右旋雷貝拉唑鈉對反流性食管炎模型大鼠炎性因子及血管活性腸肽的影響

桂 元，王 礫，詹繼東，李 娥，黃 沁，徐 芳

華中科技大學(xué)校醫(yī)院內(nèi)科，湖北 武漢 430074

右旋雷貝拉唑鈉對反流性食管炎模型大鼠炎性因子及血管活性腸肽的影響

桂 元，王 礫，詹繼東，李 娥，黃 沁，徐 芳

華中科技大學(xué)校醫(yī)院內(nèi)科，湖北 武漢 430074

目的 探討右旋雷貝拉唑鈉對反流性食管炎模型大鼠炎性因子及血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide, VIP)的影響。方法 選擇60只SPF級大鼠為研究對象，隨機(jī)分為空白對照組、模型組、雷貝拉唑鈉組(4 mg/kg)、小劑量右旋雷貝拉唑鈉組(2 mg/kg)和大劑量右旋雷貝拉唑鈉組(4 mg/kg)，空白組不作任何處理，其余4組建立大鼠反流性食管炎模型，觀察各組大鼠食管炎指數(shù)、食管炎抑制率、炎性因子及VIP表達(dá)水平。結(jié)果 大劑量右旋雷貝拉唑鈉組食管炎指數(shù)明顯低于雷貝拉唑鈉組，抑制率明顯高于雷貝拉唑鈉組(t=3.725，7.595，P<0.05)，一氧化氮(NO)、白細(xì)胞介素-6 (IL-6)水平均明顯低于雷貝拉唑鈉組(t=2.054，6.386，P<0.05)，VIP明顯低于雷貝拉唑鈉組，P物質(zhì)(SP)明顯高于雷貝拉唑鈉組(t=2.826，3.162，P<0.05)；小劑量右旋雷貝拉唑鈉與雷貝拉唑鈉食管炎指數(shù)等差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 右旋雷貝拉唑鈉有通過降低炎性因子及VIP的表達(dá)，提高興奮性多肽類神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)來發(fā)揮治療反流性食管炎的作用，相同劑量條件下，右旋雷貝拉唑鈉作用效果強(qiáng)于雷貝拉唑鈉。

反流性食管炎；右旋雷貝拉唑鈉；炎性因子；血管活性腸肽

反流性食管炎( reflux esophagitis, RE) 是抗反流防御機(jī)制減弱和反流物對食管黏膜攻擊作用的結(jié)果，胃及十二指腸內(nèi)容物逆流進(jìn)入食管，食物及胃酸中的化學(xué)成分損傷食管黏膜，導(dǎo)致胸悶、疼痛、燒灼感等一系列臨床癥狀和體征，長期反復(fù)的RE引起食管狹窄，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量[1]。雷貝拉唑是治療RE的常用質(zhì)子泵抑制劑類藥物，長期大劑量使用會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥、高胃泌素血癥[2]。右旋雷貝拉唑?yàn)樾滦唾|(zhì)子泵抑制劑，具有代謝半衰期長、療效可靠、不良反應(yīng)輕的特點(diǎn)，可更高效地抑制胃壁細(xì)胞H+-K+-ATP酶活性來降低胃酸分泌[3]。本文通過建立動(dòng)物模型的方法，探討右旋雷貝拉唑鈉對大鼠RE模型炎性因子及血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide, VIP)的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 12 周齡SPF級大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量250～300 g，購自某大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心(許可證號：151012)，本次研究經(jīng)醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 藥品、試劑及儀器 右旋雷貝拉唑鈉、雷貝拉唑鈉腸溶片：上海信誼藥廠有限公司(批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20031292，規(guī)格：10 mg/片)生產(chǎn)；一氧化氮(NO)試劑盒購自南京建成生物工程研究所(批號20131120)；血管活性腸肽(VIP)試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司(批號BA0134)；P物質(zhì)(SP)試劑盒購自武漢博士德(批號BA0126-1)；即用型SABC 免疫組化染色試劑盒購自武漢博士德(批號:SA1028)；YP3001N 型電子天平：上海精密科學(xué)儀器有限公司；高速離心機(jī)：德國賀利氏公司Fresco17； 酶聯(lián)免疫檢測儀：芬蘭雷勃集團(tuán)MK3；ELISA試劑盒：R&D 公司；切片機(jī)：德國Leica 公司RM2255： 光學(xué)顯微鏡：日本Olympus 公司SZ61 。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組及建模：將60只健康大鼠隨機(jī)分為空白對照組、模型組、雷貝拉唑組、小劑量右旋雷貝拉唑組及大劑量右旋雷貝拉唑組各12只。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，空白組不作任何處理，其余4組建立大鼠單純酸性反流性食管炎模型[4]。禁食14 h 后，腹腔注射3.5%水合氯醛(3 ml/kg) 麻醉后，將大鼠仰臥固定于手術(shù)臺(tái)，無菌操作下在上腹部正中取約3 cm切口進(jìn)腹，暴露食管下段及胃食管交界區(qū)后，行不全幽門結(jié)扎+賁門肌切開術(shù)，用細(xì)針及0號細(xì)線縫扎胃左動(dòng)脈分支，然后與食管-胃交界處縱行切開賁門肌0.5～1.0 cm，分離至黏膜層；避開血管，在幽門與十二指腸交界近幽門處半結(jié)扎幽門；最后吸凈大鼠腹腔中的液體，注入生理鹽水1 ml+慶大霉素10 000 IU后關(guān)腹。術(shù)后禁食不禁水24 h，置于34 ℃、相對濕度 93%的環(huán)境中，在普通飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上，給予10% 蜂蜜、10%白糖混合飲料自由飲用，術(shù)后3 周即大鼠RE造模成功。

