穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)/超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定水果與豆芽中10種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留

劉柏林，謝繼安，趙紫微，王秀莉，單曉梅

(安徽省疾病預(yù)防控制中心，安徽 合肥 230601)

穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)/超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定水果與豆芽中10種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留

劉柏林*，謝繼安，趙紫微，王秀莉，單曉梅

(安徽省疾病預(yù)防控制中心，安徽 合肥 230601)

建立了水果與豆芽中10種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留的超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)分析方法。以酸化乙腈(1∶1 000，體積比)為提取液，樣品經(jīng)高速勻漿與超聲輔助分散提取后，提取液采用固相萃取柱凈化，甲醇-5 mmol/L乙酸銨溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，電噴霧電離，正負(fù)離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)檢測(cè)，基質(zhì)匹配同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。最優(yōu)條件下，10種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留在0.1～50.0 μg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.995，檢出限為0.2 μg/kg，平均回收率為52.4%～119.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于13%。該方法樣品前處理簡(jiǎn)單、凈化效果好，同位素內(nèi)標(biāo)的使用解決了基質(zhì)效應(yīng)及前處理過(guò)程中待測(cè)物損失造成定量結(jié)果不準(zhǔn)確的問(wèn)題，適用于大批量果蔬中多種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的快速測(cè)定。

超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑；同位素內(nèi)標(biāo)；水果；豆芽

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑( Plant growth regulator,PGRs) 是一類人工合成的農(nóng)藥，具有與天然植物激素相似的生理和生物學(xué)效應(yīng),有促進(jìn)植物生長(zhǎng)，或延緩、抑制功能[1]，能夠提高作物產(chǎn)品質(zhì)量和品質(zhì)、增強(qiáng)果實(shí)抗病力、延緩果實(shí)成熟等作用。隨著植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在農(nóng)業(yè)方面的廣泛使用，其毒性與危害引起了人們的關(guān)注。研究表明，殘留在農(nóng)作物中的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑可通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，輕者造成腹瀉等疾病，重者使人體免疫力下降，骨骼疏松，甚至有致畸、致癌、致突變等嚴(yán)重后果[2]。

針對(duì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留問(wèn)題，國(guó)際食品法典委員會(huì)(Codex Alimentarius Commission,CAC)、美國(guó)、歐盟、日本、澳大利亞等組織和發(fā)達(dá)國(guó)家相繼制定了最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)(Maximum residue limits,MRLs)[3-4]。在中國(guó)，隨著“毒豆芽”與“爆炸西瓜”事件的發(fā)生，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的安全性受到廣泛關(guān)注，現(xiàn)行有效的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB2763-2014中制定了2，4-二氯苯氧乙酸、多效唑、氯吡脲、噻苯隆的最大殘留限量。但植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類繁多，在最大殘留限量制定方面均不完善，分析方法的研究顯得尤為重要。當(dāng)前，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法[5]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[6-12]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[13-14]。其中液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法以其抗干擾能力強(qiáng)、靈敏度高,并能提供結(jié)構(gòu)方面的信息確證而被更多采用[6]，而已報(bào)道的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法大多使用基質(zhì)外標(biāo)法定量，很少有同位素內(nèi)標(biāo)法定量的報(bào)道[15]。對(duì)基質(zhì)復(fù)雜的蔬菜、水果樣品，基質(zhì)效應(yīng)是存在的。解決基質(zhì)效應(yīng)的最好方法是基質(zhì)加標(biāo)或同位素內(nèi)標(biāo)法，而基質(zhì)加標(biāo)法需制備工作曲線，一般很難找到合適的空白本底的基質(zhì)樣品。采用同位素內(nèi)標(biāo)法很好克服了這一缺點(diǎn)，降低了基質(zhì)效應(yīng)的影響，避免了待測(cè)物在樣品前處理過(guò)程中的損失，從而保證了測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

本文建立了UPLC-MS/MS 同位素內(nèi)標(biāo)法同時(shí)測(cè)定水果與豆芽中10種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留的分析方法。通過(guò)對(duì)色譜條件、質(zhì)譜條件、樣品前處理進(jìn)行優(yōu)化，同位素內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行校正，使得本方法靈敏度高、準(zhǔn)確性好，適合于大批量水果與蔬菜樣品中多種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的同時(shí)測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

