葉酸對(duì)不良妊娠結(jié)局孕鼠脂質(zhì)代謝的影響*

吳淑嫻 宣佳利

(安徽人口職業(yè)學(xué)院，安徽 池州 247100)

葉酸對(duì)不良妊娠結(jié)局孕鼠脂質(zhì)代謝的影響*

吳淑嫻 宣佳利

(安徽人口職業(yè)學(xué)院，安徽 池州 247100)

目的 旨在探討葉酸對(duì)不良妊娠結(jié)局孕鼠脂質(zhì)代謝的影響作用。方法 選取80只清潔級(jí)ICR小鼠建立不良妊娠孕鼠模型。80只孕鼠被隨機(jī)分成4組，對(duì)照組20只(等劑量生理鹽水灌胃)，模型組16只(腹腔注射細(xì)菌脂多糖20 μg/kg·d)，葉酸干預(yù)A組20只(腹腔注射葉酸20 mg/kg·d，1 h后腹腔注射菌脂多糖20 μg/kg·d)，葉酸干預(yù)B組20只(腹腔注射葉酸25 mg/kg·d，腹腔注射菌脂多糖20 μg/kg·d)，干預(yù)14 d后，斷頸處死孕鼠開腹，記錄各組孕鼠吸收胎數(shù)、死胎數(shù)和活胎數(shù)，稱量活胎體重及活胎胎盤重量。測(cè)定和比較4組孕鼠TC、TG、LDL-C和HDL-C表達(dá)；測(cè)定和比較4組孕鼠ApoA1和ApoB表達(dá)。結(jié)果 葉酸干預(yù)組和對(duì)照組孕鼠吸收胎數(shù)和死胎數(shù)均顯著低于模型組孕鼠(P<0.01)，活胎體重和活胎胎盤重量均顯著高于模型組孕鼠(P<0.01)。葉酸干預(yù)B組孕鼠妊娠情況優(yōu)于葉酸干預(yù)A組。葉酸干預(yù)組和對(duì)照組孕鼠TC、TG和LDL-C表達(dá)均顯著低于模型組孕鼠(P<0.05)，HDL-C高于模型組孕鼠(P<0.05)。葉酸干預(yù)B組LDL-C表達(dá)顯著低于葉酸干預(yù)A組(P<0.05)。葉酸干預(yù)組和對(duì)照組孕鼠ApoA1表達(dá)均顯著高于模型組孕鼠(P<0.05)，ApoB表達(dá)顯著低于模型組孕鼠(P<0.01)。葉酸干預(yù)B組ApoA1表達(dá)高于葉酸干預(yù)A組，ApoB表達(dá)低于葉酸干預(yù)A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 孕期葉酸補(bǔ)充可以降低孕鼠不良妊娠結(jié)果和改善不良妊娠孕鼠脂代謝功能。

葉酸；不良妊娠；孕鼠；脂質(zhì)代謝

脂代謝功能障礙可致產(chǎn)婦體重上升，影響胎兒發(fā)育甚至導(dǎo)致死胎，從而提高不良妊娠發(fā)生率[1]。研究表明[2]，葉酸不足可致機(jī)體內(nèi)同型半胱氨酸表達(dá)下降，造成胎盤早剝及先兆子癇等妊娠期產(chǎn)婦危重癥，甚至引發(fā)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。報(bào)道還顯示[3]，葉酸通過(guò)調(diào)節(jié)SREBP-1c、 ACC和FAS等基因表達(dá)，引導(dǎo)脂肪生成相關(guān)酶基因轉(zhuǎn)錄并調(diào)控此類酶活性，影響脂肪合成及代謝?；诖?，本研究選取80只清潔級(jí)ICR小鼠建立不良妊娠孕鼠模型，采取人工注射葉酸的方式干預(yù)孕鼠妊娠，從而有效糾正不良妊娠發(fā)生及促使脂質(zhì)代謝路徑恢復(fù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物來(lái)源 80只清潔級(jí)ICR小鼠購(gòu)自北京金牧陽(yáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖有限責(zé)任公司，動(dòng)物證號(hào)：SYXK(京)2015-0008，雌鼠40只，體質(zhì)量28～32 g，雄鼠40只，體質(zhì)量34～38 g，周齡7～10周。

1.2 孕鼠模型建立 交配時(shí)，雌鼠和雄鼠2∶1于夜9:00同籠，次日晨7:00檢查到陰栓雌鼠定為受孕第0 d。經(jīng)檢查全部雌鼠受孕，置于恒溫25 ℃、凈化及通風(fēng)良好鼠舍內(nèi)自由進(jìn)食和飲水，喂養(yǎng)7 d后均存活。

