左乙拉西坦注射液與3種注射液的配伍穩(wěn)定性考察

黃鳳玲，宋艷霞，李直，馬曉黎，楊明波，李波（抗生素研究與再評(píng)價(jià)四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/成都大學(xué)四川抗菌素工業(yè)研究所，成都610052）

左乙拉西坦注射液與3種注射液的配伍穩(wěn)定性考察

黃鳳玲＊，宋艷霞，李直，馬曉黎，楊明波，李波#（抗生素研究與再評(píng)價(jià)四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/成都大學(xué)四川抗菌素工業(yè)研究所，成都610052）

目的：考察左乙拉西坦（Lev）注射液與3種注射液的配伍穩(wěn)定性。方法：取Lev注射液各1 000 mg分別與0.9%氯化鈉注射液100 mL、5%葡萄糖注射液100 mL和乳酸鈉林格注射液100 mL配伍，在25℃未避光條件下，分別于配制后24 h不同時(shí)間點(diǎn)觀察各配伍液的顏色和澄清度，測(cè)定其pH值和不溶性微粒數(shù)，并采用高效液相色譜法測(cè)定各配伍液中相關(guān)雜質(zhì)（雜質(zhì)A、B、C、D和2-羥基吡啶）和Lev的含量。結(jié)果：在上述條件下，各配伍液在24 h內(nèi)均為無色澄清液體，pH值無明顯變化（RSD＜1%，n＝7），不溶性微粒數(shù)均未超出2015年版《中國藥典》規(guī)定的范圍；未檢出雜質(zhì)B和雜質(zhì)C，其余雜質(zhì)的含量均符合國外各藥典的限度要求；Lev的相對(duì)百分含量無明顯變化（RSD＜1%，n＝7）。結(jié)論：Lev注射液與0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液和乳酸鈉林格注射液配伍后，在25℃未避光條件下24 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

左乙拉西坦注射液；氯化鈉注射液；葡萄糖注射液；乳酸鈉林格注射液；配伍；穩(wěn)定性；高效液相色譜法

左乙拉西坦（Levetiracetam，Lev）為吡咯烷酮衍生物，于2000年4月獲FDA批準(zhǔn)上市，主要用于治療局限性和繼發(fā)性全身性癲癇，具有較強(qiáng)的抗癲癇作用，可有效地控制癲癇發(fā)作[1-4]。目前，Lev注射液的原研制劑（商品名：Keppra）尚未獲準(zhǔn)進(jìn)入我國市場(chǎng)，國產(chǎn)Lev注射液也正在進(jìn)行生產(chǎn)報(bào)批。鑒于此，本研究參考美國藥典（USP）的方法[5]，對(duì)國產(chǎn)Lev注射液與3種常用注射液[0.9%氯化鈉注射液（0.9%NS）、5%葡萄糖注射液（5% GS）和乳酸鈉林格注射液]的配伍穩(wěn)定性進(jìn)行考察，以期為其質(zhì)量管理和臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010 CHT型液相色譜系統(tǒng)、LC-20AD型液相色譜系統(tǒng)（日本島津公司）；FE20型pH計(jì)（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；YB-Ⅱ型澄明度檢測(cè)儀（天津大學(xué)精密儀器廠）；GWJ-4型智能微粒檢測(cè)儀（天津天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 藥品與試劑

Lev注射液[成都天臺(tái)山制藥有限公司，批號(hào)：130402（Ⅱ），規(guī)格：5 mL∶500 mg]；0.9%NS（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H51021158，規(guī)格：500 mL∶4.5 g）；5%GS（批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H51022443，規(guī)格：500 mL∶25 g）和乳酸鈉林格注射液（批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H20043897，規(guī)格：500 mL）均購自四川美大康佳樂藥業(yè)有限公司。