AcquityTMUPLC超高壓液相色譜儀、串聯(lián)質(zhì)譜儀(ZEVO TQ MS)、8010G樣品均質(zhì)杯均購(gòu)自美國(guó)Waters公司；VORTEX Gnius 3旋渦混勻器(德國(guó)IKA公司)；MCS固相萃取柱、SLC固相萃取柱(500 mg，6 mL，杭州福裕科技服務(wù)有限公司)。

2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D，純度≥99.0%)、脫落酸(純度≥98.5%)、吲哚乙酸(純度≥99.5%)、吲哚丁酸(純度≥99.9%)、赤霉素(純度≥94.7%)、4-氯苯氧乙酸(純度≥99.5%)、氯吡脲(純度≥99.0%)、噻苯隆(純度≥99.5%)、6-芐基腺嘌呤(純度≥99.0%)、多效唑(純度≥99.5%)購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司；2，4-二氯苯氧乙酸-d5(純度≥98.5%)、吲哚乙酸-d7(純度≥99.2%)、氯吡脲-d5(純度≥98.7%)購(gòu)自加拿大C/D/N Isotopes公司；甲醇、甲酸、乙腈、氨水(色譜純,德國(guó)Merck公司)；乙酸銨(色譜純,Sigma公司)。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別取適量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及同位素內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，用甲醇溶解，并定容至刻度，配制成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，避光保存于-20 ℃冰箱；混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至容量瓶中，用10%甲醇水溶液稀釋至刻度，混勻，配制成100 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液；準(zhǔn)確移取適量同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至容量瓶中，用10%甲醇水溶液稀釋至刻度，混勻，配制成100 ng/mL的混合內(nèi)標(biāo)工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 超高壓液相色譜(UPLC)條件

色譜柱:Waters AcquityTMUPLC BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)；柱溫:40 ℃；樣品室溫度10 ℃；進(jìn)樣體積:10 μL；流動(dòng)相:A為5 mmol/L乙酸銨，B為甲醇；流速:0.3 mL/min；梯度洗脫條件：0 ～1 min，0～2%B；1～2 min，2%～30%B；2～4 min，30%～95%B；4～5 min，保持95%B；5～6 min，95%～2%B；6～8 min，保持2%B。

1.4 質(zhì)譜條件

離子源:電噴霧離子源；電離模式:ESI+和 ESI-；檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；毛細(xì)管電壓:3.8 kV(ESI+)和2.4 kV(ESI-)；離子源溫度:150 ℃；脫溶劑氣溫度:500 ℃；脫溶劑氣流量:800 L/h；碰撞氣流量:0.13 mL/min。待測(cè)物的母離子、子離子及對(duì)應(yīng)的碰撞能量、錐孔電壓見(jiàn)表1。

表1 10種待測(cè)物及同位素內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)Table 1 MS/MS conditions for the analysis of ten analytes and internal standards

*quantitation ion

1.5 樣品處理

提?。悍Q取樣品 5.00 g(精確至0.01)于50 mL離心管中，加入500 μL混合內(nèi)標(biāo)工作液、20 μL甲酸和20 mL乙腈，高速旋渦混勻1.0 min后，超聲 5 min,冷卻，10 000 r/min離心 5 min，上清液轉(zhuǎn)移至新的50 mL 離心管中，然后加入 2.0 g NaCl(使其飽和有結(jié)晶)，旋渦混勻 2 min后于 10 000 r/min離心5 min，吸出2.0 mL乙腈置于試管中，50 ℃下用氮?dú)獯蹈?，加?.2 mL甲醇旋渦溶解，再加入 3.0 mL 40 mmol/L鹽酸溶液混勻，轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)于10 000 r/min離心5 min，分出上清液凈化。

凈化：先用5 mL甲醇、 5 mL水、5 mL 40 mmol/L的鹽酸溶液活化 MCS柱，活化結(jié)束后，將上清液轉(zhuǎn)移至MCS柱內(nèi)，待樣品通過(guò)后，用 5 mL水淋洗除雜，真空抽干5 min，依次加入5 mL甲醇、5 mL 5%氨化甲醇洗脫，收集于10 mL具塞試管內(nèi)，50 ℃下氮?dú)獯蹈桑尤?.13 mL甲醇超聲溶解殘留物，再加入0.87 mL 純水混勻，過(guò)0.22 μm濾膜后待測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

