玻璃和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉的乙醇提取物對結腸癌細胞的體外凋亡誘導效果比較

趙 欣,易若琨,騫 宇,*

(1.重慶第二師范學院，重慶市功能性食品協(xié)同創(chuàng)新中心,重慶 400067;2.重慶第二師范學院，重慶市功能性食品工程技術研究中心,重慶 400067;3.重慶第二師范學院，功能性食品研發(fā)重慶市工程實驗室,重慶 400067;4.重慶第二師范學院，生物與化學工程系,重慶 400067)

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玻璃和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉的乙醇提取物對結腸癌細胞的體外凋亡誘導效果比較

趙 欣1,2,3,4,易若琨1,2,3,4,騫 宇1,2,3,4,*

(1.重慶第二師范學院，重慶市功能性食品協(xié)同創(chuàng)新中心,重慶 400067;2.重慶第二師范學院，重慶市功能性食品工程技術研究中心,重慶 400067;3.重慶第二師范學院，功能性食品研發(fā)重慶市工程實驗室,重慶 400067;4.重慶第二師范學院，生物與化學工程系,重慶 400067)

對玻璃和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉的體外結腸癌抑制效果進行了研究。兩種水豆豉乙醇提取物中的染料木素和棉籽糖含量高于原料大豆乙醇提取物(RS),玻璃容器發(fā)酵水豆豉乙醇提取物(GVFS)中的染料木素和棉籽糖含量高于不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉乙醇提取物(SSVFS)。通過對體外培養(yǎng)的HT-29和HCT-116結腸癌細胞進行實驗,得出GVFS具有最強的結腸癌細胞生長抑制效果,同時SSVFS對結腸癌細胞的生長抑制效果高于RS。進一步的RT-PCR實驗也顯示GVFS、SSVFS和RS均可以上調結腸癌細胞的Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA表達,同時下調Bcl-2、Bcl-xL表達,且GVFS的作用強于SSVFS和RS。實驗結果顯示，GVFS具有最高的染料木素和棉籽糖含量,同時具有最高的癌細胞增殖抑制效果和凋亡誘導效果,玻璃容器可以用來發(fā)酵具有高生理活性作用的水豆豉。

水豆豉,容器,結腸癌,凋亡,表達

水豆豉(Shuidouchi)是川渝地區(qū)一種釀造調味食品,可以直接食用,亦可用于烹飪[1]。水豆豉是由大豆發(fā)酵制成的一種營養(yǎng)豐富的豆制品,其生產工藝簡單,除了家庭可直接制作外,企業(yè)也根據標準化工藝可進行快速生產[2]。水豆豉除了口味鮮美,生產簡單等優(yōu)點外,還具有包括抗氧化效果等多種功效[3];同時,我國傳統(tǒng)醫(yī)學還認為，水豆豉可緩解風熱頭痛、胸悶煩嘔、痰多虛煩的多種病癥[4]。水豆豉中含有豐富的營養(yǎng)成分,包括蛋白質、多種維生素和礦物質;同時,水豆豉中還含有大豆低聚糖類物質,除了大豆原料中的低聚糖,也含有大豆經發(fā)酵后新產生的幾種低聚糖,豆豉中的大豆低聚糖類物質能提高消化功能,提高機體免疫力,降低腸道內產生的有毒物質,從而起到預防腸道腫瘤的效果[5]。大豆中含有豐富大豆異黃酮,研究表明大豆有效提取物中有近35%為大豆異黃酮,大豆中最主要的抗癌成分為大豆異黃酮[6]。經過發(fā)酵后，大豆中的大豆異黃酮可轉化為具有更好生理活性的活性異黃酮,從而更好地預防機體氧化和腫瘤的發(fā)生[7]。李里特研究表明,亞洲人(中國、日本)的乳腺癌、結腸癌、前列腺癌的低發(fā)病率與食用大豆制品攝入大量染料木素有直接關系,染料木素可以抑制內皮細胞增生和血管生成,從而起到抑制癌癥的作用[8]。大豆低聚糖中重要的活性成分包括棉籽糖,可抑制致癌物質生成的有害酶,起到抗癌作用[9]。大豆發(fā)酵為水豆豉的過程中,蛋白質、脂肪、灰分和粗纖維的變化不大,但是風味物質、大豆異黃酮和大豆低聚糖的含量變化較大,發(fā)酵后的水豆豉含有更多的風味物質、大豆異黃酮和大豆低聚糖[10],大豆異黃酮和大豆低聚糖變化可能是水豆豉抗癌作用差異的關鍵活性物質。同時,不同的發(fā)酵條件對水豆豉中功效成分的含量都會有一定的影響,影響的因素包括發(fā)酵時間、浸泡水量、發(fā)酵溫度、后發(fā)酵時間等[11];功效成分的含量差異也造成不同加工工藝的水豆豉生理活性產生差異,最新的研究還顯示，不同容器對水豆豉的生理活性也有顯著影響[3]。

