文獻(xiàn)中[1，7]甲醇-水-磷酸、甲醇-水-冰乙酸為流動(dòng)相的等度分析，由于樣品中成分復(fù)雜，黃芩苷峰后仍還有一些強(qiáng)保留的雜質(zhì)峰出現(xiàn)，整個(gè)分析時(shí)間較長，考慮到分析時(shí)間及黃芩苷峰的分離效果，筆者采用了甲醇-02%磷酸為流動(dòng)相并采取梯度洗脫，結(jié)果能得到對稱性、分離度均較好的黃芩苷峰，且能把強(qiáng)保留雜質(zhì)較快的洗脫出來，縮短了分析時(shí)間，提高了分析效率。故選用甲醇-02%磷酸為流動(dòng)相梯度洗脫。

32供試品取樣方法的選擇取樣時(shí)先采用量取樣品體積，但發(fā)現(xiàn)由于供試品為粘稠的膏狀液體，精密量取體積較難操作，故筆者針對制劑特點(diǎn)采用稱取樣品質(zhì)量，并先于燒杯中溶化樣品再轉(zhuǎn)移至量瓶中溶解定容，整個(gè)取樣過程簡單、易行。

33提取條件的選擇超聲時(shí)間的確定：精密稱取樣品（批號20160714）5份，每份約10g，按“221”項(xiàng)下的方法處理，5份樣品分別超聲（頻率：45KHz；功率：300W）處理5、10、15、20、25min，結(jié)果超聲10min后黃芩苷含量基本不變，證明樣品超聲處理15min，能將樣品中的黃芩苷提取完全，所以超聲（頻率：45KHz；功率：300W）時(shí)間確定為15min。

此方法準(zhǔn)確、快速、簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于感冒止咳膏中黃芩苷的含量測定。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2017-04-05編輯：梁志慶）