分別將10種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配成濃度為1.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用Waters TQ MS自動(dòng)調(diào)諧分析，正、負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描,確定10種待測(cè)物的母離子及錐孔電壓,在此錐孔電壓下，選取強(qiáng)度較高的兩個(gè)子離子分別作為定量和定性離子，以MRM模式優(yōu)化碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)，定性、定量離子和質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。赤霉素、2,4-D、4-氯苯氧乙酸、噻苯隆、6-芐基腺嘌呤、氯吡脲、吲哚乙酸、吲哚丁酸在正負(fù)離子模式下均有響應(yīng)，但吲哚乙酸、吲哚丁酸與氯吡脲在負(fù)離子模式下的離子強(qiáng)度低于正離子模式下。綜合考慮各待測(cè)化合物的靈敏度和基質(zhì)干擾程度，除氯吡脲、多效唑、吲哚乙酸、吲哚丁酸選用正離子模式外，其余待測(cè)物均選擇負(fù)離子模式。

2.2 流動(dòng)相的優(yōu)化

比較了不同流動(dòng)相對(duì)待測(cè)物峰形及離子化效率的影響。結(jié)果表明，甲醇作為有機(jī)相時(shí)，各待測(cè)物的響應(yīng)較好,離子強(qiáng)度高,離子化效率優(yōu)于乙腈。當(dāng)水相中加入0.1%甲酸時(shí)，負(fù)離子的離子化效率受到抑制，加入0.01%氨水時(shí)，吲哚乙酸與吲哚丁酸的響應(yīng)降低，而加入乙酸銨緩沖鹽后，待測(cè)物分離度增大，峰形尖銳對(duì)稱?；陟`敏度的考慮，選擇甲醇作為有機(jī)相，5 mmol/L乙酸銨溶液作為水相。10種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑標(biāo)準(zhǔn)溶液及同位素內(nèi)標(biāo)的色譜圖如圖1。

2.3 樣品溶劑的優(yōu)化

考察了不同體積比的甲醇-水溶液作為溶劑溶解樣品時(shí)對(duì)色譜峰形的影響。實(shí)驗(yàn)表明，純甲醇作溶劑時(shí)，與流動(dòng)相不匹配而產(chǎn)生溶劑效應(yīng)，待測(cè)物的色譜峰展寬最嚴(yán)重，甲醇含量降低時(shí)，柱效增加，峰形變窄，靈敏度變高。對(duì)氮?dú)獯蹈珊蟮臍埩粑镞M(jìn)行復(fù)溶時(shí)，甲醇含量低不能完全溶解殘留在離心管壁上的待測(cè)物，導(dǎo)致部分待測(cè)物的回收率偏低。綜合考慮，采用13%甲醇作為標(biāo)準(zhǔn)曲線系列的定容溶劑，復(fù)溶殘?jiān)鼤r(shí)，先加入0.13 mL純甲醇溶解，后加入0.87 mL純水定容，確保定容溶劑中甲醇含量一致。

圖1 基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液及同位素內(nèi)標(biāo)的色譜圖(添加濃度為5.0 ng/mL)Fig.1 Chromatograms of matrix matching and isotope internal standard(5.0 ng/mL)

2.4 樣品凈化的優(yōu)化

已有文獻(xiàn)多采用分散固相萃取法凈化以達(dá)到快速、簡(jiǎn)便的目的，但使用分散固相萃取法凈化時(shí)，樣品提取液中含有高濃度的有機(jī)溶劑，限制了儀器的進(jìn)樣量，影響靈敏度。另外，分散固相萃取法使用的吸附劑材料取決于待測(cè)物的結(jié)構(gòu)，不同的待測(cè)物，選取的吸附劑材料不同，檢測(cè)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的吸附劑材料一般為N-丙基乙二胺(PSA)、C18和石墨化炭黑(GCB)，而這些材料吸附的機(jī)理不同，除去的雜質(zhì)也不同。實(shí)驗(yàn)比較了分散固相萃取與陽(yáng)離子交換柱兩種凈化方法，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)離子交換柱凈化能夠更好地除去水果樣品中的色素，增加結(jié)果的準(zhǔn)確性，避免假陽(yáng)性。另外，比較了MCS與SLC柱2種混合型的陽(yáng)離子交換柱的凈化效果，發(fā)現(xiàn)吲哚丁酸在SLC柱上沒(méi)有保留，經(jīng)柱凈化后的加標(biāo)回收率低。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇MCS柱凈化樣品，以解決色素殘留問(wèn)題，提高樣品凈化效果，同時(shí)獲得理想的內(nèi)標(biāo)回收率，該條件下的平均回收率大于97%。

