LXR異常激活上調(diào)p27蛋白致胰島β細(xì)胞周期阻滯*

毛旭華，湯俊明，喬國洪，馮斯依，韓曉，井昶雯

(1.宜興市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇宜興 214200；2.南京醫(yī)科大學(xué)人類功能基因組實(shí)驗(yàn)室，南京 211166； 3.南京醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，江蘇省腫瘤防治研究所，江蘇省腫瘤醫(yī)院臨床腫瘤實(shí)驗(yàn)中心，南京 210009)

·調(diào)查研究·

LXR異常激活上調(diào)p27蛋白致胰島β細(xì)胞周期阻滯*

毛旭華1，湯俊明1，喬國洪1，馮斯依1，韓曉2，井昶雯3

(1.宜興市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇宜興 214200；2.南京醫(yī)科大學(xué)人類功能基因組實(shí)驗(yàn)室，南京 211166； 3.南京醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，江蘇省腫瘤防治研究所，江蘇省腫瘤醫(yī)院臨床腫瘤實(shí)驗(yàn)中心，南京 210009)

目的 探討肝X受體(liver X receptors, LXR)激動(dòng)劑對小鼠胰島β細(xì)胞系MIN6的作用。方法 LXR激動(dòng)劑T0901317作用于MIN6細(xì)胞后，CCK-8法檢測細(xì)胞活力；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期變化；實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測S期激酶相關(guān)蛋白2(Skp2)和p27 mRNA的表達(dá)水平；western blot檢測Skp2和p27蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 與control組相比，1、5和10 μmol/L藥物處理后的細(xì)胞存活率分別為(98.54±0.94)%、(87.03±0.93)%和(75.57±1.85)%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=301.90,P<0.01)。與control組G1期(35.93±2.25)%和S期(52.87±1.19)%相比，1、5和10 μmol/L藥物處理組G1期細(xì)胞比例分別為(38.45±0.91)%、(45.46±1.34)%和(53.28±1.14)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=80.83,P<0.01)。S期細(xì)胞比例分別為(48.65±0.85)%、(36.31±1.37)%和(31.45±1.22)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=221.30,P<0.01)。10 μmol/L T0901317處理組p27蛋白表達(dá)水平(2.84±0.14)明顯高于control 組 (2.28±0.10)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.54,P<0.05)。但兩組間p27 mRNA 水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.28,P>0.05)。10 μmol/L T0901317下調(diào)Skp2 mRNA(0.52±0.02,t=29.22,P<0.01)和蛋白質(zhì)水平(相對灰度值為0.98±0.12，control 組為1.89±0.01，t=10.98,P<0.01)。以對照組(100%)為參照，轉(zhuǎn)染組、藥物處理組和干擾組的細(xì)胞存活率分別為(100.97±1.08)%、(75.03±1.83)%和(86.67±2.45)%，與對照組比較，轉(zhuǎn)染組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.542,P>0.05),藥物處理組細(xì)胞活力下降(t=23.58,P<0.01)；藥物處理組和干擾組間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.77,P<0.01)。結(jié)論 LXR異常激活可導(dǎo)致胰島β細(xì)胞增殖抑制，p27蛋白表達(dá)量增加，其機(jī)制可能為降解調(diào)控p27蛋白的Skp2 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平下降。