Lev對(duì)照品（美國藥典委員會(huì)，批號(hào)：1359404，純度：99.8%）；Lev工作對(duì)照品（用Lev對(duì)照品自標(biāo)化，海南萬特制藥有限公司，批號(hào)：S130402，純度：100.6%）；2-羥基吡啶對(duì)照品（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號(hào)：1040918，純度：97%）；（S）-2-（2-吡咯烷酮-1）丁酸對(duì)照品（歐洲藥品質(zhì)量管理局，以下簡稱雜質(zhì)A，批號(hào)：Y0001254，純度：100%）；（2Z）-2-（2-吡咯烷酮-1）丁酰胺對(duì)照品（歐洲藥品質(zhì)量管理局，以下簡稱雜質(zhì)B，批號(hào)：Y0001255，純度：100%）；（S）-N-（1-氨-1-丁酮-2）-4-氯丁酰胺對(duì)照品（美國藥典委員會(huì)，以下簡稱雜質(zhì)C，批號(hào)：1359426，純度：100%）；（S）-2-氨基丁酰胺對(duì)照品（美國藥典委員會(huì)，以下簡稱雜質(zhì)D，批號(hào)：1359437，純度：100%）；雜質(zhì)D工作對(duì)照品[（S）-2-氨基丁酰胺鹽酸鹽（用雜質(zhì)D自標(biāo)化），海南萬特制藥有限公司，批號(hào)：ABAH-1211170，純度：100%]；輔料[氯化鈉（江蘇省勤奮藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20120827，純度：99.9%）；氫氧化鈉（湖南爾康制藥股份有限公司，批號(hào)：20111105，純度：99.7%）；冰乙酸（廣東省臺(tái)山市新寧制藥有限公司，批號(hào)：20130203，純度：99.8%）]。乙腈為色譜純，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果[5]

2.1 色譜條件

2.1.1 色譜條件一色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相（簡稱流動(dòng)相一）：癸烷磺酸鈉溶液（取癸烷磺酸鈉1.22 g，用水適量溶解，加磷酸1.3 mL，用水稀釋至1 000 mL，用20%氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值至3.0）-乙腈（82∶18，V/V）；檢測(cè)波長：200 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：50μL。

2.1.2 色譜條件二色譜柱：Welchrom C18（150 mm× 4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-2.7 g/L磷酸二氫鉀水溶液（用2%氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH值至5.5）（1∶19，V/V）混合溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0～3 min，100%A；＞3～20 min，100%A→71%A；＞20～25 min，71%A→100% A；＞25～30 min，100%A）；檢測(cè)波長：205 nm；流速：0.9 mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 配伍液模擬國外臨床常用劑量，在25℃未避光條件下，取Lev注射液6支，各取2支（1 000 mg）加至0.9%NS 100 mL、5%GS 100 mL和乳酸鈉林格注射液100 mL中，得Lev質(zhì)量濃度均為9 090μg/mL的配伍液。

2.2.2 對(duì)照品貯備液（1）雜質(zhì)D對(duì)照品貯備液：精密稱取雜質(zhì)D工作對(duì)照品10.0 mg，置20 mL量瓶中，用流動(dòng)相一溶解并定容，再用流動(dòng)相一稀釋成質(zhì)量濃度為50μg/mL的溶液。（2）2-羥基吡啶對(duì)照品貯備液：精密稱取2-羥基吡啶對(duì)照品10.0 mg，置50 mL量瓶中，用色譜條件二中的流動(dòng)相A相（以下簡稱“流動(dòng)相二”）溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為200μg/mL的溶液。（3）雜質(zhì)A對(duì)照品貯備液：精密稱取雜質(zhì)A對(duì)照品15.0 mg，置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相二溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為300μg/mL的溶液。（4）雜質(zhì)B對(duì)照品貯備液：精密稱取雜質(zhì)B對(duì)照品10.0 mg，置100 mL量瓶中，用流動(dòng)相二溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為100μg/mL的溶液。（5）雜質(zhì)C對(duì)照品貯備液：精密稱取雜質(zhì)C對(duì)照品10.0 mg，置100 mL量瓶中，用流動(dòng)相二溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為100μg/mL的溶液。（6）Lev對(duì)照品貯備液：精密稱取Lev工作對(duì)照品25.0 mg，置25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相二溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為1 000μg/mL的溶液。