結腸癌是一種發(fā)生于結腸部位的消化道惡性腫瘤,結腸癌發(fā)病與飲食有直接關系,健康的飲食能夠避免腸炎的發(fā)生,從而避免結腸炎誘發(fā)結腸癌[12],臨床數據顯示，慢性結腸炎患者的結腸癌的發(fā)生率比一般人群高[13]。實驗證明水豆豉有一定體外癌細胞抑制效果[14],本研究針對水豆豉生產中最常用的玻璃容器和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉的體外癌細胞誘導作用進行初步研究,通過細胞增殖的測定和癌細胞凋亡相關基因的變化測定比較玻璃容器和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉對結腸癌細胞的抑制作用,結合生理活性物質大豆低聚糖和大豆異黃酮的含量分析容器對水豆豉生理活性作用的影響,結果對水豆豉的標準化生產將起到一定的指導作用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

大豆(黃豆) 蘭西縣匯源植物油有限公司;染料木素對照品 上海源葉生物科技有限公司;棉子糖對照品 合肥博美生物科技有限公司;MTT試劑 上海伊卡生物技術有限公司;RPMI-1640液體培養(yǎng)基 美國Hyclone公司;CycleTESTTM PLUS DNA染色試劑盒 德國Becton Dickinson公司;Trizol試劑、OligodT18、RNase、dNTP 和MLV 美國Invitrogen公司;RT-PCR引物Bax、Bcl-2、Bcl-xL、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 天根生化科技有限公司;其余試劑 均為國產分析純;HT-29和HCT-116結腸癌細胞 中國科學院典型培養(yǎng)物保藏委員會細胞庫。

Biomate3S紫外可見光分光光度儀、3111二氧化碳培養(yǎng)箱、A200PCR儀、LUX多功能性酶標儀 美國Thermo Fisher Scientific公司;Tancon2500PCR凝膠成像儀 上海天能科技有限公司;ICEN-24R高速冷凍離心機 杭州奧盛儀器有限公司;BI-150A生化培養(yǎng)箱 施都凱儀器設備有限公司;Scientz-10冷凍干燥機 寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 水豆豉的發(fā)酵和提取 參照文獻[3]將大豆與蒸餾水按重量比1∶2浸泡12 h,然后在105 ℃下蒸煮大豆60 min。大豆冷卻到36 ℃后均勻放入同容積的開口玻璃容器和不銹鋼容器中在36 ℃的生化培養(yǎng)箱中保溫發(fā)酵72 h。將發(fā)酵好的水豆豉冷凍干燥,然后將凍干后的水豆豉打碎成粉末,加入20倍量的80%乙醇(v/v)提取12 h,重復提取3次并合并提取液,減壓蒸干溶劑得到水豆豉的乙醇提取物待用[14]。

1.2.2 染料木素計含量測定 稱取5 mg的染料木素標準品置于25 mL容量瓶中,用80%乙醇(v/v)定容。分別吸取不同量的此溶液用80%乙醇稀釋成濃度分別是1、2、3、4和5 μg/mL的染料木素標準液,在271 nm處測吸光度,通過吸光度和棉籽糖含量繪制標準曲線。