2型糖尿??；肝X受體激動(dòng)劑；p27；S期激酶相關(guān)蛋白2；細(xì)胞周期阻滯

肝X受體(liver X receptors, LXR) 是調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、細(xì)胞增殖和凋亡的重要核受體家族成員。多項(xiàng)研究表明，LXR異常激活能抑制多種腫瘤(如卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌等)的細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[1-2]。本研究旨在用LXR激動(dòng)劑T0901317刺激小鼠胰島β細(xì)胞系MIN6，通過CCK-8法和流式細(xì)胞儀檢測其細(xì)胞活力和細(xì)胞周期改變，分析LXR異常激活對胰島β細(xì)胞活力的影響；并通過檢測Skp2、p27 mRNA和蛋白質(zhì)水平，探討其主要的分子作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞系、主要試劑和儀器 小鼠胰島β細(xì)胞系MIN6購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫;p27小干擾片段購自廣州銳博公司；胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基(美國Gibco公司);LXR激動(dòng)劑T0901317(美國Cayman Chemical公司)；Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑、Trizol試劑(美國Invitrogen公司)；RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本ToYoBo公司); 細(xì)胞蛋白裂解液RIPA(美國Biomiga公司);蛋白酶抑制劑PMSF(美國CST公司);曝光液、PVDF膜(德國Millipore公司)，BCA法蛋白質(zhì)提取試劑盒(碧云天公司)；兔抗人p27、Skp2多克隆抗體(美國Santa Cruz公司);兔抗人β-actin多克隆抗體(美國Sigma公司)，辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔及抗鼠IgG(美國Amersham Pharmacia公司)；活細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(日本株式會社同仁化學(xué)研究所)。CO2培養(yǎng)箱和生物安全柜(美國Thermo公司)；酶聯(lián)儀(美國Biotek公司)；BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀(美國BD公司)；ABI 7300熒光定量PCR儀(美國ABI公司)；NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)(美國Thermo Scientific公司)；蛋白質(zhì)電泳儀(美國Bio-Rad公司)，光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司)。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng) 取生長狀態(tài)良好的MIN6細(xì)胞，貼壁生長于含50 μmol/L、β-巰基乙醇、25 mmol/L葡萄糖、100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素和15%胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)液中。置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)傳代培養(yǎng)。

1.3 CCK-8法測定細(xì)胞存活率 取對數(shù)生長期的MIN6細(xì)胞，經(jīng)胰蛋白酶-EDTA消化液(含2.5 g/L胰蛋白酶+0.53 mmol/L EDTA)消化成單細(xì)胞懸液，以1×105/mL的細(xì)胞密度接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔接種100 μL。細(xì)胞貼壁后，分別加入不同濃度的T0901317(1、5、10 μmol/L)，每個(gè)濃度設(shè)4個(gè)復(fù)孔。同時(shí)設(shè)立正常對照組(僅加細(xì)胞)及空白調(diào)零組(僅加培養(yǎng)液)。培養(yǎng)48 h后去除孔內(nèi)培養(yǎng)液，加入100 μL培養(yǎng)基和10 μL CCK-8混合液繼續(xù)溫育1 h后置于酶聯(lián)儀中以490 nm波長測定各孔吸光度(A490 nm)值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，細(xì)胞存活率=(1-實(shí)驗(yàn)組A490 nm值/對照組A490 nm值)×100%。

1.4 流式細(xì)胞儀(FCM)檢測細(xì)胞周期 取上述MIN6細(xì)胞，以5×105/孔的細(xì)胞密度接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。細(xì)胞貼壁后加入不同濃度(0、1、5、10 μmol/L)的T0901317，常規(guī)培養(yǎng)48 h后，棄去培養(yǎng)液，經(jīng)2.5 g/L胰蛋白酶消化后，制成單細(xì)胞懸液(加入PBS振蕩后以1 400 r/min，離心7 min，棄上清液)，再經(jīng)預(yù)冷的PBS洗滌2次，加入75%乙醇1 mL，-20 ℃固定過夜；次日，室溫300 r/min離心6 min；棄上清，加入1 mL PBS重懸細(xì)胞沉淀；室溫300 r/min離心6 min；棄上清，各管加入500 μL碘化丙啶(PI)染液(50 μg/mL PI和含25 μg/mL RNA酶的PBS)重懸細(xì)胞沉淀，室溫、避光溫育30 min；然后上機(jī)檢測。收集20 000個(gè)細(xì)胞的熒光信號。結(jié)果用ModFIT高精度DNA自動(dòng)分析軟件分析。

1.5 總RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 取上述MIN6細(xì)胞，以5×105/孔的細(xì)胞密度接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，實(shí)驗(yàn)分為2個(gè)組：control組(即不加藥組)和T0901317處理組(10 μmol/L)。常規(guī)培養(yǎng)48 h后收集細(xì)胞，用Trizol試劑提取總RNA，并按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，樣本置-20 ℃保存。

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測 從GenBank中檢索p27、Skp2及β-actin的基因序列(序列號分別為NM_009875、NM_013787、NM_007393)，用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物序列，并經(jīng)BLAST分析，確定其特異性,所有引物均由上海生工公司合成。p27上游引物序列(5′→3′)：GGCCCGGTCAATCATG

