異槲皮苷在大鼠血漿中的藥代動(dòng)力學(xué)研究

王瑛 李翠玉 張文潔

【摘 要】 目的：對(duì)異槲皮苷的多劑量給藥進(jìn)行研究，初步確定其體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。方法：建立HPLC-UV法測(cè)定異槲皮苷在大鼠血漿中濃度的分析方法，以牡荊素作為內(nèi)標(biāo)物，考察異槲皮苷在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征。色譜柱：Diamonsil C18（150 mm × 4 .6 mm，5 μm），以甲醇-乙腈-0 .1%甲酸水（35∶[KG-*2]5∶[KG-*2]60，V/V/V）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm，柱溫：30℃，流速：1 mL/min。大鼠分別給以5 mg/kg，10 mg/kg和20 mg/kg尾靜脈注射異槲皮苷溶液，并于靜脈注射2、5、10、15、20、30、45、60、90、120、180min后采血，分別置于預(yù)先肝素化的EP管中，樣品經(jīng)處理后，注入液相色譜儀進(jìn)行分析。對(duì)所得結(jié)果利用3p97藥代動(dòng)力學(xué)軟件進(jìn)行擬合處理，計(jì)算其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果：三個(gè)劑量靜脈給藥后，異槲皮苷在0 .2～80 μg范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，r2 > 0 .99。血漿檢測(cè)限（LOD，S/N = 3）及定量限（LOQ，S/N = 10）分別為0 .062和0 .203 μg/mL。日內(nèi)和日間精密度（RSD）分別在2 .3%～7 .2%和2 .8%～7 .7%之間，準(zhǔn)確度（RE）在-6 .3%～7 .0%和4 .0%～6 .2%之間。其提取回收率在91 .24%～94 .50%之間。三個(gè)劑量的藥代動(dòng)力學(xué)行為均最符合三室開(kāi)放模型。在給藥劑量5～10mg/kg范圍內(nèi)，AUC的值成比例增加。此外，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)α half-life，β half-life，aCL，MRT0→t和MRT0→∞在20 mg/kg與其他劑量的比較中均表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：研究建立測(cè)定大鼠血漿中異槲皮苷含量的高效液相色譜法，該法靈敏度和專(zhuān)屬性較高，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，精密度和準(zhǔn)確度好、重復(fù)性高、專(zhuān)屬性強(qiáng)，符合生物樣品分析的要求，并將其成功的應(yīng)用于多劑量靜注異槲皮苷后大鼠體內(nèi)的血漿藥動(dòng)學(xué)研究。

【關(guān)鍵詞】 山楂葉；異槲皮苷；大鼠；藥代動(dòng)力學(xué)

【中圖分類(lèi)號(hào)】 R284 .2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2017）09-0027-07

Study on the Pharmacokinetics of Isoquercitrin in Rats Plasma

WANG Ying1 LI Cuiyu2 ZHANG Wenjie2*

1.Maternal and child health care center of Qingyuan Manchu Autonomous County，Qingyuan 113300，China；