2.5 內(nèi)標(biāo)物的選擇

在質(zhì)譜檢測(cè)中，選取與待測(cè)物結(jié)構(gòu)一致的同位素內(nèi)標(biāo)進(jìn)行定量，其定量結(jié)果可根據(jù)不同基質(zhì)對(duì)待測(cè)物響應(yīng)的抑制進(jìn)行平行削減，以獲得較高的定量準(zhǔn)確性[16]。但同位素內(nèi)標(biāo)物的價(jià)格較高，種類較少，往往缺乏與待測(cè)物結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)的內(nèi)標(biāo)物。本實(shí)驗(yàn)考察了同位素內(nèi)標(biāo)校正不同待測(cè)物的回收率，最終選取3種氘代同位素內(nèi)標(biāo)，其中多效唑、6-芐基腺嘌呤、噻苯隆、氯吡脲、4-氯苯氧乙酸、吲哚丁酸、赤霉素以氯吡脲-d5作為內(nèi)標(biāo)，吲哚乙酸、脫落酸以吲哚乙酸-d7作為內(nèi)標(biāo)，2，4-D以2,4-D-d5作為內(nèi)標(biāo)。

2.6 基質(zhì)效應(yīng)的影響

基質(zhì)曲線作用在于補(bǔ)償基質(zhì)抑制和增強(qiáng)效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)會(huì)影響定量的準(zhǔn)確性。本實(shí)驗(yàn)考察了基質(zhì)效應(yīng)的影響，以陰性樣品提取液為溶劑，配制10.0 ng/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定其峰面積為A；以樣品溶劑(13%甲醇)配制10.0 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定其峰面積為B，計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)ME(%)=B/A×100，其中ME>100% 說(shuō)明有基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，ME<100% 說(shuō)明有基質(zhì)抑制效應(yīng)[17]。由表2可以看出，樣品基質(zhì)對(duì)目標(biāo)化合物存在一定的影響，除了赤霉素與4-氯苯氧乙酸具有基質(zhì)抑制效應(yīng)外，其余化合物均表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。為提高定量的準(zhǔn)確度，本實(shí)驗(yàn)選取陰性樣品的基質(zhì)提取液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液，并加入同位素內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正。

2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限與定量下限

選取陰性樣品，按照樣品前處理的步驟進(jìn)行處理，制備樣品基質(zhì)提取液，準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液于容量瓶中，加入500 μL內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液和適量的上述基質(zhì)提取液，用13%甲醇水溶液定容至刻度，配制成0.1，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，50.0 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列。進(jìn)樣10 μL分析，以待測(cè)物峰面積(y)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度(x，μg/L)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，各待測(cè)物均在質(zhì)量濃度為0.1～50.0 μg/L的范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.995(見(jiàn)表2)。

表2 10種待測(cè)物的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量下限及基質(zhì)效應(yīng)Table 2 Linear equations,correlation coefficients,LODs,LOQs and matrix effects for ten analytes

添加0.2 μg/kg濃度時(shí)，10種待測(cè)物峰的信噪比(S/N)均大于3，故將其定為檢出限。定量下限定義為在獲得滿意的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差條件下，可以檢測(cè)到的樣品溶液中目標(biāo)化合物的最低濃度，故本方法中10種待測(cè)物的定量下限為2.0 μg/kg，方法的靈敏度可滿足GB/T27404-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范的相關(guān)要求。