將水豆豉乙醇提取物1 g置于100 mL容量瓶中用80%乙醇定容,在271 nm處測定吸光度對照標準曲線求得水豆豉乙醇提取物中大豆異黃酮(以染料木素計)的含量[15]。

1.2.3 棉籽糖含量測定 稱取1 g的棉籽糖標準品置于10 mL容量瓶中,用80%乙醇(v/v)定容。分別吸取不同量的此溶液用80%乙醇稀釋成濃度分別是20、40、60、80和100 mg/mL的棉籽糖標準液,分別取0.2 mL不同濃度的標準液,加入0.1 mL濃度為50 mg/mL的苯酚溶液,再加入5 mL 的濃硫酸,100 ℃水浴加熱3 min后在490 nm處測定吸光度,通過吸光度和棉籽糖含量繪制標準曲線。

將水豆豉乙醇提取物1 g置于10 mL容量瓶中用混合展開劑(v/v/v,乙腈∶冰乙酸∶水=6∶3∶2)定容,取5 μL乙醇提取物溶液在薄層板(110 ℃活化1 h)上進行條帶長為3 cm的點樣。將此薄層板放置于層析缸中展開(25 ℃恒溫,6 h),噴上顯色劑(苯胺-二苯胺-磷酸)顯色(85 ℃,15 min)。收集1.5 cm×4.0 cm的棉籽糖的條帶區(qū)域加3 mL的80%乙醇(v/v),超聲提取20 min后在4500 r/min轉速下離心20 min,取上清液重復棉籽糖標準曲線測定方法測定吸光度值,計算棉籽糖含量[16]。

1.2.4 MTT法測定癌細胞增殖 將HT-29和HCT-116結腸癌細胞接種于RPMI1640液體培養(yǎng)液(含10%滅活小牛血清)中,在CO2培養(yǎng)箱中進行貼壁培養(yǎng),每2 d更換一次培養(yǎng)基。培養(yǎng)一周后,用0.05% Trypsin-EDTA消化貼壁癌細胞,將收集到的癌細胞按濃度1×104個/mL接種于96孔培養(yǎng)板,每孔接種200 μL含癌細胞的液體培養(yǎng)基,繼續(xù)在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后待細胞貼壁后棄去上層液體培養(yǎng)基,然后每孔加入200 μL濃度為2 mg/mL的原料大豆(RS)、玻璃容器發(fā)酵水豆豉(GVFS)和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉(SSVFS)乙醇提取物的液體培養(yǎng)基再培養(yǎng)48 h。最后棄去上層液體培養(yǎng)基后每孔加入質量濃度為5 mg/mL的含MTT試劑的液體培養(yǎng)基200 μL培養(yǎng)培養(yǎng)4 h,棄去上層液體培養(yǎng)基后每孔加入200 μL的DMSO后振蕩30 min,570 nm波長下用酶標儀測定各孔OD值并按公式計算細胞增殖抑制率。抑制率公式(%)=[(空白孔OD值-水豆豉乙醇提取物OD值)/空白孔OD值]×100[17]。

1.2.5 RT-PCR法測定癌細胞凋亡相關表達 用10 cm細胞培養(yǎng)皿按MTT法測定癌細胞增殖同樣培養(yǎng)HT-29和HCT-116結腸癌細胞并用水豆豉乙醇提取物進行處理,培養(yǎng)完成后在4500 r/min下離心分離10 min,除去上層培養(yǎng)液后加入一定量PBS進行洗滌,再在4500 r/min下離心分離10 min后用RNAzol提取各組癌細胞的總RNA,然后將總RNA濃度稀釋到1 μg/μL。在RNA 提取液(2 μL)中按次序分別加入1 μL的OligodT18、RNase、dNTP 、MLV酶和10 μL的5×Buffer,在條件37 ℃ 120 min,99 ℃ 4 min,4 ℃ 3 min合成cDNA。然后以反轉錄-聚合酶鏈反應法擴增Bax、Bcl-2、Bcl-xL、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的mRNA表達,同時以持家基因GAPDH作為內參照按同樣同樣條件進行擴增。最后用含溴化乙錠瓊脂(1%濃度)電泳檢查PCR擴增產物,并用Image 1.44軟件進行半定量分析[3]。