2.School of Pharmacy， Liaoning University of TCM， Dalian 116600，China

Abstract：Objective To investigate the pharmacokinetics of isoquercitrin in mice， and determine its preliminary pharmacokinetic parameters . Methods Established an HPLC-UV method using vitexin as internal standard for the determination of isoquercitrin in rat plasma to investigate its pharmacokinetic characters .The analyses were carried out on an analytical Diamonsil C18 column protected by a KR C18 guard column .The mobile phase was consisted of methanol-acetonitrile-0 .1% aqueous formic acid （35∶[KG-*2]5∶[KG-*2]60， v/v/v） .All chromatographic measurements were performed at 30℃ and a flow rate of 1 mL/min with the detection wavelength of 360 nm.The isoquercitrin solution was given to rats via tail vein injection at the dose of 5mg/kg， 10mg/kg and 20mg/kg . Blood samples （0.3 mL） were collected into heparinized tubes from the vena orbitalis at times of 2， 5， 10， 15， 20， 30， 45， 60， 90， 120 and 180 min after intravenous administration and then centrifuged.The pharmacokinetic parameters were calculated by 3p97 software .Results after three doses of intravenous administration， the linear range for plasma was within 0.2 ～ 80 μg/mL with r2 > 0.99 . The limit of detection （LOD， S/N = 3） and the limit of quantification （LOQ， S/N = 10） in plasma were 0 .062 and 0.203 μg/mL， respectively.The RSDs of precision were 2.3% to 7.2% for intra-day assay and 2.8% to 7.7 % for inter-day assay， and accuracy were within -6.3 % ～ 7.0 %， and 4.0% ～ 6.2%， respectively.Its extraction recoveries in plasma were 91.24% ～ 94.50%.The three-compartment open model gave the best fit to the plasma concentration-time curves obtained in rats.The values of AUC increased proportionally within the range of 5-10 mg/kg.Additionally， the pharmacokinetic results of α half-life， β half-life， aCL， MRT0→t and MRT0→∞ showed significant differences between 20 mg/kg and other doses.Conclusion Established an HPLC method for the determination of isoquercitrin in rat plasma.The analytical method after validated presented high sensitivity， specificity， good precision and accuracy with high reproducible， which conformed to the criteria for the analysis of biological sample according to guidance of USFDA， and was successfully applied to pharmacokinetic study of multi-dose intravenous administration of isoquercitrin in rats.

Keywords： Hawthorn Leaves； Isoquercitrin； Rat； Pharmacokinetics

異槲皮苷（isoquercitrin，ISOQ），別名槲皮素-3-O-葡萄糖苷、羅布麻甲素，是一種黃酮類(lèi)化合物，是山楂葉中的主要活性成分之一。具有豐富的生物學(xué)及藥理活性如抗炎[1]，體內(nèi)外抗氧化活性[2]，對(duì)暴露于過(guò)氧化氫引起的RGC-5細(xì)胞凋亡有明顯的衰減作用，以及對(duì)青光眼有治療作用[3]，越來(lái)越受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。此外，異槲皮苷在多種中草藥中的許多研究方法諸如HPLC-UV[4]，LC-DAD和LC-MS[5]，CZE-UV[6]，SPE-HPLC[7]等均在文獻(xiàn)中有相關(guān)報(bào)道。異槲皮苷的體內(nèi)外分析已見(jiàn)報(bào)道[8]，然而異槲皮苷的多劑量靜脈給藥分析并未見(jiàn)相關(guān)研究。筆者采用內(nèi)標(biāo)法的HPLC分析對(duì)異槲皮苷的多劑量給藥藥物動(dòng)力學(xué)過(guò)程進(jìn)行分析，為相關(guān)的臨床研究提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性Wistar大鼠，20只，體重（240±20）g，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，試驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2003-008。實(shí)驗(yàn)中所使用動(dòng)物嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物保護(hù)指導(dǎo)原則進(jìn)行，所使用動(dòng)物征得遼寧中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)同意。試驗(yàn)期間自由飲水，大鼠給藥前禁食12～16h。

1.2 藥品 異槲皮苷，內(nèi)標(biāo)物牡荊素均為實(shí)驗(yàn)室自制（純度>98%，HPLC）。

1.3 試劑 甲醇（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；乙腈（色譜純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；甲酸（分析純，沈陽(yáng)市試劑三廠）；冰醋酸（分析純，華北地區(qū)特種化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心）；磷酸（分析純，沈陽(yáng)市試劑三廠）；純凈水（娃哈哈有限公司）。

1.4 儀器 Agilent l100高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；HH-S水浴鍋（上海永光明儀器設(shè)備廠）；十萬(wàn)分之一天平（瑞士METTLER）；XW-80A微型旋渦混合器（上海滬西分析儀器廠有限公司）；XYJ80-2型離心機(jī)（金壇市金南儀器廠）；TGL-16C高速臺(tái)式離心機(jī)（江西醫(yī)療器械廠）；ZDHW電子調(diào)溫電熱套（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；微量取樣器（上海榮泰生化工程有限公司）；柱溫箱（大連日普利科技儀器有限公司）；TY10HSC-24A氮吹儀（南京科捷分析儀器有限公司）。