1.3.2 藥物治療：空白對照組和模型組均給予1 ml/100 g 的生理鹽水灌胃，雷貝拉唑組給予4 mg/kg雷貝拉唑溶液灌胃，小劑量右旋雷貝拉唑鈉組給予2 mg/kg的右旋雷貝拉唑鈉灌胃，大劑量右旋雷貝拉唑組則給予4 mg/kg的右旋雷貝拉唑鈉灌胃。所有右旋雷貝拉唑鈉大鼠均給藥1 次/d，連續(xù)灌胃8周。大鼠造模及藥物處理過程中各組均無死亡。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 食管炎指數(shù)和抑制率：末次給藥24 h后，所有大鼠腹腔注射2% 戊巴比妥鈉40 mg/kg麻醉后處死，沿賁門向上鈍性分離并剪取食管3～4 cm，肉眼觀察食管黏膜大體表現(xiàn)；用生理鹽水沖洗食管腔，取0.2 g勻漿，其余食管組織用10%甲醛固定后石蠟包埋切片，常規(guī)HE 染色及免疫組織化學(xué)法染色。參照《反流性食管炎診斷及治療指南》[5]中分級和評分判斷食管炎指數(shù)。0分：食管黏膜正常；1分：食管黏膜點(diǎn)狀或條狀發(fā)紅，糜爛<2處，伴鱗狀上皮增生、上皮細(xì)胞層內(nèi)炎細(xì)胞浸潤；2分：糜爛≥2 處；3分：潰瘍形成，糜爛融合< 75%；4分：糜爛融合≥75%，伴Barrett 食管改變。食管炎抑制率=(模型組食管炎指數(shù)-藥物組食管炎指數(shù))/模型食管炎指數(shù)×100%[6]。

1.4.2 食管組織中炎性因子水平：將0.2 g 食管組織制備2 ml 勻漿，4 ℃下10 000 r/min 離心(離心半徑5 cm)10 min，取上清液1 ml。檢測時(shí)用酶標(biāo)儀比色，以空白調(diào)零，記錄吸光度A，將標(biāo)準(zhǔn)液濃度與相應(yīng)的吸光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得斜率K，NO 含量=A/K[7]。同時(shí)采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測標(biāo)本中白細(xì)胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)水平。

1.4.3 VIP：采用放射免疫沉淀法檢測食管黏膜中VIP、SP含量。

2 結(jié)果

2.1 食管炎指數(shù)及食管炎抑制率 藥物組大鼠食管炎指數(shù)明顯低于模型組(P<0.05)；大劑量右旋雷貝拉唑鈉組食管炎指數(shù)明顯低于雷貝拉唑鈉組，抑制率明顯高于雷貝拉唑鈉組(P<0.05)；雷貝拉挫拉鈉組與小劑量右旋雷貝拉唑組食管炎指數(shù)、食管炎抑制率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表1)。

2.2 大鼠食管組織中炎性因子 模型組大鼠食管組織中NO、IL-6水平均明顯高于空白對照組(P<0.05)；藥物組NO、IL-6水平均明顯低于模型組(P<0.05)；大劑量右旋雷貝拉唑鈉組NO、IL-6水平均明顯低于雷貝拉唑鈉組(P<0.05)，雷貝拉唑鈉組與小劑量右旋雷貝拉唑鈉組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表2)。