2.2.3 供試品溶液（1）雜質(zhì)D供試品溶液：精密量取Lev注射液適量，用流動(dòng)相一稀釋成Lev質(zhì)量濃度為2 000 μg/mL的溶液。（2）有關(guān)物質(zhì)供試品溶液：精密量取Lev注射液適量，用流動(dòng)相二稀釋成Lev質(zhì)量濃度為5 000 μg/mL的溶液。（3）Lev供試品溶液：精密量取Lev注射液適量，用流動(dòng)相二稀釋成Lev質(zhì)量濃度為100μg/mL的溶液。

2.2.4 對(duì)照品溶液（1）雜質(zhì)D對(duì)照品溶液：精密量取雜質(zhì)D對(duì)照品貯備液適量，用流動(dòng)相一稀釋配制成雜質(zhì)D質(zhì)量濃度為2μg/mL的溶液。（2）有關(guān)物質(zhì)對(duì)照品溶液：精密量取Lev對(duì)照品貯備液適量，用流動(dòng)相二稀釋成Lev質(zhì)量濃度為5μg/mL的溶液。（3）Lev對(duì)照品溶液：精密量取Lev對(duì)照品貯備液適量，用流動(dòng)相二稀釋成Lev質(zhì)量濃度為100μg/mL的溶液。

2.2.5 空白溶液除不加Lev外，其他輔料正常加入，并按“2.2.1”項(xiàng)下方法配制，即得空白對(duì)照。精密量取上述空白對(duì)照適量，按“2.2.3”項(xiàng)下雜質(zhì)D供試品溶液稀釋方法配制空白溶液A；精密量取上述空白對(duì)照適量，按“2.2.3”項(xiàng)下有關(guān)物質(zhì)供試品溶液稀釋方法配制空白溶液B。

2.2.6 混合溶液（1）混合溶液A：精密量取2-羥基吡啶、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C和Lev對(duì)照品貯備液各適量，用流動(dòng)相二配制成雜質(zhì)限度濃度（2-羥基吡啶1.25μg/mL、雜質(zhì)A 15μg/mL、雜質(zhì)B 2.5μg/mL、雜質(zhì)C 2.5μg/mL）和Lev 100μg/mL的溶液。（2）混合溶液B：精密量取2-羥基吡啶、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C對(duì)照品貯備液各適量，用流動(dòng)相二配制成各雜質(zhì)限度濃度（同混合溶液A）的溶液。

2.3 測(cè)定方法

2.3.1 雜質(zhì)D測(cè)定按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件一，分別精密量取“2.2”項(xiàng)下雜質(zhì)D供試品溶液和雜質(zhì)D對(duì)照品溶液各50μL，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品溶液中雜質(zhì)D的含量（%）。

2.3.2 有關(guān)物質(zhì)檢查按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件二，分別精密量取“2.2”項(xiàng)下有關(guān)物質(zhì)供試品溶液和有關(guān)物質(zhì)對(duì)照品溶液各10 μL，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。按加校正因子的主成分對(duì)照法計(jì)算2-羥基吡啶、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B和雜質(zhì)C的含量（%）（以Lev對(duì)照品線性回歸方程斜率與各雜質(zhì)對(duì)照品線性回歸方程斜率的比值來計(jì)算各雜質(zhì)的校正因子，校正因子分別為1.10、0.77、0.27、1.85）。

2.3.3 Lev含量測(cè)定按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件二，精密量取“2.2”項(xiàng)下Lev供試品溶液和Lev對(duì)照品溶液各10 μL，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算Lev的含量（%）。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性考察在“2.1”項(xiàng)色譜條件下，各待測(cè)物峰形良好，雜質(zhì)D、有關(guān)物質(zhì)（2-羥基吡啶、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C）和Lev的保留時(shí)間分別為9.733、3.972、5.831、7.939、14.779和11.590 min，詳見圖1、圖2。