2 方法

2.1 大鼠血漿樣品中異槲皮苷分析方法的建立

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（150 mm × 4 .6 mm， 5μm）（迪馬公司，中國(guó)北京）；預(yù)柱：KR C18（35 mm × 8.0mm， i.d.， 5μm）（大連科技發(fā)展公司）；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.1%甲酸水（35∶[KG-*2]5∶[KG-*2]60，V/V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；流速：1 mL/min；內(nèi)標(biāo)物：牡荊素；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。

2.1.2 溶液制備

2.1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密稱(chēng)取異槲皮苷（圖1）對(duì)照品約1.60mg，置10mL量瓶中，加適量甲醇超聲溶解，并定容至刻度，搖勻，即得濃度160μg/mL對(duì)照品儲(chǔ)備液。采用倍數(shù)稀釋法分別配制成7個(gè)濃度的對(duì)照品溶液，即160.0、40.0、10.0、4.0、1.6、0.8和0.4μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，于4℃冰箱保存，備用。

2.1.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取精密稱(chēng)定的牡荊素（圖2）2.26 mg，置10mL量瓶中，加適量甲醇超聲使其溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為226μg/mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。再精密吸取1.0mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為22 .6μg/mL的溶液，作為內(nèi)標(biāo)，于4℃冰箱保存，備用。

2.1.2.3 空白血漿樣品的制備 取6只空白大鼠（大鼠于取樣前一晚禁食，自由飲水）血漿，充分混合，于-20℃冰箱保存，備用。

2.1.2.4 質(zhì)控（QC）樣品的制備 精密吸取100μL空白血漿，分別各加入50μL工作溶液（1.2、12、120μg/mL）和10μL內(nèi)標(biāo)溶液照“血漿樣品的處理”項(xiàng)下方法處理，制備成低、中、高三種濃度的質(zhì)控樣品。異槲皮苷血漿濃度分別為0.6、6、60μg/mL，于4℃冰箱保存，備用。

2.1.3 血漿樣品預(yù)處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.1.3.1 提取溶劑種類(lèi)的選擇 取大鼠空白血漿樣品100μL共三組，每組3個(gè)，分別置2mL離心管中，依次加入QC標(biāo)準(zhǔn)溶液50μL、內(nèi)標(biāo)溶液10μL、乙酸10μL。各組分別加入甲醇、乙腈、甲醇-乙腈（50：50）各500μL，渦旋1min，離心15min （3500r/min），取上清液，40℃氮?dú)饬飨麓蹈桑?00μL流動(dòng)相溶解，渦旋1min，離心5min （10，000r/min），取20μL進(jìn)樣。分別記錄峰面積，計(jì)算提取回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。綜合考慮各待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物回收率，選擇甲醇作為提取溶劑。

取大鼠空白血漿樣品100μL共三組，每組3個(gè)，分別置2mL離心管中，依次加入QC標(biāo)準(zhǔn)溶液50μL，內(nèi)標(biāo)溶液10μL，乙酸10μL。各組分別加入甲醇400μL，500μL和1000μL，渦旋1min，離心15min （3500r/min），取上清液，40℃氮?dú)饬飨麓蹈桑?00μL流動(dòng)相溶解，渦旋1min，離心5min （10，000r/min），取20μL進(jìn)樣。分別記錄峰面積，計(jì)算提取回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。綜合考慮各待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物回收率，選擇500μL甲醇為提取溶劑。

2.1.3.2 酸種類(lèi)及用量的選擇 取空白血漿樣品，同“提取溶劑種類(lèi)的選擇”項(xiàng)下操作，分別考察甲酸、乙酸和磷酸對(duì)各待測(cè)組分的提取回收率的影響，結(jié)果見(jiàn)表3。

綜合考慮樣品提取回收率及峰型，結(jié)果表明乙酸組效果最好。故繼續(xù)考察不同用量的乙酸對(duì)提取回收率的影響。

取空白血漿樣品，同“提取溶劑種類(lèi)的選擇”項(xiàng)下操作，考察其用量分別為0、10、20μL時(shí)對(duì)血漿中各待測(cè)組分含量測(cè)定的影響情況，計(jì)算各待測(cè)組分的提取回收率。結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果顯示乙酸10μL可較好抑制大鼠的血漿樣品中待測(cè)組分解離，并有利于改善色譜峰峰形，故選擇乙酸用量為10μL。