1.3 數據統(tǒng)計

將三組平行實驗結果取平均值,然后使用SAS 9.1統(tǒng)計軟件采用one-way ANOVA方法分析各組數據在p<0.05水平上相互是否具有顯著差異。

2 結果與分析

2.1 玻璃和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉中染料木素含量比較

通過標準品吸光度的測定繪制出染料木素的標準曲線為Y=7.478X+0.141(R2=0.997,Y為染料木素濃度,X為吸光度值)(圖1),對照標準曲線可知未發(fā)酵的大豆(原料大豆)、玻璃容器和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉乙醇提取物中染料木素的濃度分別為0.24、1.21和0.76 mg/g(圖2),大豆原料和不同容器發(fā)酵水豆豉乙醇提取物含有染料木素的含量具有顯著差異(p<0.05)。大豆異黃酮是大豆中重要的生理活性物質,大豆發(fā)酵食品的發(fā)酵過程可使大豆異黃酮轉化成便于人體吸收的游離型大豆異黃酮[18]。染料木素是大豆發(fā)酵食品中重要的游離型大豆異黃酮,研究顯示染料木素對非小細胞型肺癌A549[19]和人宮頸癌Siha細胞[20]具有明顯的凋亡誘導效果,是一種具有較強癌細胞抑制作用的生物活性物質。本研究中發(fā)酵水豆豉乙醇提取物中的染料木素含量大大高于未發(fā)酵的RS,且GVFS乙醇提取物中含有的染料木素顯著高于SSVFS乙醇提取物。由此可以推斷玻璃容器有利于水豆豉發(fā)酵過程中產生更多的染料木素,提高水豆豉的生物活性作用。

圖1 染料木素標準曲線Fig.1 The standard curve of genistein

圖2 水豆豉乙醇提取物中染料木素含量Fig.2 Genistein content of Shuidouchi ethanol extracts注:RS,2 mg/mL原料大豆乙醇提取物;GVFS,2 mg/mL玻璃容器發(fā)酵水豆豉乙醇提取物;SSVFS，2 mg/mL不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉乙醇提取物；不同字母表示各組數據平均值差異顯著(p<0.05),圖4同。

2.2 玻璃和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉中棉籽糖含量比較

通過標準品吸光度的測定繪制出棉籽糖的標準曲線為Y=82.71X+2.163(R2=0.998,Y為棉籽糖濃度,X為吸光度值)(圖3),對照標準曲線可知未發(fā)酵的大豆(原料大豆)、玻璃容器和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉乙醇提取物中棉籽糖的濃度分別為126.4、202.3和177.6 mg/g(圖4),各組棉籽糖的含量具有顯著差異(p<0.05)。棉籽糖是優(yōu)良的雙歧桿菌增殖因子,具有很強的結腸保護作用,同時具有一定的癌細胞抑制功效[21]。棉籽糖是大豆低聚糖的重要組成部分,發(fā)酵過程中由于微生物的作用可使大豆發(fā)酵制品中的大豆低聚糖的含量大大提高[22],本研究也得到了相同的結果,發(fā)酵過程使水豆豉比原料大豆含有更多的棉籽糖,且玻璃容器更有利于棉籽糖的產生,使發(fā)酵的水豆豉具有更多的活性成分。