1.3 孕鼠分組及給藥方式 80只孕鼠被隨機(jī)分成4組，對(duì)照組20只(等劑量生理鹽水灌胃)，模型組16只(腹腔注射細(xì)菌脂多糖20 μg/kg·d)，葉酸干預(yù)A組20只(腹腔注射葉酸20 mg/kg·d，1 h后腹腔注射菌脂多糖20 μg/kg·d)，葉酸干預(yù)B組20只(腹腔注射葉酸25 mg/kg·d)，腹腔注射菌脂多糖20 μg/kg·d)，干預(yù)14 d后，斷頸處死孕鼠開腹，記錄各組孕鼠吸收胎數(shù)、死胎數(shù)和活胎數(shù)，稱量活胎體重及活胎胎盤重量。

1.4 血脂相關(guān)指標(biāo)測(cè)定 各組孕鼠處死前，抽取尾部靜脈血5 ml，3200 r/min離心5 min，取上清液，用日立 7600 全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定孕鼠血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)表達(dá)。

1.5 載脂蛋白表達(dá)測(cè)定 孕鼠處死后，取肝臟2 mg粉碎，滴入0.9%氯化鈉注射液后混勻，12000 r/min離心5 min，取上清液BCA法測(cè)定肝臟蛋白濃度，后ELISA法測(cè)定載脂蛋白A1(ApoA1)和載脂蛋白B(ApoB)表達(dá)，操作步驟按照試劑盒說(shuō)明書執(zhí)行，試劑盒均購(gòu)自上海北加生化試劑有限公司，上酶標(biāo)儀讀出ApoA1和ApoB的450nm測(cè)吸光密度(OD)[5]。

1.6 觀察指標(biāo) 記錄和比較4組孕鼠吸收胎數(shù)、死胎數(shù)和活胎體重及活胎胎盤重量；測(cè)定和比較4組孕鼠TC、TG、LDL-C和HDL-C表達(dá)；測(cè)定和比較4組孕鼠ApoA1和ApoB表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1 孕鼠不良妊娠情況 葉酸干預(yù)A組、葉酸干預(yù)B組和對(duì)照組孕鼠吸收胎數(shù)和死胎數(shù)均顯著低于模型組孕鼠(P<0.01)；葉酸干預(yù)A組、葉酸干預(yù)B組和對(duì)照組孕鼠活胎體重和活胎胎盤重量均顯著高于模型組孕鼠(P<0.01)。葉酸干預(yù)B組孕鼠妊娠情況優(yōu)于葉酸干預(yù)A組，其吸收胎數(shù)及死胎數(shù)均顯著低于葉酸干預(yù)A組(P<0.05)。見表1。

表1 各組孕鼠妊娠情況對(duì)比

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與對(duì)照組比較，#P<0.05；與葉酸干預(yù)A組比較，△P<0.05。

2.2 孕鼠血脂指標(biāo)比較 葉酸干預(yù)A組、葉酸干預(yù)B組和對(duì)照組孕鼠TC、TG和LDL-C表達(dá)均顯著低于于模型組孕鼠(P<0.05)，HDL-C高于模型組孕鼠(P<0.05)。葉酸干預(yù)B組TC、TG表達(dá)低于葉酸干預(yù)A組，HDL-C高于葉酸干預(yù)A組，LDL-C表達(dá)顯著低于葉酸干預(yù)A組(P<0.05)。見表2。

表2 孕鼠各項(xiàng)血脂指標(biāo)比較

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與對(duì)照組比較，#P<0.05；與葉酸干預(yù)A組比較，△P<0.05。

2.3 孕鼠血脂蛋白比較 葉酸干預(yù)A組、葉酸干預(yù)B組和對(duì)照組孕鼠ApoA1表達(dá)均顯著高于模型組孕鼠(P<0.05)，ApoB表達(dá)顯著低于模型組孕鼠(P<0.01)。葉酸干預(yù)B組ApoA1表達(dá)高于葉酸干預(yù)A組，ApoB表達(dá)低于葉酸干預(yù)A組，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 孕鼠血脂蛋白對(duì)比±s)

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與對(duì)照組比較，#P<0.05；與葉酸干預(yù)A組比較，△P<0.05。