2.1.3.3 血漿樣品的處理 經(jīng)過(guò)對(duì)上述因素的考查，確定了血漿樣本的處理方法：取血漿100μL至預(yù)先肝素化的2mL離心管中，依次加入乙酸10μL，內(nèi)標(biāo)10μL，甲醇500μL，渦旋1min，離心15min （3500r/min），取上清液，40℃氮?dú)饬飨麓蹈?，?00μL流動(dòng)相溶解，渦旋1min，離心5min （10，000r/min），取20μL進(jìn)樣。分別記錄峰面積，記錄色譜圖。

2.2 動(dòng)物血漿樣品的采集與預(yù)處理 取雄性Wistar大鼠15只，隨機(jī)分成3組，每組5只。實(shí)驗(yàn)前禁食12h，自由飲水。取定量異槲皮苷溶解到含20%丙二醇的生理鹽水溶液（v/v）中，制成異槲皮苷溶液。按5、10和20 mg/kg體重經(jīng)尾靜脈一次性給予異槲皮苷溶液，分別于注射后2，5，10，15，20，30，45，60，90，120和180 min采血，每個(gè)點(diǎn)采血0.3 mL，置于預(yù)先肝素化的離心管中，離心（3500r/min） 15min，得血漿樣本置-20℃冰箱中保存，待處理。取各采血時(shí)間點(diǎn)血漿100μL，按照“血漿樣品的處理”項(xiàng)下方法操作，進(jìn)樣分析。

3 結(jié)果

3.1 析方法的確證

3.1.1 方法的專(zhuān)屬性 上述色譜條件下，通過(guò)將大鼠的空白血漿樣品色譜圖（圖2）空白血漿樣品中加對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物色譜圖（圖2b）以及異槲皮苷靜脈注射后血漿樣品中加內(nèi)標(biāo)色譜圖（圖2）進(jìn)行比較。結(jié)果表明，異槲皮苷與內(nèi)標(biāo)物色譜峰分離良好，不受內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。異槲皮苷和內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間分別為6.8min和10.6min。

3.1.2 檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ） 將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋?zhuān)芪?0μL，至100μL的空白血漿中，按“血漿樣品的處理”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，配制樣品溶液，進(jìn)行測(cè)定，保證S/N均為10，重復(fù)分析五次，獲得該濃度的日內(nèi)精密度RSD低于8.7%，準(zhǔn)確度RE為3.8%，該結(jié)果表明HPLC測(cè)定異槲皮苷的LOQ為0.203μg/mL，LOD（S/N=3）為0.062μg/mL。

3.1.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn) 取空白血漿100μL，分別加入內(nèi)標(biāo)溶液10μL，加入異槲皮苷系列標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.4、0.8、1.6、4.0、10.0、40.0和160.0μg/mL）各50μL，配制成相當(dāng)于血漿濃度為0.2、0.4、0.8、2.0、5.0、20.0和80.0 μg/mL的待測(cè)樣品，按“血漿樣品的處理”項(xiàng)下方法操作，進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖。以異槲皮苷與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)（y），異槲皮苷濃度為橫坐標(biāo)（x），用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算[9]，權(quán)重系數(shù)為I/C2，求得直線(xiàn)的回歸方程為：y=0.2426x-0.0242 （r= 0.9961），本方法異槲皮苷在0.2～80μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性良好。

3.1.4 提取回收率 取空白血漿100μL，按上述“血漿樣品處理”項(xiàng)下方法分別制備低、中、高三個(gè)濃度（0.6、6、60μg/mL）的樣品。以提取后樣品的色譜峰面積與含有相同含量未經(jīng)提取溶液直接進(jìn)樣所獲得的色譜峰面積之比，考察樣品的提取回收率。每一濃度進(jìn)行6樣本分析，待測(cè)組分的提取回收率均不低于（91.24±6.93）%，結(jié)果見(jiàn)表5。