圖3 棉籽糖標準曲線Fig.3 The standard curve of raffinose

圖4 水豆豉乙醇提取物中棉籽糖含量Fig.4 Raffinose content of Shuidouchi ethanol extracts

2.3 玻璃和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉對結腸癌細胞增殖的影響比較

由表1可知,相同濃度染料木素、棉籽糖、RS、GVFS和SSVFS乙醇提取物處理HT-29和HCT-116結腸癌細胞后,癌細胞的OD570值較未處理的癌細胞顯著下降(p<0.05),染料木素表現出最強對結腸癌體外增殖抑制效果,GVFS的癌細胞體外增殖抑制效果僅次于染料木素,顯著高于棉籽糖、SSVFS和RS(p<0.05)。運用MTT法可以測定食品對癌細胞的增長抑制效果,從而判斷食品的生物活性作用,是一種常用的檢測方法[17],本研究也運用該方法得出發(fā)酵后的大豆制品(水豆豉)比原料大豆具有更好的結腸癌增殖抑制效果,玻璃容器發(fā)酵水豆豉(GVFS)比不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉(SSVFS)具有更強的結腸癌增殖抑制效果,且GVFS提取物的作用低于最主要的活性成分染料木素,高于活性成分棉籽糖,由此也證明水豆豉中的染料木素和棉籽糖均起到很強的抗癌作用。

表1 水豆豉乙醇提取物對HT-29和HCT-116結腸癌細胞的體外增殖抑制效果Table 1 In vitro proliferation inhibitory effects of Shuidouchi ethanol extracts in HT-29 and HCT-116 colon cancer cells

注：同列不同小寫字母代表差異顯著(p<0.05);表2、表3同。

圖5 水豆豉乙醇提取物對結腸癌細胞Bax、Bcl-2和Bcl-xL mRNA表達的作用Fig.5 Effects of Bax,Bcl-2 and Bcl-xL mRNA of Shuidouchi ethanol extracts in colon cancer cells注:A:HT-29細胞;B:HCT-116細胞。

2.4 玻璃和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉對結腸癌細胞Bcl-2家族mRNA表達的影響比較

通過RT-PCR分析可知,大豆和水豆豉處理HT-29和HCT-116結腸癌細胞相對未經處理的癌細胞均具有較高的Bax mRNA表達和較低的Bcl-2、Bcl-xL表達(圖5、表2)。并且GVFS組癌細胞的Bax表達顯著(p<0.05)強于其他組癌細胞,同時GVFS組癌細胞的Bcl-2、Bcl-xL表達則顯著(p<0.05)弱于其他癌細胞。Bcl-2是一種重要的原癌基因,與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有重要的聯(lián)系;同時Bcl-2可抑制癌細胞凋亡,促進腫瘤的發(fā)展,而Bcl-2蛋白家族中的Bcl-xL能起到和Bcl-2一樣的抑制癌細胞凋亡的作用[15]。Bcl-2家族中另一類促進癌細胞凋亡的基因代表就是Bax,Bcl-2能與Bax形成二聚體,當Bax的量高于Bcl-2時,Bax與Bcl-2形成更多的二聚體,抑制Bcl-2作用,從而促進癌細胞凋亡,導致癌細胞死亡[23]。本研究的結果顯示，玻璃容器發(fā)酵水豆豉比不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉更顯著的上調Bax表達和下調Bcl-2、Bcl-xL,從而更好地起到誘導結腸癌細胞的作用,具有更好的體外抗癌功效。

表2 水豆豉乙醇提取物對HT-29和HCT-116結腸癌細胞Bax、Bcl-2和Bcl-xL mRNA表達的半定量分析Table 2 Semi-quantitative analysis of Bax,Bcl-2 and Bcl-xL mRNA of Shuidouchi ethanol extracts in HT-29 and HCT-116 colon cancer cells

表3 水豆豉乙醇提取物對HT-29和HCT-116結腸癌細胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表達的半定量分析Table 3 Semi-quantitative analysis of Caspase-3,Caspase-8 and Caspase-9 mRNA of Shuidouchi ethanol extracts in HT-29 and HCT-116 colon cancer cells

圖6 水豆豉乙醇提取物對結腸癌細胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表達的作用Fig.6 Effects of Caspase-3,Caspase-8 and Caspase-9 mRNA of Shuidouchi ethanol extracts in colon cancer cells 注:A:HT-29細胞;B:HCT-116細胞。

2.5 玻璃和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉對結腸癌細胞Caspase家族mRNA表達的影響比較