圖1 HPLC色譜圖（色譜條件一）Fig 1 HPLC chromatograms（chromatogram condition one）

圖2 HPLC色譜圖（色譜條件二）Fig 2 HPLC chromatograms（chromatogram condition two）

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與定量下限的考察（1）雜質(zhì)D：精密量取“2.2.2”項(xiàng)下雜質(zhì)D對(duì)照品貯備液適量，用流動(dòng)相一稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.15、0.38、0.76、1.52、3.79、15.18μg/mL的雜質(zhì)D系列溶液。（2）有關(guān)物質(zhì)：精密量取“2.2.2”項(xiàng)下2-羥基吡啶對(duì)照品貯備液適量，用流動(dòng)相二稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.06、1.00、5.00、10.00、50.00、100.00μg/mL的2-羥基吡啶系列溶液；精密量取“2.2.2”項(xiàng)下雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C對(duì)照品貯備液各適量，用流動(dòng)相二稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.08、1.50、3.00、15.00、60.00、150.00μg/mL的雜質(zhì)A系列溶液，質(zhì)量濃度分別為0.04、0.40、4.00、10.00、25.00、50.00μg/mL的雜質(zhì)B系列溶液，質(zhì)量濃度分別為0.60、1.20、10.00、12.00、25.00、50.00μg/mL的雜質(zhì)C系列溶液。（3）Lev：精密量取“2.2.2”項(xiàng)下Lev對(duì)照品貯備液適量，用流動(dòng)相二稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.05、0.25、0.50、5.00、50.00、500.00 μg/mL的Lev系列溶液。取上述系列溶液各適量，分別按“2.1.1”和“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以待測(cè)物質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)、相應(yīng)色譜峰峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。將各對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋，以確定檢測(cè)限（信噪比為3.0）。結(jié)果顯示，雜質(zhì)D、2-羥基比啶、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C和Lev的質(zhì)量濃度分別在0.15～15.18、0.06～100.00、0.08～150.00、0.04～50.00、0.60～50.00、0.05～500.00μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＞0.999 0），定量下限分別為0.15、0.06、0.08、0.04、0.60、0.05μg/mL，檢測(cè)限分別為0.03、0.01、0.04、0.01、0.30、0.03μg/mL，詳見表1。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn)（1）雜質(zhì)D：按“2.2.4”項(xiàng)下雜質(zhì)D對(duì)照品溶液的配制方法，重復(fù)配制6份；按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果顯示，雜質(zhì)D的平均峰面積為41 105（RSD＝1.80%，n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。（2）有關(guān)物質(zhì)：按“2.2.6”項(xiàng)下混合溶液B的配制方法，重復(fù)配制6份；按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果顯示，2-羥基吡啶、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B和雜質(zhì)C的平均峰面積分別為21 565、452 408、204 813和6 389（RSD分別為0.95%、2.61%、3.55%和0.92%，n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。（3）Lev：按“2.2.4”項(xiàng)下Lev對(duì)照品溶液的配制方法，重復(fù)配制6份。按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果顯示，Lev的平均峰面積為2 454 867（RSD＝0.80%，n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

表1 各待測(cè)物的回歸方程、定量下限和檢測(cè)限Tab 1 Regression equations，limit of quantitation and limit of detection