3.1.5 精密度和準(zhǔn)確度 取空白血漿100μL，按上述“血漿樣品的處理”項(xiàng)下方法分別制備低、中、高三個(gè)濃度（0.6、6、60μg/mL）的血漿樣品。日內(nèi)精密度測(cè)定在同一天對(duì)每個(gè)濃度的QC樣品進(jìn)行5樣本分析；日間精密度的計(jì)算，是對(duì)每個(gè)濃度的5樣品進(jìn)行分析（每天一個(gè)分析批），連續(xù)測(cè)定3d，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)同時(shí)進(jìn)行，以當(dāng)日的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算QC樣品的濃度，求得該方法的精密度RSD%（QC樣品測(cè)得值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差）和準(zhǔn)確度RE（QC樣品測(cè)量均值對(duì)真值的相對(duì)誤差），結(jié)果見(jiàn)表6。本方法的日內(nèi)和日間精密度RSD≤7.7%，RE在-6.3～7.0%之間。結(jié)果表明該法重復(fù)性、準(zhǔn)確性良好，均符合生物分析方法指導(dǎo)原則的要求[10]。

3.1.6 樣品穩(wěn)定性 取空白血漿100μL，按上述“血漿樣品的處理”項(xiàng)下方法分別制備低、中、高三個(gè)濃度（0.6、6、60μg/mL）的樣品，各個(gè)濃度QC樣品分別經(jīng)短期（室溫，4h）、長(zhǎng)期（-20℃，1個(gè)月）和連續(xù)凍融3次（凍：-20℃/24h，-20℃/12h，-20℃/12h）-融（25℃/30min，3次）循環(huán)處理后帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中測(cè)定待測(cè)組分QC樣品的濃度，計(jì)算RE%，結(jié)果見(jiàn)表7。結(jié)果表明生物樣品在室溫，-20℃放置1個(gè)月及連續(xù)凍融3次均能保持穩(wěn)定。

3.2 異槲皮苷藥動(dòng)學(xué)研究 將給藥后不同時(shí)間取血測(cè)得的血藥濃度和時(shí)間數(shù)據(jù)用3p97藥代動(dòng)力學(xué)軟件擬合，通過(guò)進(jìn)行一房室、二房室、三房室對(duì)各權(quán)重為1、l/C、1/C2的情況進(jìn)行擬合，比較藥時(shí)曲線(xiàn)擬合圖及參數(shù)，平均藥時(shí)曲線(xiàn)見(jiàn)圖2-3，其主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)見(jiàn)表8。

4 討論

4.1 助溶劑的選擇 異槲皮苷幾乎不溶于冷水，微溶于沸水。鑒于其欠佳的水溶性，本實(shí)驗(yàn)曾嘗試用DMSO作為助溶劑。有文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng)DMSO加入量大于1%時(shí)，將會(huì)給動(dòng)物造成中毒反應(yīng)[11]，但當(dāng)在生理鹽水中加入DMSO約為1%時(shí)，異槲皮苷未獲得較好的溶解。后嘗試使用丙二醇作為助溶劑，文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng)丙二醇用量小于60%時(shí)，是在安全范圍內(nèi)[12]。分別嘗試使用5%、10%、20%的丙二醇，發(fā)現(xiàn)當(dāng)生理鹽水中加入20%丙二醇時(shí)異槲皮苷能夠很好地溶解，故最終確定使用含20%丙二醇的生理鹽水溶液（v/v）來(lái)制備藥物溶液。

4.2 流動(dòng)相的選擇 為了獲得合適的保留時(shí)間和良好的分離度，曾分別采用甲醇-水（40：60，45：55），結(jié)果被測(cè)物分離效果不佳。后流動(dòng)相中加入了乙腈，分別嘗試采用甲醇-乙腈-水（30：5：65，35：5：60，25：10：65），后發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水（35：5：60）出峰時(shí)間比較理想，但峰形欠佳。為了改善峰形，嘗試了甲醇-乙腈-甲酸水系統(tǒng)，分別嘗試0.1%～0.5%的甲酸水，最后發(fā)現(xiàn)當(dāng)流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.1%甲酸水（35：5：60）時(shí)分離效果良好，故最終確定為本實(shí)驗(yàn)流動(dòng)相。