3 討 論

葉酸屬于機(jī)體主要的B族維生素，具有較強(qiáng)的水溶性[6]，可作為甲基供體參與碳單位循環(huán)，促進(jìn)機(jī)體合成體內(nèi)核酸、調(diào)控DNA甲基化、絲氨酸及甘氨酸生化轉(zhuǎn)化等代謝反應(yīng)[7]。研究表明[8]，葉酸在胚胎發(fā)育中起著重要的維持作用，可促使胚胎細(xì)胞分裂、增殖及分化，故妊娠產(chǎn)婦體內(nèi)葉酸消耗速度較快，從而影響胎兒正常發(fā)育而出現(xiàn)不良妊娠。

報(bào)道稱[9]，通過(guò)對(duì)孕鼠孕早中期人工補(bǔ)充葉酸可降低胎仔神經(jīng)管畸形，降低死胎數(shù)量，保證胎仔正常發(fā)育。本研究中，葉酸干預(yù)組孕鼠吸收胎數(shù)和死胎數(shù)顯著低于模型組孕鼠(P<0.01)，而活胎體重和活胎胎盤重量均顯著高于模型組孕鼠(P<0.01)。這表明孕期補(bǔ)充葉酸能夠降低孕鼠死胎和不良胎數(shù)量，促進(jìn)胎兒發(fā)育，提高新生小鼠重量，有效抑制不良妊娠。研究還發(fā)現(xiàn)葉酸干預(yù)B組孕鼠妊娠情況優(yōu)于葉酸干預(yù)A組，其吸收胎數(shù)及死胎數(shù)均顯著低于葉酸干預(yù)A組(P<0.05)，表明高劑量葉酸對(duì)孕鼠的安胎效果更明顯，筆者推斷葉酸抑制不良妊娠可能存在劑量依賴性，但未設(shè)置更高劑量對(duì)比組，故該結(jié)論需要進(jìn)一步研究補(bǔ)充。

葉酸攜帶活性甲基化基團(tuán)，能夠作為S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成的甲基提供者，促使基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化，調(diào)控肝臟中的脂肪代謝[10]，故葉酸水平可影響孕期產(chǎn)婦肝臟脂肪代謝關(guān)鍵因子的表達(dá)，從而影響脂代謝。在本研究中，葉酸干預(yù)組和對(duì)照組孕鼠TC、TG和LDL-C表達(dá)均顯著低于模型組孕鼠(P<0.05)，HDL-C高于模型組孕鼠(P<0.05)。葉酸干預(yù)B組TC、TG表達(dá)低于葉酸干預(yù)A組，HDL-C高于葉酸干預(yù)A組，LDL-C表達(dá)顯著低于葉酸干預(yù)A組(P<0.05)，這表明注射葉酸可有效補(bǔ)充孕期小鼠葉酸量，調(diào)控甲基代謝，從而促使TC、TG及LDL-C下降和HDL-C上升，影響脂代謝。

ApoA1和ApoB分別是高密度及低密度脂蛋白主要的載脂蛋白，前者表達(dá)下降和后者ApoB表達(dá)升高均是冠心病危險(xiǎn)因素。研究顯示[11]，載脂蛋白作為血清內(nèi)脂蛋白組分，直接參與轉(zhuǎn)運(yùn)、清除和分解血清脂質(zhì)，其表達(dá)則是影響脂代謝紊亂的重要因素。在本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，葉酸干預(yù)組和對(duì)照組孕鼠ApoA1表達(dá)均顯著高于模型組孕鼠(P<0.05)，ApoB表達(dá)顯著低于模型組孕鼠(P<0.01)，表明葉酸干預(yù)可能通過(guò)提升ApoA1表達(dá)和抑制ApoB表達(dá)促使不良妊娠孕鼠肝臟中脂代謝途徑恢復(fù)，從而影響TC、TG、LDL-C和HDL-C表達(dá)。

綜上所述，孕期葉酸補(bǔ)充可以降低孕鼠不良妊娠結(jié)果和改善不良妊娠孕鼠脂代謝功能，為人安全妊娠及生育提供臨床指導(dǎo)。

[1] 王瑾, 蔡艷, 曹魯泉,等. 同型半胱氨酸、葉酸、維生素B12與不良妊娠的相關(guān)性研究[J]. 中國(guó)婦幼保健, 2015, 30(35):6203-6204.

[2] 莊璟怡, 應(yīng)豪, 王德芬. 小劑量鏈脲佐菌素建立妊娠期糖尿病大鼠模型的研究[J]. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展, 2014(8):607-610.

[3] 馬若嘉, 仇小強(qiáng), 詹一科. 維生素E及葉酸對(duì)高血糖孕鼠子代心肌細(xì)胞凋亡的影響[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué), 2015, 42(2).

[4] 閆時(shí), 王晶晶, 宋昭逸,等. 妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕鼠子代膽固醇代謝與胰島素抵抗及相關(guān)基因在肝臟中的表達(dá)[J]. 中國(guó)婦幼保健, 2016, 31(2):386-390.

