利用牛糞濃漿水為原料的光合細(xì)菌發(fā)酵研究

趙 芹, 胡 佩, 喻 鵬, 陳舒平, 劉 詠

(四川師范大學(xué) 化學(xué)與材料學(xué)院, 四川 成都 610066)

利用牛糞濃漿水為原料的光合細(xì)菌發(fā)酵研究

趙 芹, 胡 佩*, 喻 鵬, 陳舒平, 劉 詠

(四川師范大學(xué) 化學(xué)與材料學(xué)院, 四川 成都 610066)

畜禽養(yǎng)殖污染是造成我國農(nóng)村面源污染的主要原因之一.傳統(tǒng)的畜禽糞便處理方式是通過一系列處理方法使其達(dá)標(biāo)排放,浪費(fèi)了其中大量的有機(jī)物、氨氮等物質(zhì).以牛糞水為處理對象,首先篩選破膠劑對其進(jìn)行預(yù)處理,再將其作為微生物培養(yǎng)基,進(jìn)行光合細(xì)菌培養(yǎng).實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在牛糞水中加入破膠劑JP-1處理后得到的上清液作為培養(yǎng)基原料,在溫度為35.5 ℃、pH值為7.67～7.98、最佳光照時(shí)間為48 h的條件下培養(yǎng)光合細(xì)菌,其菌液吸光度達(dá)到2.185.;因此,以牛糞水為原料的光合細(xì)菌培養(yǎng)方法具有可行性.

畜禽糞便; 破膠劑; 光合細(xì)菌; 資源化利用

隨著經(jīng)濟(jì)和社會的發(fā)展,畜牧業(yè)由傳統(tǒng)的分散養(yǎng)殖轉(zhuǎn)向集約化養(yǎng)殖,集約化畜牧業(yè)在提高產(chǎn)能產(chǎn)量的同時(shí),也產(chǎn)生了大量的畜禽糞便[1].畜禽養(yǎng)殖污染是造成我國農(nóng)村面源污染的主要原因之一[2],不僅嚴(yán)重制約農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展,同時(shí)也嚴(yán)重影響社會和諧[3].如何對畜禽糞便進(jìn)行高效合理的處理和利用,顯得至關(guān)重要.

由于畜禽糞便產(chǎn)生量大、含水率高、運(yùn)輸和貯存困難,因此國內(nèi)外都投入了大量的人力、物力、財(cái)力來解決此項(xiàng)問題.現(xiàn)有的畜禽糞便處理技術(shù)主要采用固液分離處理,以期達(dá)到減量化的效果[4-10];然而這一技術(shù)的弊端在于產(chǎn)生了更難處理的牛糞濃漿水,進(jìn)而需對牛糞濃漿水進(jìn)行再一步的處理.在現(xiàn)有工藝中,牛糞濃漿水有2個處理方法.一是進(jìn)入污水處理廠,經(jīng)處理后達(dá)標(biāo)排放;此方法消耗大量經(jīng)濟(jì)成本,同時(shí)牛糞水中富含的有機(jī)物、氨氮等物質(zhì)最終轉(zhuǎn)化成二氧化碳、氮?dú)夂退扰欧胖镰h(huán)境中,無疑浪費(fèi)牛糞水中的資源物質(zhì).二是采用沼氣處理工藝,利用微生物厭氧發(fā)酵、沼氣凈化,產(chǎn)生新能源沼氣達(dá)到資源化利用[11-12];但沼氣化利用也是一把“雙刃劍”,該工藝中會產(chǎn)生大量活性污泥,造成嚴(yán)重的二次污染,同時(shí)產(chǎn)生的沼液、沼渣也處于難處理狀態(tài);目前,大量的跟蹤研究數(shù)據(jù)顯示,沼液、沼渣并不能達(dá)到排放標(biāo)準(zhǔn),長期持續(xù)施用會不同程度的造成土壤重金屬的積累[13-14].

近年來,一類具有光能合成系統(tǒng)的原核微生物——光合細(xì)菌的研究,受到了世界各界人士的關(guān)注.光合細(xì)菌被廣泛地應(yīng)用于污水處理、養(yǎng)殖種植業(yè)、酸性土壤改良等研究中[15-30],對環(huán)境污染物的原位生物修復(fù)具有重要的環(huán)境意義;因此對光合細(xì)菌的研究具有重要的科學(xué)理論指導(dǎo)意義.