AA；下游引物序列(5′→3′)：CATATCCCGGCAGTGC

TTCT。Skp2上游引物序列(5′→3′)：AGCCGCTGGG

TGAAAGC；下游引物序列(5′→3′)：TCACTGAGTTC

GACAGGTCCAT。β-actin上游引物序列(5′→3′)：AGGCCAACCGTGAAAAGATG；下游引物序列(5′→3′)：AGAGCATAGCCCTCGTAGATGG。PCR總反應(yīng)體系為20 μL，包括10 μmol/L上、下游引物各1 μL，10 μmol/L dNTPs 4 μL,10×PCR buffer 1 μL，模板DNA 1 μL，無菌ddH2O補(bǔ)足體積。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 31 s，共40個(gè)循環(huán)。結(jié)果以2-ΔΔCt法計(jì)算，公式:-ΔΔCt=[(實(shí)驗(yàn)組Ct目的基因-實(shí)驗(yàn)組Ct內(nèi)參基因)- (對照組Ct目的基因-對照組Ct內(nèi)參基因)]。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.7 western blot 取上述MIN6細(xì)胞，以5×105/孔的細(xì)胞密度接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。實(shí)驗(yàn)分為2個(gè)組：control 組(即不加藥組)和T0901317處理組(10 μmol/L)。常規(guī)培養(yǎng)48 h后收集細(xì)胞，RIPA蛋白裂解液裂解細(xì)胞并抽提蛋白質(zhì)，BCA法測定蛋白質(zhì)濃度。配制12% SDS-PAGE分離膠，將上述蛋白質(zhì)樣品變性后按50 μg總蛋白質(zhì)量進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳(積層膠采用80 V電壓，分離膠采用100 V電壓)。電泳結(jié)束后在250 mA恒流條件下90 min將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，轉(zhuǎn)膜結(jié)束后將膜置于50 g/L脫脂牛奶中室溫封閉1 h，以封閉膜上的非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn)；加入兔抗人p27抗體(1∶800稀釋)、兔抗人Skp2抗體(1∶600稀釋)及兔抗人β-actin抗體(1∶4 000稀釋)，4 ℃溫育過夜。TBST洗膜3次，加入HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG、羊抗鼠IgG(1∶4 000稀釋)37 ℃溫育1 h；TBST洗膜3次；曝光并采用Image J 4.1軟件對條帶進(jìn)行灰度掃描進(jìn)行結(jié)果判讀，試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 取上述MIN6細(xì)胞，以5×105/孔的細(xì)胞密度接種于6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。常規(guī)培養(yǎng)16～24 h后進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。脂質(zhì)體混合液體系及反應(yīng)條件:Lipofectamine 2000試劑5 μL、無血清培養(yǎng)基245 μL。將混合液體系室溫溫育5 min。寡核苷酸片段混合液轉(zhuǎn)染體系及反應(yīng)條件:50 nmol/L p27 siRNA 5 μL、無血清培養(yǎng)基245 μL；將250 μL脂質(zhì)體混合液加入250 μL寡核苷酸片段混合液中，輕輕混勻，室溫靜置20 min。實(shí)驗(yàn)分為4個(gè)組：對照組(control siRNA 轉(zhuǎn)染且未加藥物刺激組)、轉(zhuǎn)染組(p27 siRNA轉(zhuǎn)染且未加藥物刺激組)、藥物處理組(control siRNA 轉(zhuǎn)染后予以10 μmol/L T0901317刺激48 h)和干擾組(p27 siRNA轉(zhuǎn)染后予以T0901317刺激48 h)。轉(zhuǎn)染步驟：用1.5 mL含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞換液，再將脂質(zhì)體混合液體系或寡核苷酸片段混合液轉(zhuǎn)染體系加入6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，輕輕混勻，轉(zhuǎn)染4～8 h 后棄去孔內(nèi)液體，更換為含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)24 h，根據(jù)分組加入相應(yīng)試劑轉(zhuǎn)染48 h，收集細(xì)胞用于CCK-8法檢測。

2 結(jié)果

2.1 CCK-8法檢測細(xì)胞活力 以0 μmol/L(control組)細(xì)胞活力(100%)相比，1、5和10 μmol/L藥物處理后的細(xì)胞存活率分別為(98.54±0.94)%、(87.03±0.93)%和(75.57±1.85)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=301.90,P<0.01)。組間兩兩比較結(jié)果表明，與control組相比，1 μmol/L組細(xì)胞活力差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=2.21，P>0.05)，而5和10 μmol/L組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q分別為19.77和37.24，P均<0.01)。

2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期 control組、1、5和10 μmol/L組間G1期細(xì)胞比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=80.83,P<0.01)，4組間S期細(xì)胞比例差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=221.30,P<0.01)。見表1。