[5] El-Mani S, Charlton K E, Flood V M, et al. Limited knowledge about folic acid and iodine nutrition in pregnant women reflected in supplementation practices[J]. Nutrition & Dietetics, 2014, 71(4):236-244.

[6] 王亞娟, 張麗勇. 孕鼠宮內(nèi)輕度高糖環(huán)境及出生后高脂飲食對(duì)子鼠體質(zhì)量和脂代謝的影響[J]. 中國(guó)婦幼保健, 2016, 31(1):177-179.

[7] Peters B A, Hall M N, Liu X, et al. Folic Acid and Creatine as Therapeutic Approaches to Lower Blood Arsenic: A Randomized Controlled Trial[J]. Environmental Health Perspectives, 2015, 123(12):1294-1301.

[8] Okoye C N, Ogwu D, Ihedioha J I, et al. Effects of methanolic leaf extract of Telfairia occidentalis (Hook f.) on the reproductive indices of female albino rats[J]. Scientific Journal of Veterinary Advances, 2015, 4:25-31.

[9] Geenes V, Chappell L C, Seed P T, et al. Association of severe intrahepatic cholestasis of pregnancy with adverse pregnancy outcomes: a prospective population-based case-control study[J]. Hepatology, 2014, 59(4):1492-1504.

[10] 嚴(yán)倩, 姜凌, 王文興,等. 孕期個(gè)體化補(bǔ)充葉酸對(duì)母嬰結(jié)局的影響[J]. 山東醫(yī)藥, 2015，38(1):64-65.

[11] 詹一科, 仇小強(qiáng), 馬若嘉. 葉酸對(duì)高血糖孕鼠子代心臟發(fā)育相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J]. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2014，40(7):905-909.

Effect of folic acid on the lipid metabolism in pregnant rats with adverse pregnancy outcome

WU Shu-xian Xuan Jia-Li

(Population in Anhui Vocational College Teaching Assistant, Chizhou 247100,China)

Objective： To investigate the effect of folic acid on the lipid metabolism in pregnant rats with adverse pregnancy outcome. Methods： Eighty clean grade ICR mice were selected to establish the models of pregnant rats with adverse pregnancy. Eighty pregnant rats were randomly divided into 4 groups, 20 rats in the control group (normal saline gavage), 16 rats in the model group (intraperitoneal injection of LPS 20 g/kg kg·d), 20 rats in the folic acid intervention group A (intraperitoneal injection of folic acid 20 mg/kg·d, 1h after intraperitoneal injection of lipopolysaccharide from 20 g/kg·d), folic acid 20 rats in group B (intraperitoneal injection of folic acid 25 mg/kg·d, intraperitoneal injection of lipopolysaccharide from 20 g/kg·d), 14d after the intervention, the abdomens of the decapitated of pregnant rats were opened, and absorption fetus number, the number of still births and live births, living fetal and fetal placental weights. The expression of HDL-C, TG, LDL-C and TC were measured and compared in the 4 groups. The expressions of ApoA1 and ApoB were determined and compared between the 4 groups. Results：Folic acid intervention group and control group's absorption fetus number and the number of stillbirths in pregnant rats were significantly lower than those in the model group (P<0.01), fetal weight and live fetal placental weight were significantly higher than those of model group rats (P<0.01). Pregnancy in pregnant rats of folic acid intervention group B was better than that of folic acid intervention group A. The expressions of TC, TG and LDL-C in the folic acid intervention groups and control group were significantly lower than those in the model group (P<0.05), and the HDL-C was higher than that in the model group (P<0.05). The expression of LDL-C in folic acid group was significantly lower than that in group A (P<0.05). The expressions of ApoA1 in the folic acid intervention groups and the control group were significantly higher than that in the model group (P<0.05), and the expression of ApoB was significantly lower than that of the model group (P<0.01). The expression of ApoA1 in group B was significantly higher than that in group A, the expression of ApoB was lower than that in group A, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion：Folic acid supplementation during pregnancy can reduce the adverse pregnancy outcome and improve the function of fat metabolism in pregnant rats with adverse pregnancy.

folic acid; adverse pregnancy; pregnant rats; lipid metabolism

安徽省教育廳高等學(xué)校省級(jí)質(zhì)量工程項(xiàng)目(2015sxzx056)。

吳淑嫻(1991—)，女，安徽池州人，碩士，主要從事藥理學(xué)科研和教學(xué)工作。

R965

A

1004-7115(2017)05-0481-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.05.001

2016-12-23)