光合細(xì)菌的生長主要受pH、營養(yǎng)物質(zhì)(碳源和氮源等)、溫度、光照、厭氧等[31-33]的影響.畜禽糞便中含有大量可供微生物生長利用的營養(yǎng)物質(zhì),如豐富的C、N等元素,且能滿足光合細(xì)菌對營養(yǎng)物質(zhì)的要求;牛糞水pH值為7.67～7.98,呈弱堿性,符合光合細(xì)菌生產(chǎn)條件對pH的要求;此外,溫度和厭氧條件亦處于可控制條件.因此,本實(shí)驗(yàn)利用難處理的牛糞水作為培養(yǎng)基培養(yǎng)光合細(xì)菌,解決牛糞水處理難的問題,應(yīng)用于微生物培養(yǎng)過程中,獲得有價(jià)值的產(chǎn)品,達(dá)到資源化利用.

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 牛糞水試樣 實(shí)驗(yàn)選用新希望示范牧場的新鮮牛糞水,其主要理化性質(zhì)如表1所示.

1.1.2 預(yù)處理藥品 實(shí)驗(yàn)選用自制絮凝劑JP-1、殼聚糖(KJT)和自制絮凝劑LSR作為預(yù)處理試劑.

表 1 牛糞水理化性質(zhì)

1.1.3 實(shí)驗(yàn)用菌種及培養(yǎng)基 本實(shí)驗(yàn)選用市面購買的紅螺菌科紅假單細(xì)胞菌光合細(xì)菌菌液,利用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基(牛肉膏5.0 g,氯化鈉5.0 g,蛋白胨10.0 g,瓊脂粉25.0 g,蒸餾水1 000.0 mL)進(jìn)行分離提純,得到光合細(xì)菌菌種;再用擴(kuò)大培養(yǎng)基(檸檬酸鈉4.0 g,磷酸二氫鉀0.9 g,硫酸銨1.0 g,微量元素1.0 g,酵母膏1.0 g,硫酸鎂0.4 g,蒸餾水1.0 L)培養(yǎng)得到光合細(xì)菌種子液.本實(shí)驗(yàn)所用到的光合細(xì)菌種子液均由此得到.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 牛糞水預(yù)處理 取100 mL牛糞水于潔凈燒杯中,按照破膠劑聚沉質(zhì)量濃度計(jì)算出破膠劑最大添加量,再加入稀釋水,調(diào)節(jié)牛糞水體積分?jǐn)?shù)至50%.用玻璃棒快速攪拌3 min,取100 mL混合液體于潔凈離心管,放于高速離心機(jī)中以4 000 r/min轉(zhuǎn)速離心4 min,取上層清液,作為培養(yǎng)基原料,備用以接種光合細(xì)菌.

1.2.2 光合細(xì)菌培養(yǎng) 選用市面購買的紅螺菌科紅假單細(xì)胞菌光合細(xì)菌菌液,經(jīng)分離提純得到光合細(xì)菌菌種.分離提純的培養(yǎng)基選擇牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,分離純化的方法采用澆注平板法.將純種光合細(xì)菌接種至擴(kuò)大培養(yǎng)基中,培養(yǎng)得到光合細(xì)菌種子液.

取牛糞水預(yù)處理后得到的上清液至潔凈透明聚乙烯瓶,自然條件接種光合細(xì)菌種子液,控制光照、pH值(7.67～7.98)、溫度(35.5 ℃)和培養(yǎng)時(shí)間等,采用OD660值法[34]測定光合細(xì)菌吸光度,得到第一代光合細(xì)菌產(chǎn)品;同時(shí)以光合細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)基作為對照實(shí)驗(yàn).

再以光合細(xì)菌第一代產(chǎn)品作為接種液,連續(xù)接種光合細(xì)菌,培養(yǎng)得到第二代產(chǎn)品;同理培養(yǎng)第三代產(chǎn)品,測定菌液吸光度.

1.2.3 光合細(xì)菌檢測 光合細(xì)菌生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的色素能使菌液顏色產(chǎn)生明顯變化,菌體繁殖越多,則產(chǎn)生的色素越多,菌液的顏色相應(yīng)加深.本實(shí)驗(yàn)采用OD660值法[34]測定光合細(xì)菌生長質(zhì)量濃度.