4.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 異槲皮苷的吸收光譜顯示其具有兩個(gè)最大吸收波長(zhǎng)，分別為256nm和358nm，而內(nèi)標(biāo)物牡荊素的兩個(gè)最大吸收波長(zhǎng)為269nm和331nm。當(dāng)選擇256nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)峰會(huì)對(duì)檢測(cè)造成干擾。綜上最終確定檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm。

4.4 內(nèi)標(biāo)物的選擇 為滿(mǎn)足測(cè)試需求，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)選擇與被測(cè)物結(jié)構(gòu)相似，保留時(shí)間較為接近的化合物。本實(shí)驗(yàn)對(duì)多種化合物進(jìn)行了篩選，曾嘗試了牡荊素-4″-O-葡萄糖苷、牡荊素-2″-O-鼠李糖苷、金絲桃苷和牡荊素等物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物。最終由于保留時(shí)間適宜，與待測(cè)物結(jié)構(gòu)類(lèi)似，不受內(nèi)源性物質(zhì)干擾，且與待測(cè)物質(zhì)、血漿內(nèi)源性物質(zhì)之間無(wú)干擾、分離度良好，因此選擇牡荊素為本試驗(yàn)的內(nèi)標(biāo)物。

4.5 藥代動(dòng)力學(xué)研究 結(jié)果表明給藥后異槲皮苷在大鼠體內(nèi)迅速消除，低劑量（5mg/kg）異槲皮苷的血藥濃度只能檢測(cè)到0.75h，高劑量的（20mg/kg）可以檢測(cè)到3h。通過(guò)擬合度比較5，10和20mg/kg給藥劑量下均選擇1/C2為權(quán)重系數(shù)。依據(jù)F檢驗(yàn)，AIC和R2的比較，三個(gè)劑量的藥代動(dòng)力學(xué)行為均最符合三室開(kāi)放模型。在給藥劑量5～10mg/kg范圍內(nèi)，AUC的值成比例增加。此外，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)αhalf-life，βhalf-life，aCL， MRT0→t 和MRT0→∞在20mg/kg與其他劑量的比較中均表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。20mg/kg劑量的αhalf-life的值比另外兩個(gè)給藥劑量的值大，表明異槲皮苷在大鼠體內(nèi)的分布過(guò)程在20mg/kg劑量下進(jìn)行的更為緩慢。而20mg/kg劑量下較大的 βhalf-life，MRT0→t 和 MRT0→∞則表明異槲皮苷的消除過(guò)程相較于低劑量時(shí)也表現(xiàn)的更為緩慢?；谝陨辖Y(jié)果，異槲皮苷在5～10mg/kg表現(xiàn)出非劑量依賴(lài)性而在更高劑量（20mg/kg）時(shí)則呈現(xiàn)出非線(xiàn)性過(guò)程。這主要是由于藥物的代謝酶和可透過(guò)膜的載體在高劑量給藥狀態(tài)下存在飽和現(xiàn)象，即代謝酶或載體的輸送能力在體內(nèi)的劑量和濃度超過(guò)某一限度時(shí)會(huì)達(dá)到飽和，從而表現(xiàn)出不同給藥劑量下藥動(dòng)學(xué)過(guò)程的差異[13]。

綜上所述，實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法對(duì)異槲皮苷多劑量給藥體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的研究方法，確定了異槲皮苷在血漿樣品中的含量測(cè)定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。該法專(zhuān)屬性強(qiáng)，分離度較好，其檢測(cè)限、提取回收率、精密度、穩(wěn)定性均符合生物樣品分析要求。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)藥動(dòng)學(xué)軟件處理，擬合出不同劑量異槲皮苷的大鼠體內(nèi)房室模型，并計(jì)算出相關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。其在5～10mg/kg給藥劑量范圍內(nèi)表現(xiàn)出非劑量依賴(lài)性，而在更高劑量20mg/kg時(shí)則呈非線(xiàn)性過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)為異槲皮苷的進(jìn)一步研究提供了理論依據(jù)。

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（收稿日期：2017-03-02 編輯：陶希睿）