由圖6和表3可知,相對了未經樣品處理的對照組HT-29和HCT-116結腸癌細胞,GVFS最大程度的上調了Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表達,GVFS組癌細胞的以上表達顯著強于SSVFS組和RS組HT-29和HCT-116結腸癌細胞(p<0.05)。Caspase家族基因可以對某些促癌蛋白質進行切割,促進癌細胞的凋亡,Caspase-9作為凋亡過程中的上游啟動性半胱天冬酶,Caspase-9表達的加強能加強對下游 Caspase-3半胱天冬酶的刺激,從而使Caspase-3降解細胞內的結構和功能蛋白,誘導癌細胞凋亡的發(fā)生[24]。而Caspase-8作為外源性凋亡途徑的執(zhí)行者,能夠促進癌細胞的凋亡,引發(fā)癌細胞死亡,起到抗癌的作用[25]。水豆豉乙醇提取物表現出上調癌細胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表達的作用,而玻璃容器發(fā)酵的水豆豉起到了更強的上調作用,具有更好結腸癌體外抑制作用。

3 結論

對玻璃容器和不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉的體外結腸癌細胞凋亡誘導效果進行了比較。發(fā)現玻璃容器發(fā)酵水豆豉的染料木素和棉籽糖含量均高于不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉,兩種水豆豉對HT-29和HCT-116結腸癌細胞的生長抑制效果均大大強于未發(fā)酵的原料大豆,且玻璃容器發(fā)酵水豆豉的癌細胞生長抑制效果高于不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉。進一步的實驗結果證明玻璃容器發(fā)酵水豆豉能夠上調結腸癌細胞的Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表達和下調Bcl-2、Bcl-xL表達,且效果強于不銹鋼容器發(fā)酵水豆豉。由此可見,在水豆豉的發(fā)酵工藝中,選擇玻璃容器進行發(fā)酵可更好地提高水豆豉中的勝利活性成分,起到更好的結腸癌抑制功效。

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Invitroapoptosis inducing effects comparison of ethanol extracts ofglass and stainless steel vessels fermented Shuidouchi in colon cancer cells

ZHAO Xin1,2,3,4,YI Ruo-kun1,2,3,4,QIAN Yu1,2,3,4,*

(1.Chongqing Collaborative Innovation Center for Functional Food,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China;2.Chongqing Engineering Research Center of Functional Food,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China;3.Chongqing Engineering Laboratory for Research and Development of Functional Food,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China;4.Department of Biological and Chemical Engineering,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China)

Theinvitrocolon cancer cells inhibitory effects of glass and stainless steel vessels fermented Shuidouchi were determined in this study. Two kinds of Shuidouchi ethanol extracts contained more genistein and raffinose than raw soybean ethanol extract(RS),genistein and raffinose contents of glass vessel fermented Shuidouchi ethanol extract(GVFS)were higher than stainless steel vessels fermented Shuidouchi ethanol extract(SSVFS). GVFS had the strongest colon cancer cells inhibitory effects,and the colon cancer cells inhibitory effects of SSVFS were higher than RS by the experiments ofinvitrocultured HT-29 and HCT-116 colon cancer cells. The results of further RT-PCR experiment also showed that GVFS,SSVFS and RS could raise Bax,Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9 mRNA expressions of colon cancer,and reduce Bcl-2,Bcl-xL expressions,the effects of GVFS were stronger than SSVFS and RS. From the results,GVFS contained highest genistein and raffinose contents,and GVFS had highest cancer cells inhibitory effects and apoptosis inducing effects,glass vessel could be used for high physiological activities Shuidouchi fermentation.

Shuidouchi;vessel;colon cancer;apoptosis;expression

2016-11-28

趙欣(1981-)，男，博士，教授，研究方向：食品營養(yǎng)和功能性食品，E-mail:zhaoxin@cque.edu.cn。

*通訊作者:騫宇(1976-)，女，博士，副教授，研究方向：食品營養(yǎng)和功能性食品，E-mail:qianyubaby@126.com。

重慶高校創(chuàng)新團隊建設計劃資助項目(CXTD201601040)；重慶市工程技術研究中心建設項目(cstc2015yfpt_gcjsyjzx0027)。

TS201.4

A

1002-0306(2017)10-0345-06

10.13386/j.issn1002-0306.2017.10.058