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

2.1 不同的破膠劑對牛糞濃漿水處理效果

2.1.1 破膠劑初篩選 3種破膠劑對牛糞水的處理效果如圖1所示.加入JP-1處理后,上清液清晰透亮,將離心管倒立放置,固體物質(zhì)保持穩(wěn)定,液體不渾濁.加入KJT處理后,離心效果相對JP-1處理效果渾濁,將離心管倒立放置,固體部分稍有流動.加入LSR處理后,離心也有分層效果,但固體物質(zhì)從體積上多余前2種處理中的固體物質(zhì),將離心管倒立放置,固體物質(zhì)流動性強(qiáng),液體重現(xiàn)渾濁.

2.1.2 牛糞水預(yù)處理后水質(zhì)分析 調(diào)節(jié)3種破膠劑添加量,對牛糞水處理效果如表2所示.根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)知:

1) 破膠劑JP-1處理效果:對比實(shí)驗(yàn)編號JP-1-1～JP-1-8,當(dāng)破膠劑JP-1添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)由1.00%減至0.40%時(shí),離心后平均出水量為91 mL,色度均達(dá)到128倍,濁度為51 ～75 FTU,依次有所增加,平均值為62 FTU.當(dāng)JP-1質(zhì)量分?jǐn)?shù)減少至0.20%時(shí),濁度增加至251 FTU.繼續(xù)減少JP-1用量,質(zhì)量分?jǐn)?shù)從0.16%減少至0.10%時(shí),出水量減少,平均值為85 mL,色度為256倍,濁度范圍為333～756 FTU.對比實(shí)驗(yàn)編號JP-1-9～JP-1-13,當(dāng)破膠劑JP-1質(zhì)量分?jǐn)?shù)同為1.00%時(shí),依次減少稀釋水用量,離心后出水量相應(yīng)減少,平均值為85 mL;隨著稀釋水用量減少,牛糞水體積分?jǐn)?shù)增大,色度增大,牛糞水體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí)色度為128倍,后4組實(shí)驗(yàn)色度值為256倍;濁度也呈遞增趨勢,稀釋水用量降為0時(shí),濁度達(dá)到225 FTU.

表 2 3種破膠劑對牛糞水色度、濁度的降低效果

2) 破膠劑KJT處理效果:對比實(shí)驗(yàn)組KJT-1～KJT-6,牛糞水體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí),破膠劑KJT質(zhì)量分?jǐn)?shù)從0.40%依次減少至0.04%,出水量平均值為83 mL;KJT質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.40%和0.20%時(shí),色度均為128倍,濁度分別為52和69 FTU,繼續(xù)減少KJT用量,色度增大為256倍,濁度也隨用量減少而依次增大,范圍是214～774 FTU.

3) 破膠劑LSR處理效果:對比實(shí)驗(yàn)組LSR-1～LSR-4,牛糞水體積分?jǐn)?shù)為50%,破膠劑LSR質(zhì)量分?jǐn)?shù)從2.00%減少至0.08%,出水量平均值為65 mL;色度從128倍上升至 256倍;濁度值從320增加至796 FTU.

綜上分析,JP-1處理后的出水量高于其余2種破膠劑處理后的出水量;3種處理中色度和濁度均有降低效果,其中按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01%的比例加入破膠劑JP-1處理效果最佳.為探究3種破膠劑處理對后期光合細(xì)菌培養(yǎng)有無影響,分別選取3種破膠劑處理中的最佳添加量,繼續(xù)下一步實(shí)驗(yàn).

2.2 選定的處理劑對光合細(xì)菌生長情況的影響 分別取3種破膠劑預(yù)處理最佳效果(即試驗(yàn)編號JP-1-1、KJT -1、 LSR-1)得到的上清液,接種質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%菌種,觀察光合細(xì)菌生長情況.以牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基作對比實(shí)驗(yàn),結(jié)果見表3.

表 3 光合細(xì)菌生產(chǎn)情況

注：√表示出現(xiàn)生產(chǎn)跡象,×表示無生長跡象.

實(shí)驗(yàn)表明,經(jīng)過JP-1處理后的牛糞水接種光合細(xì)菌,在36 h后出現(xiàn)明顯的生長情況,而另外2種處理均無光合細(xì)菌生長現(xiàn)象.在牛糞水中加入破膠劑KJT和LSR可能對光合細(xì)菌的生長產(chǎn)生抑制作用,因此本實(shí)驗(yàn)最終選定JP-1作為牛糞預(yù)處理有效試劑,進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn).

