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    惠州市無償獻(xiàn)血者血液HBV,HCV,HIV(1+2型)核酸篩查匯集檢測和單人份檢測兩種檢測模式結(jié)果分析

    2017-06-27 06:57:01萬小春鐘展華嚴(yán)鳳好曾演強(qiáng)曾少麗湛玉武
    關(guān)鍵詞:單人核酸試劑

    萬小春,鐘展華,嚴(yán)鳳好,曾演強(qiáng),曾少麗,湛玉武

    (惠州市中心血站,廣東惠州516000)

    惠州市無償獻(xiàn)血者血液HBV,HCV,HIV(1+2型)核酸篩查匯集檢測和單人份檢測兩種檢測模式結(jié)果分析

    萬小春,鐘展華,嚴(yán)鳳好,曾演強(qiáng),曾少麗,湛玉武

    (惠州市中心血站,廣東惠州516000)

    目的探索單人份檢測模式與匯集檢測模式兩種血液核酸篩查方式對于血液核酸篩查結(jié)果的影響。方法先采用蘇州華益美生物科技有限公司生產(chǎn)的乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒(1+2型)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光法),對ELISA篩查合格的標(biāo)本進(jìn)行HBV、HCV、HIV(1+2型)核酸篩查(匯集檢測模式),再用該試劑盒按照單人份檢測模式對匯集檢測過的樣本進(jìn)行復(fù)檢。結(jié)果本研究采用單人份檢測模式共檢測5385例經(jīng)過匯集檢測模式篩查的樣本,篩查出HBV DNA核酸陽性標(biāo)本10例(陽性率1.86‰)。10例核酸陽性標(biāo)本與匯集檢測模式的結(jié)果一致,本研究的兩種檢測模式均未檢測到HCV RNA核酸陽性和HIV(1+2型)RNA陽性的標(biāo)本。結(jié)論在酶免檢測的基礎(chǔ)上應(yīng)用核酸檢測能有效避免HBV、HCV、HIV(1+2型)的漏檢,降低輸血傳播相關(guān)病毒的風(fēng)險。匯集檢測和單人份檢測兩種檢測模式對于檢測結(jié)果無明顯差異。

    核酸檢測;血液安全;單人份檢測;匯集檢測

    病毒核酸檢測技術(shù)(NAT)是直接檢測病原體核酸的一系列技術(shù)的總稱,相比血清學(xué)抗原抗體檢測方法(EIA),血液病毒核酸檢測技術(shù)可以有效縮短抗原抗體免疫檢測的“窗口期”,從而大大降低經(jīng)輸血傳播病毒的風(fēng)險[1-3]。盡管NAT從理論上并不能完全消除病毒感染的“窗口期”,但可以有效地預(yù)防經(jīng)輸血傳播病毒性疾病。單人份檢測模式的標(biāo)本處理相對直接,耗時較短,且即使出現(xiàn)檢測陽性的樣本也可以直接出具核酸檢測結(jié)果而不必經(jīng)過匯集檢測的拆分檢測,能有效縮短血液放行時間,實(shí)現(xiàn)快速檢測,同時降低檢測成本,血液核酸的單人份檢測模式尤其適用于采樣量相對較少的血小板樣本的核酸檢測以及日均采血量較少的血站開展核酸檢測,因此,在原有核酸篩查試劑的技術(shù)基礎(chǔ)上,以保證核酸檢測結(jié)果準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性為原則,開展了血液核酸單人份檢測模式的探索,現(xiàn)將初步的研究結(jié)果報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本2016年惠州市中心血站的無償獻(xiàn)血者標(biāo)本5385例,獻(xiàn)血者年齡為18~55周歲,經(jīng)過HB-sAg、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶篩查合格才允許捐獻(xiàn)。

    1.2 試劑與儀器

    1.2.1 試劑NAT匯集檢測采用蘇州華益美生物科技有限公司產(chǎn)品,NAT單人份檢測采用蘇州華益美生物科技有限公司產(chǎn)品。

    1.2.2 儀器華益美全自動核酸檢測系統(tǒng)包括BACME全自動核酸提取系統(tǒng)(瑞士Hamilton)、ABI7500熒光PCR儀(美國ABI)。SLA-DI4800核酸提取儀(臺灣)、ABI7500熒光PCR儀(美國ABI)。以上儀器均在校驗(yàn)合格期使用。

    1.3 檢測方法判定規(guī)則

    1.3.1 常規(guī)檢測所有血液標(biāo)本均按照我國《獻(xiàn)血者健康檢查要求》(GB18467-2011)進(jìn)行常規(guī)的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP項(xiàng)目的2次ELISA檢測和ALT項(xiàng)目的2次速率法檢測,由不同人員用不同廠家的試劑嚴(yán)格按試劑說明書的要求進(jìn)行檢測。

    任一種試劑檢測為陽性的,重取血樣雙孔復(fù)試,復(fù)試任一孔為陽性的判定為不合格,其中2例抗HIV陽性標(biāo)本送疾病預(yù)防控制中心確認(rèn)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。所有試驗(yàn)結(jié)果均按試劑盒說明書在實(shí)驗(yàn)室管理軟自動判讀。