2.3 血管活性腸肽及P物質(zhì) 模型組血管活性腸肽VIP表達(dá)水平明顯高于空白對照組，SP明顯低于空白對照組(P<0.05)；藥物組VIP明顯低于模型組，SP明顯高于模型組(P<0.05)；大劑量右旋雷貝拉唑鈉組VIP明顯低于雷貝拉唑鈉組，SP明顯高于雷貝拉唑鈉組(P<0.05)，雷貝拉唑鈉組與小劑量右旋雷貝拉唑鈉組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表3)。

組別只數(shù)食管炎指數(shù)(分)食管炎抑制率(%)空白對照組12--模型組123.19±0.84-雷貝拉唑鈉組122.12±0.39①33.86±4.32小劑量右旋雷貝拉唑鈉組122.30±0.40①28.23±3.85大劑量右旋雷貝拉唑鈉組121.61±0.27①②48.75±5.24②

注：與模型組比較，t=2.504～4.803，①P<0.05；與雷貝拉唑鈉組比較，t=3.725, 7.595, ②P<0.05。

組別只數(shù)NO(μmol/L)IL-6(μg/L)空白對照組1262.38±16.8738.26±4.83模型組12106.11±18.96①110.82±13.67①雷貝拉唑鈉組1264.95±16.04②65.13±10.45②小劑量右旋雷貝拉唑鈉組1265.23±16.85②66.04±10.29②大劑量右旋雷貝拉唑鈉組1253.02±11.12②③42.56±6.38②③

注：與空白對照組比較，t=5.969, 17.337，①P<0.05；與模型組比較，t=5.722～15.675，②P<0.05；與雷貝拉唑鈉組比較，t=2.054, 6.386，③P<0.05。

組別只數(shù)VIPSP空白對照組1281.67±10.03164.28±15.16模型組12143.05±12.74①123.11±12.65①雷貝拉唑鈉組12100.86±11.09②137.96±14.12②小劑量右旋雷貝拉唑鈉組12102.43±11.28②134.58±10.47②大劑量右旋雷貝拉唑鈉組1288.59±10.16②③155.63±13.24②③

注：與空白對照組比較，t=13.113, 7.223，①P<0.05；與模型組比較，t=2.714～11.577，②P<0.05；與雷貝拉唑鈉組比較，t=2.826, 3.162，③P<0.05。

3 討論

RE是一種胃食管反流病，系指胃內(nèi)容物反流入食管，酸性胃液、膽汁、胰液刺激食管黏膜，引起食管炎癥、糜爛及潰瘍，長期RE可導(dǎo)致食管黏膜纖維化及癌變[8]。質(zhì)子泵抑制劑是治療反流性食管炎等胃腸道疾病的常用藥物。臨床常用的質(zhì)子泵抑制劑保留奧美拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑、雷貝拉唑等，使用的制劑多為消旋體。建立大鼠RE模型后，采用雷貝拉唑和不同劑量的右旋雷貝拉唑灌胃治療，結(jié)果顯示，藥物治療組大鼠食管炎指數(shù)明顯低于模型組，Hashimoto 也有類似的實(shí)驗(yàn)研究[9]，證實(shí)質(zhì)子泵抑制劑對治療RE有較好的療效。

雷貝拉唑是第三代質(zhì)子泵抑制劑，包括左旋和右旋兩種光學(xué)異構(gòu)體，左旋和右旋之比為1∶1，目前市場上使用的活性成分為左旋和右旋光學(xué)異構(gòu)體的消旋混合物[10]。相關(guān)研究表明，左旋和右旋的活性完全不同，右旋異構(gòu)體雷貝拉唑代謝半衰期長，最低有效劑量小，藥理作用明顯強(qiáng)于左旋異構(gòu)體雷貝拉唑與消旋體，能夠明顯提高藥理效果并降低不良反應(yīng)[11]。