2.3 光合細(xì)菌擴(kuò)大連續(xù)培養(yǎng)生長情況 用JP-1處理后的牛糞水作為培養(yǎng)基,接種光合細(xì)菌,連續(xù)培養(yǎng),測定其吸光度,得到數(shù)據(jù)如表4所示.以牛糞水為原料,接種光合細(xì)菌菌種,前12 h無生長,生長速率為零;24 h后出現(xiàn)生長跡象,吸光度增加0.536;時(shí)間達(dá)到36 h后吸光度值達(dá)到1.924,增長量為1.358,生長速率為3.77%;48 h后吸光度為2.185,增長量為1.619,生長速率為3.37%;72 h后菌液菌液吸光度為2.243,增加1.677,生長速度為2.33%;96 h后菌液吸光度達(dá)到2.267,增長量為1.701,生長速率為1.77%.綜上,菌液的生長在48 h時(shí)達(dá)到穩(wěn)定期,48 h為最佳培養(yǎng)時(shí)間.對比用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的光合細(xì)菌,牛糞水培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的光合細(xì)菌產(chǎn)品OD660值更高.光合細(xì)菌在連續(xù)倍增培養(yǎng)過程中,OD660值增長趨勢與第一代產(chǎn)品相同,表明其生長特性穩(wěn)定,適合進(jìn)行部分循環(huán)連續(xù)培養(yǎng).

表 4 光合細(xì)菌吸光度測定

3 結(jié)論

1) 本研究利用破膠劑對牛糞水進(jìn)行預(yù)處理,成功打破牛糞水膠體狀態(tài),在干濕分離的基礎(chǔ)上,將牛糞水二次分離.

2) 實(shí)驗(yàn)表明破膠劑JP-1處理后的牛糞水可以作為培養(yǎng)基原料進(jìn)行光合細(xì)菌培養(yǎng),而另外2種破膠劑(LSR和KJT)處理后的牛糞水不能用于培養(yǎng)光合細(xì)菌.以JP-1處理后的牛糞水上清液為培養(yǎng)基,在溫度為35.5 ℃、pH值為7.67～7.98、光照時(shí)間為48 h的條件下培養(yǎng)光合細(xì)菌,其菌液吸光度達(dá)到2.185;且在相同條件下,以牛糞水為培養(yǎng)基可以進(jìn)行光合細(xì)菌部分循環(huán)連續(xù)培養(yǎng).

3) 本實(shí)驗(yàn)利用牛糞水為原料進(jìn)行光合細(xì)菌培養(yǎng)的方法具有可行性.

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(編輯 余 毅)

Thick Slurry of Cow Dung as Raw Material for Fermentation of Photosynthetic Bacteria

ZHAO Qin, HU Pei, YU Peng, CHEN Shuping, LIU Yong

(CollegeofChemistry&Materials,SichuanNormalUniversity,Chengdu610066,Sichuan)

Agricultural non-point source pollution with livestock waste is a nationwide issue of major concern. To solve the problems in the current livestock excrements treatment process, such as the waste of organic materials and ammonia nitrogen, the cow dung thick slurry is used as the nutrient medium to cultivate photosynthetic bacteria in this paper. Before the bacterial culture, the gel breaker was used as a pretreatment agent to reduce the chromaticity of cow dung thick slurry. The results indicated that the photosynthetic bacteria is achieved under the condition of the temperature is 35.5 ℃, pH is 7.67 to 7.98 and the best illumination time is 48 hours, and the bacteria liquid absorbance is as high as 2.185. This method that using the cow dung thick slurry as the nutrient medium to cultivate photosynthetic bacteria is feasible.

livestock and poultry dung; gel breaker; photosynthetic bacteria; resource utilization

2016-07-18

四川省教育廳自然科學(xué)重點(diǎn)基金(15ZA008)

X172

A

1001-8395(2017)03-0352-05

10.3969/j.issn.1001-8395.2017.03.014

*通信作者簡介:胡 佩(1965—),男,副教授,主要從事環(huán)境微生物學(xué)的研究,E-mail:1020968458@qq.com