2.8 精密度與回收率

稱取(5.00±0.01) g陰性樣品，添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使加標(biāo)濃度分別達(dá)到1.0，4.0，20.0 μg/kg，加入同位素內(nèi)標(biāo)混合液，按照樣品前處理方法進(jìn)行處理，上機(jī)測(cè)定，每個(gè)添加水平進(jìn)行5次實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如表3所示，平均回收率為52.4%～119.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.0%～12.3%。實(shí)際樣品分析發(fā)現(xiàn)水果中存在內(nèi)源性物質(zhì)脫落酸影響低濃度的測(cè)定，加標(biāo)回收時(shí)，適當(dāng)增加添加量的濃度，可確保結(jié)果的準(zhǔn)確性，故添加量分別選為10.0，20.0，100.0 μg/kg。

表3 樣品中10種待測(cè)物的加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5，%)Table 3 Recoveries and relative standard deviations of ten analytes in the actual samples(n=5，%)

*the additions of abscisic acid were 10.0,20.0，100.0 μg/kg in fruit,and 1.0，4.0，20.0 μg/kg in bean sprout

2.9 實(shí)際樣品的測(cè)定

采用本方法對(duì)超市與農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)采集的100份水果、80份豆芽進(jìn)行測(cè)定，水果中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的檢出率為20.0%，其中葡萄、獼猴桃中的2，4-D、4-氯苯氧乙酸、赤霉素與氯吡脲的檢出率較高，最高濃度分別達(dá)到0.041 7，0.033 2，0.021 7，0.041 5 mg/kg。除GB2762-2014規(guī)定葡萄與獼猴桃中氯吡脲的最大殘留限值為0.05 mg/kg，葡萄中2，4-D的最大殘留限值為0.1 mg/kg外，水果中4-氯苯氧乙酸和赤霉素尚無(wú)限量標(biāo)準(zhǔn)，而獼猴桃中的2，4-D也無(wú)限量標(biāo)準(zhǔn)。豆芽中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的檢出率為38.0%，主要為4-氯苯氧乙酸、6-芐基腺嘌呤、赤霉素和吲哚乙酸，檢出值范圍分別為0.006 1～1.01，0.004 3～0.045，0.005 7～0.071，0.006～1.81 mg/kg，這4種待測(cè)物在豆芽中均無(wú)限量標(biāo)準(zhǔn)，但有文獻(xiàn)報(bào)道吲哚乙酸是豆芽?jī)?nèi)源性生長(zhǎng)素[13]，是否屬人為添加還需大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

3 結(jié) 論

本文建立了水果與豆芽中10種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留的UPLC-MS/MS分析方法。與已報(bào)道的方法相比，該法采用基質(zhì)匹配，同位素內(nèi)標(biāo)校正，解決了基質(zhì)效應(yīng)問(wèn)題，提高了定量的準(zhǔn)確性與可靠性，適合于大批量樣品中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留的快速檢測(cè)。

[1] Shi X M,Jin F,Huang Y T,Du X W,Li C M,Wang M,Shao H,Jin M J,Wang J.J.Agric.FoodChem.，2012,60：60-65.

[2] Wu F Q,Jin B H,Chen B,Chen P J,Xiao F.Chin.Agric.Sci.Bull.(吳鳳琪，靳保輝，陳波，陳沛金，肖鋒.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)),2010,26(15)：115-119.

[3] Dai Y,Wang J H,Han P,Ma S,Feng X Y.J.FoodSaf.Qual.(戴瑩，王紀(jì)華，韓平，馬帥,馮曉元.食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào))，2016，7(2)：425-432.

[4] Australian Pesticides and Veterinary Medicines Authority.Pesticides and Veterinary Residues,http://apvma.gov.au/node/10806.

[5] Shao J L,Fan J L,Lin T,Yang D S,Zou Y H,Wang L,Liu H C.J.FoodSaf.Qual.(邵金良,樊建麟,林濤,楊東順,鄒艷虹,王麗,劉宏程.食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào))，2015，6(8)：3255-3261.

[6] Mou Y L,Guo D H,Ding Z P,Yi X H.Chin.J.Anal.Chem.(牟艷莉，郭德華，丁卓平，伊雄海.分析化學(xué))，2013，41(11)：1640-1646.

[7] Yu J N,Meng Q Y,Liu W J,Lu Y L,Ren X L.J.Chromatogr.Sci.,2014，52：1145-1149.