表1 流式細(xì)胞術(shù)檢測的細(xì)胞周期結(jié)果

注：與G1期control組相比，*,P<0.01；與S期control組相比，#，P<0.01。

2.3 實(shí)時(shí)定量PCR檢測p27和Skp2 mRNA的表達(dá)水平 與control組相比，10 μmol/L T0901317處理組的p27 mRNA表達(dá)水平為0.99±0.02，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.28,P>0.05)，而Skp2 mRNA表達(dá)水平為(0.52±0.02)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=29.22,P<0.01)。

2.4 實(shí)時(shí)定量PCR法檢測p27小干擾片段的干擾效率 與對照組(control siRNA)相比，p27 siRNA轉(zhuǎn)染組的p27的表達(dá)水平(0.40±0.02)明顯下調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=52.38,P<0.01)。

2.5 western blot檢測p27和Skp2蛋白的表達(dá) 與control組(p27蛋白相對灰度值為2.28±0.10，Skp2蛋白為1.89±0.01)相比，T0901317處理組p27蛋白相對灰度值為2.84±0.14，Skp2蛋白相對灰度值為0.98±0.12，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.54,P<0.05，t=10.98,P<0.01)。見圖1。

圖1 western blot檢測p27蛋白、Skp2蛋白的表達(dá)

2.6 CCK-8法檢測p27干擾后胰島β細(xì)胞活力的變化 以對照組(100%)為參照，轉(zhuǎn)染組、藥物處理組和干擾組的細(xì)胞存活率分別為(100.97±1.08)%、(75.03±1.83)%和(86.67±2.45)%。與對照組比較，轉(zhuǎn)染組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.542,P>0.05)，但藥物處理組細(xì)胞活力下降(t=23.58,P<0.01)。此外，藥物處理組和干擾組間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.77,P<0.01)。

3 討論

本研究從LXR激動(dòng)劑對胰島β細(xì)胞增殖的作用方面探討LXR異常激活與糖尿病的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LXR的異常激活并未引起胰島β細(xì)胞明顯的凋亡，卻導(dǎo)致細(xì)胞G1/S周期阻滯。推測原因可能為在2型糖尿病發(fā)生、發(fā)展過程中，不斷升高的血糖、血脂作為LXR內(nèi)源性的激動(dòng)劑，持續(xù)激活LXR，導(dǎo)致胰島β細(xì)胞增殖抑制，胰島β細(xì)胞逐漸失代償性減少，導(dǎo)致細(xì)胞功能衰竭，最終發(fā)展為糖尿病。

G1/S期是細(xì)胞周期的主要限制點(diǎn)。正向調(diào)控因子—細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(cyclin-CDK)可促進(jìn)細(xì)胞通過調(diào)定點(diǎn)，而細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑(CDKI)通過抑制CDK阻斷細(xì)胞周期的進(jìn)程，負(fù)向調(diào)控細(xì)胞周期。p27蛋白是CDKI的重要成員，通過抑制cyclin-CDK阻滯細(xì)胞周期，進(jìn)而阻止腫瘤形成。本研究結(jié)果顯示，LXR異常激活可以誘導(dǎo)p27蛋白質(zhì)水平增高。為了進(jìn)一步驗(yàn)證p27在LXR介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞周期阻滯中的作用，我們合成了p27的干擾片段。通過細(xì)胞活力分析結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染組與對照組間差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明在沒有藥物處理的情況下，p27 siRNA對細(xì)胞活力并無影響。LXR異常激活抑制胰島β細(xì)胞增殖，T0901317藥物處理組相較于對照組細(xì)胞活力下降。而藥物處理組和干擾組間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明干擾p27的表達(dá)后再予以藥物刺激，胰島β細(xì)胞的活力得到部分的恢復(fù)。提示p27在LXR介導(dǎo)的G1/S周期阻滯中起了重要作用。但T0901317處理并未改變p27 mRNA水平，推測其可能是通過轉(zhuǎn)錄后作用而非轉(zhuǎn)錄作用增加p27蛋白的表達(dá)量。