內(nèi)源性NO 作為一種神經(jīng)調(diào)節(jié)遞質(zhì)和重要的炎癥介質(zhì)，不僅能調(diào)控食管神經(jīng)肌肉，導(dǎo)致食管擴(kuò)約肌松弛[12]，還參與食管黏膜的急、慢性炎癥。本研究中，模型組大鼠食管組織中NO及IL-6水平均高于空白對照組，表明RE患者存在明顯的炎性反應(yīng)。給予雷貝拉唑鈉、右旋雷貝拉唑鈉治療后， NO及IL-6水平均明顯降低，大劑量右旋雷貝拉唑鈉組NO、IL-6水平明顯低于雷貝拉唑組，小劑量組和雷貝拉唑組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示在使用相同劑量的前提下，右旋雷貝拉唑有助于降低反流性食管炎模型大鼠炎性因子表達(dá)水平，且不增加不良反應(yīng)。

食管下段的環(huán)形平滑肌受非腎上腺素能非膽堿能(non-adrenergic non-cholinergic，NANC) 神經(jīng)支配，NANC 神經(jīng)受抑制后引起食管下括約肌松弛，導(dǎo)致RE 發(fā)生。VIP 是NANC 神經(jīng)的主要抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，是介導(dǎo)下食管括約肌松弛的重要原因[13]。NO由NOS催化產(chǎn)生，是導(dǎo)致食管下段括約肌松馳的直接原因，而且NO的釋放還能刺激VIP的產(chǎn)生，進(jìn)一步加重RE癥狀[14]。SP為興奮性肽能神經(jīng)遞質(zhì)，作用于食管壁各層，能促進(jìn)下食管括約肌的收縮[15]。本結(jié)果中，藥物組VIP明顯低于模型組，SP明顯高于模型組，大劑量右旋雷貝拉唑組VIP明顯降低雷貝拉唑組，SP明顯高于雷貝拉唑組，提示右旋雷貝拉唑有助于降低VIP的表達(dá)水平，增強(qiáng)興奮性多肽類神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)。

本文研究結(jié)果表明，右旋雷貝拉唑鈉可能通過降低炎性因子及VIP的表達(dá)，提高興奮性多肽類神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)來發(fā)揮治療反流性食管炎的作用，而且在相同劑量的前提下，右旋雷貝拉唑鈉治療效果更好，臨床可根據(jù)實(shí)際情況，調(diào)整用藥劑量，以減少不良反應(yīng)。

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(責(zé)任編輯：馬 軍)

The impact of dexrabepraxole sodoum on inflammatory factor and vasoactive intestinal peptide of reflux esophagitis model rats

GUI Yuan, WANG Li, ZHAN Jidong, LI E, HUANG Qin, XU Fang

Department of Internal Medicine, School Hospital of Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074, China

Objective To investigate effect of dexrabepraxole sodoum on inflammatory factor and vasoactive intestinal peptide of reflux esophagitis model rats.Methods Sixty SPF rats were randomly divided into blank control group, model group, rabeprazole sodium group (4 mg/kg), low-dose dexrabepraxole sodoum group (2 mg/kg), high-dose dexrabepraxole sodoum group (4 mg/kg). Blank control group was no any treatment, rats in other four groups were established reflux esophagitis rats model, then esophagitis index, esophagitis inhibition rate, inflammatory cytokines and vasoactive intestinal peptide expression level were compared.Results Esophagitis index in high-dose dexrabepra xole sodoum group was significantly lower than that in rabeprazole sodium group, inhibition rate was significantly higher than that in the rabeprazole sodium group (t=3.725, 7.595,P<0.05), NO, IL-6 levels were significantly lower than those in rabeprazole sodium group (t=2.054, 6.386,P<0.05), VIP was significantly lower than that in rabeprazole sodium group, SP was significantly higher than that in rabeprazole sodium group (t=2.826, 3.162,P<0.05); there were no statistical differences of esophagitis index and so on between low-dose dexrabepraxole sodoum group and rabeprazole sodium group (P>0.05).Conclusion Dexrabepraxole sodoum can reduce inflammatory cytokines and vasoactive intestinal peptide, improve the excitatory expressed peptide neurotransmitters more to play the role of the treatment of reflux esophagitis, under the condition of the same dose, the effect of dexrabepraxole sodoum is better than rabeprazole sodium.

Reflux esophagitis; Dexrabepraxole sodoum; Inflammatory cytokines; Vasoactive intestinal peptide

10.3969/j.issn.1006-5709.2017.05.016

桂元，醫(yī)學(xué)碩士，主治醫(yī)師。E-mail： jimfly2014@qq.com

徐芳，醫(yī)學(xué)碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：神經(jīng)內(nèi)科臨床研究。E-mail： xufang008@foxmail.com

R571

A

1006-5709(2017)05-0539-04

2016-08-30