[8] Oulkar D P,Banerjee K.J.AOACInt.，2011，94(6)：1715-1721.

[9] Wang X J,Zhao P,Liu X M,Chen J J,Xu J L,Chen H M,Yan X J.Biomed.Chromatogr.，2014，28：275-280.

[10] Xu S J,Cao H,Chen X Z.FoodSci.(徐生堅(jiān)，曹慧，陳小珍.食品科學(xué))，2013，34(18)：218-222.

[11] Zhang L W,Jiao G R,Wang K,Liu C.J.FoodSaf.Qual.(張瀘文,焦廣睿,王柯,劉暢.食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào))，2016，7(7)：2677-2689.

[12] Huang H H,Zhang J,Xu D M,Zhou Y,Luo J,Lü M L,Chen S B,Wang L Z.Chin.J.Chromatogr.(黃何何，張縉，徐敦明，周昱，羅佳，呂美玲，陳樹(shù)賓，王連珠.色譜)，2014，32(7)：707-716.

[13] Wu P G,Tan Y,Zhang J,Wang L Y,Tang J,Jiang W,Pan X D,Ma B J,Ni Z N,Wang T J.Chin.J.Anal.Chem.(吳平谷，譚瑩，張晶，王立媛，湯鋆，姜維，潘曉東，馬冰潔，倪竹南，王天嬌.分析化學(xué))，2014，42(6)：866-871.

[14] Zhang W H,Xie W,Hou J B,Tong Y K,Lu S,Wang P.J.Instrum.Anal.(張文華，謝文，侯建波，童赟愷，陸順，汪鵬.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2016，35(10)：1241-1247.

[15] Wang L,Luo C Y,Zhang L C,Yu H J.Chin.J.FoodHyg.(王煉，駱春迎，張禮春，余輝菊.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志)，2016，28(4)：451-456.

[16] Yang T,Wang J J,Lu Y.GuangzhouChem.Ind.(楊濤，王靜靜，鹿毅.廣州化工)，2013,41(12)：150-152.

[17] He J L，Peng T，Xie J，Dai H H，Chen D D，Yue Z F，F(xiàn)an C L，Li C.Chin.J.Anal.Chem.(何建麗，彭濤，謝潔，代漢慧，陳冬東，岳振峰，范春林，李存.分析化學(xué))，2015,43(1)：40-48.

Simultaneous Determination of Ten Plant Growth Regulator Residues in Fruit and Bean Sprout by Ultra Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry with Stable Isotope-labelled Internal Standards

LIU Bo-lin*，XIE Ji-an，ZHAO Zi-wei，WANG Xiu-li,SHAN Xiao-mei

(Anhui Provincial Center for Disease Control and Prevention，Hefei 230601，China)

A method for the determination of ten plant growth regulator residues in fruit and bean sprout by ultra performance liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS) was established.The samples were extracted by the stirring and ultrasound using formic acid-acetonitrile(1∶1 000),and purified with the solid phase extraction column.The analytes were separated by using methanol-5 mmol/L ammonium acetate as mobile phase.The identifications were achieved by the electrospray ionization in positive and negative mode(ESI+/ESI-) using the multiple reaction monitoring(MRM).The quantifications were performed by the matrix matched isotope-labelled internal standards.Under the optimal experimental conditions,the calibration curves of ten analytes showed good linearities in the concentration range of 0.1-50.0 μg/L with correlation coefficients(r2) above 0.995.Recoveries were between 52.4% and 119.6% with RSDs less than 13.0%.The limits of detection were 0.2 μg/kg.The method had the advantages of simple pretreatment,good purification and low matrix effects,and was suitable for the rapid,high-throughput quantitative analysis of plant growth regulator residues in fruit and bean sprout.

ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry；plant growth regulator；isotope-labelled internal standards；fruit；bean sprout

2016-12-26；

2017-01-23

10.3969/j.issn.1004-4957.2017.05.004

O657.63；S143.8

A

1004-4957(2017)05-0601-06

*通訊作者：劉柏林，碩士，主管檢驗(yàn)師，研究方向：理化分析，Tel:0551-63674883，E-mail：liubolin087@163.com