    1.3.2 核酸匯集檢測對常規(guī)檢測合格的標(biāo)本進(jìn)行核酸(NAT)檢測,首先由全自動核酸提取儀自動混樣,最多每8份標(biāo)本(150μl/份)混合成1份(1.2ml)匯集池(pool)標(biāo)本,由全自動核酸提取儀和熒光核酸擴(kuò)增檢測儀采用核酸定性篩查試劑進(jìn)行HBV、HCV、HIV(1+2型)核酸檢測。每批檢測均設(shè)置1個陰性質(zhì)控和1個陽性質(zhì)控,1個外部陽性質(zhì)控,每個匯集池均含DNA內(nèi)對照(DNA IC)和RNA內(nèi)對照(RNA IC)。

    匯集檢測為核酸陰性,匯集池中的標(biāo)本合格;匯集檢測為核酸陽性,對該匯集池子中的標(biāo)本進(jìn)行拆分檢測,拆分檢測無核酸反應(yīng)性判定為NAT檢測陰性,拆分檢測為核酸陽性判定為NAT檢測陽性。所有試驗(yàn)結(jié)果均按試劑盒說明書的要求用華益美實(shí)驗(yàn)室管理件自動判讀。

    1.3.3 核酸單人份檢測每份標(biāo)本分別取樣400μl,按照操作說明書進(jìn)行標(biāo)本的處理、核酸擴(kuò)增、分析,得出標(biāo)本陰陽性結(jié)論。每批檢測均設(shè)置1個陰性質(zhì)控和1個陽性質(zhì)控,每個樣本和質(zhì)控品均含DNA內(nèi)對照(DNA IC)和RNA內(nèi)對照(RNA IC)。該檢測結(jié)果與匯集檢測與拆分檢測的結(jié)果進(jìn)行分析。

    2 結(jié)果

    本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照考核試劑說明書要求操作,共對5385例臨床用血標(biāo)本進(jìn)行了核酸檢測。5385例EIA合格標(biāo)本中,混合檢測模式篩查出HBV DNA核酸陽性標(biāo)本10例,在5385例標(biāo)本中未檢測到HCV RNA和HIV(1+2型)RNA陽性標(biāo)本;5385例EIA合格標(biāo)本中,單人份檢測模式篩查出HBV DNA核酸陽性標(biāo)本10例,在5385例標(biāo)本中未檢測到HCV RNA和HIV(1+2型)RNA陽性標(biāo)本。

    考核試劑檢測單人份模式檢測EIA合格的臨床用血標(biāo)本5385例。經(jīng)考核試劑檢測,其中10個樣本檢測為HBV DNA陽性,未檢測到HCV RNA和HIV(1+2型)RNA陽性的樣本。匯集模式檢測EIA合格的臨床用血標(biāo)本5385例。匯集池?cái)?shù)量為698個,其中檢出陽性14個,拆分率2.0%,其中8個匯集池拆分檢測出10例HBV DNA陽性樣本,拆分收益率57.14%;匯集模式未檢測到HCV RNA和HIV(1+2型)RNA陽性樣本。

    單人份模式結(jié)果和混合模式結(jié)果比對見表1~3。

    3 討論

    我們采用單人份三聯(lián)HBV DNA、HCV RNA和HIV(1+2型)RNA核酸鑒別檢測試劑檢測血液標(biāo)本,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示惠州地區(qū)無償獻(xiàn)血人群中核酸初次反應(yīng)率較低(1.86‰),這與汪德海等報(bào)道的結(jié)果基本一致,提示惠州地區(qū)的獻(xiàn)血人群處于低感染狀態(tài),這有利于保障血液安全[4]。

    表1 單人份模式與混合模式HBV檢測結(jié)果

    表2 單人份模式與混合模式HCV檢測結(jié)果

    表3 單人份模式與混合模式HIV(1+2)檢測結(jié)果

    在本考核的5385例EIA合格標(biāo)本中,混合檢測模式篩查出HBV DNA核酸陽性標(biāo)本10例,在5385例標(biāo)本中未檢測到HCV RNA和HIV(1+2型)RNA陽性標(biāo)本;5385例EIA合格標(biāo)本中,單人份檢測模式篩查出HBV DNA核酸陽性標(biāo)本10例,在5385例標(biāo)本中未檢測到HCV RNA和HIV(1+2型)RNA陽性標(biāo)本,這可能與本次樣本量較少有關(guān),同時也顯示HBV輸血傳播的殘余風(fēng)險高于HIV-1或HCV,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中NAT收益標(biāo)本全部為HBV DNA反應(yīng)性,這與已有的報(bào)道是相似的[5-10],也證實(shí)HBV輸血傳播的殘余風(fēng)險相對較高,這可能與我國HBV高感染率有關(guān)。

    綜上所述,在酶免檢測的基礎(chǔ)上進(jìn)行核酸檢測可以大大降低輸血的殘余風(fēng)險,特別是HBV輸血傳播的殘余風(fēng)險;而核酸檢測的兩種模式匯集檢測和單人份檢測兩種檢測模式的結(jié)果一致,說明檢測模式對于檢測結(jié)果幾乎沒有影響。

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    R193.3,R512.6,R512.91,R446.62

    A

    1674-1129(2017)03-0447-03

    2016-12-19;

    2017-04-04)

    10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.054

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