Skp2作為泛素化-蛋白酶體系統(tǒng)成員，與細(xì)胞周期調(diào)控及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)[3-4]。Skp2可作為人胃癌的原癌基因，抑制Skp2的表達(dá)并可上調(diào)p27的水平，從而抑制胃癌細(xì)胞的增殖和腫瘤形成[3]。另有研究表明，苦參堿提取物YF-18通過下調(diào)Skp2水平，上調(diào)p27的表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞G2/M周期阻滯，抑制細(xì)胞增殖和遷移[5]。本研究檢測了在p27轉(zhuǎn)錄后修飾中起重要作用的Skp2的表達(dá)水平。結(jié)果顯示T0901317 可同時(shí)下調(diào)Skp2 mRNA和蛋白質(zhì)水平，提示Skp2可能是LXR誘導(dǎo)的p27蛋白表達(dá)水平上調(diào)的關(guān)鍵分子。但LXR調(diào)控Skp2影響p27水平的具體分子生物學(xué)機(jī)制尚不明確，尚待后續(xù)深入研究。

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(本文編輯：許曉蒙)

Activation of liver X receptors induced pancreatic β cell cycle arrest by up-regulating the expression of p27 protein

MAOXu-hua1,TANGJun-ming1,QIAOGuo-hong1,FENGSi-yi1,HANXiao2,JINGChang-wen3

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,YixingPeople′sHospital,Yixing214200,Jiangsu; 2.HumanFunctionalGenomicsLaboratory,NanjingMedicalUniversity,Nanjing211166,Jiangsu; 3.ClinicalCancerResearchCenter,CancerInstituteofJiangsuProvince,CancerHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,JiangsuCancerHospital,Nanjing210009,Jiangsu,China)

Objective To investigate the effects of liver X receptor (LXR) agonist on the proliferation of mouse pancreatic β cell line MIN6 cells. Methods The viability, changes of cell cycle, mRNA levels of S phase kinase associated protein 2 (Skp2) and p27, and protein levels of Skp2 and p27 in MIN6 cells treated with LXR agonist T0901317 were determined by the CCK-8 method, flow cytometry, real-time RT-PCR and western blot, respectively. Results The viability of MIN6 cells treated with 1 μmol/L, 5 μmol/L and 10 μmol/L of T0901317 were (98.54±0.94)%, (87.03±0.93)% and (75.57±1.85)% of the controls, respectively, and there was significant difference among them (F=301.90,P<0.01). The percentages of G1phase cells in the MIN6 cells treated with 0 μmol/L, 1 μmol/L, 5 μmol/L and 10 μmol/L of T0901317 were (35.93±2.25)%, (38.45±0.91)%, (45.46±1.34)% and (53.28±1.14)%, respectively, and there was significant difference among them (F=80.83,P<0.01). Similarly, the percentages of S phase cells in the MIN6 cells treated with 0 μmol/L, 1 μmol/L, 5 μmol/L and 10 μmol/L of T0901317 were (52.87±1.19)%, (48.65±0.85)%, (36.31±1.37)% and (31.45±1.22)%, respectively, and there was also significant difference among them (F=221.30,P<0.01). The protein levels of p27 in the MIN6 cells treated with 10 μmol/L of T0901317 (2.84±0.14) were significantly higher than that in the controls (2.28±0.10) (t=4.54,P<0.05), while there was no significant difference in the mRNA levels of p27 between them (t=0.28,P>0.05). However, 10 μmol/L of T0901317 significantly decreased mRNA (0.52±0.02,t=29.22,P<0.01) and protein levels (0.98±0.12 vs 1.89±0.01,t=10.98,P<0.01) of Skp2 in MIN6 cells. Based on the control siRNA transfection group as a reference (100%), the cell survival rates of the p27 siRNA transfection group, 10 μmol/L of T0901317 treatment group and the intervention group (p27 siRNA transfection+T0901317 treatment) were (100.97±1.08)%, (75.03±1.83)% and (86.67±2.45)%, respectively. There was no significant difference between the control siRNA and p27 siRNA transfection groups (t=1.542,P>0.05). Compared with the control siRNA transfection group, the cell survival rates of the T0901317 treatment group decreased (t=23.58,P<0.01). There was also significant difference in the cell survival rates between the T0901317 treatment group and the intervention group (t=7.77,P<0.01). Conclusion The activation of LXR may induce pancreatic β cell cycle arrest by up-regulating the expression of p27 and down-regulating the expression of Skp2.

type 2 diabetes; liver X receptor agonist; p27; S phase kinase associated protein 2; cell cycle arrest

10.13602/j.cnki.jcls.2017.05.18

江蘇省衛(wèi)生計(jì)生委科研項(xiàng)目(Z201602)。

毛旭華，1985年生，男，主管技師，碩士，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與分子生物學(xué)研究。

井昶雯，助理研究員，E-mail:jcw223200@163.com。

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2017-02-28)