2.4.4 回收率試驗(yàn)（1）雜質(zhì)D：精密量取“2.2.2”項(xiàng)下雜質(zhì)D對(duì)照品貯備液各適量，加至Lev注射液中，用流動(dòng)相一分別稀釋成含Lev 2 000μg/mL和雜質(zhì)D 1.6、2.0、2.4μg/mL的混合溶液各3份，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，雜質(zhì)D的回收率為97.89～101.74%（RSD＝1.50%，n＝9）。（2）有關(guān)物質(zhì)：精密量取“2.2.2”項(xiàng)下2-羥基吡啶對(duì)照品貯備液各適量，加入至Lev注射液中，用流動(dòng)相二分別稀釋成含Lev 5 000 μg/mL和2-羥基吡啶1.00、1.25、1.50μg/mL的混合溶液各3份；精密量取“2.2.2”項(xiàng)下雜質(zhì)A、雜質(zhì)B和雜質(zhì)C對(duì)照品貯備液各適量，同法配制成含Lev 5 000μg/mL和雜質(zhì)A 12、15、18μg/mL，含Lev 5 000μg/mL和雜質(zhì)B 2.0、2.5、3.0μg/mL，含Lev 5 000μg/mL和雜質(zhì)C 2.0、2.5、3.0μg/mL的混合溶液各3份。按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，2-羥基吡啶、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C的回收率分別為99.77～101.48%、99.35～101.62%、98.49～99.58%、95.93～104.33%（RSD分別為0.68%、0.76%、0.32%和3.07%，n＝9）。（3）Lev：精密稱取Lev工作對(duì)照品適量，用流動(dòng)相二稀釋，配制成質(zhì)量濃度為80、100、120 μg/mL的溶液各3份，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，Lev的回收率為99.40～100.70%（RSD＝0.46%，n＝9）。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)（1）雜質(zhì)D：配制雜質(zhì)D低、高質(zhì)量濃度（雜質(zhì)D 2 μg/mL，Lev 2 000 μg/mL）的溶液，考察其在室溫條件下的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，各樣品在室溫下放置1 h穩(wěn)定（RSD＜5%，n＝6）。（2）有關(guān)物質(zhì)：配制有關(guān)物質(zhì)低、高質(zhì)量濃度（2-羥基吡啶1.25μg/mL、雜質(zhì)A 15μg/mL、雜質(zhì)B 2.5μg/mL、雜質(zhì)C 2.5μg/mL，Lev 5 000 μg/mL）的溶液，考察其在室溫條件下的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，各樣品在室溫下放置17 d穩(wěn)定（RSD＜5%，n＝ 6）。（3）配制Lev高質(zhì)量濃度（Lev 100 μg/mL）的溶液，考察其在室溫條件下的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，樣品在室溫下放置50 h穩(wěn)定（RSD＜1%，n＝6）。

2.5 配伍穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.5.1 顏色、澄清度和pH值的變化取“2.2.1”項(xiàng)下配伍液各適量，在25℃未避光條件下，分別于配制后0、1、2、4、6、8、24 h時(shí)參照2015年版《中國藥典》（四部）通則中“溶液顏色檢查法”、“澄清度檢查法”和“pH值測(cè)定法”對(duì)其顏色、澄清度和pH值進(jìn)行檢查[6]。結(jié)果顯示，配制后24 h內(nèi)，各配伍液均為無色澄清液體，pH值無明顯變化（RSD＜1%，n＝7），詳見表2。

表2 各配伍液pH值的測(cè)定結(jié)果Tab 2 Determination results of pH values of mixtures

2.5.2 不溶性微粒檢查取“2.2.1”項(xiàng)下配伍液各適量，在25℃未避光條件下，分別于配制后0、1、4、24 h時(shí)參照2015年版《中國藥典》（四部）通則中“不溶性微粒檢查法”（光阻法）檢查其不溶性微粒數(shù)是否符合藥典相關(guān)規(guī)定[每1 mL中含10μm及10μm以上（≥10 μm）的微粒數(shù)不得超過25粒，含25μm及25μm以上（≥25 μm）的微粒數(shù)不得超過3粒][6]。結(jié)果顯示，配制后24 h內(nèi)，各配伍液中的微粒數(shù)均符合藥典規(guī)定，詳見表3。

表3 各配伍液中不溶性微粒數(shù)的檢查結(jié)果（±s，n＝3，粒/mL）Tab 3 Determination results of insoluble particles of mixtures（±s，n＝3，grain/mL）

表3 各配伍液中不溶性微粒數(shù)的檢查結(jié)果（±s，n＝3，粒/mL）Tab 3 Determination results of insoluble particles of mixtures（±s，n＝3，grain/mL）

溶劑粒徑，μm 不溶性微粒0.9%NS 5%GS乳酸鈉林格注射液≥10≥25≥10≥25≥10≥25 0 h 8.7±0.7 0.0±0.0 12.5±0.5 0.0±0.0 9.3±1.0 0.0±0.0 1 h 3.7±0.8 0.0±0.0 6.1±0.8 0.2±0.2 3.0±0.2 0.0±0.0 4 h 1.7±0.8 0.1±0.1 2.1±0.8 0.1±0.1 3.9±1.0 0.1±0.1 24 h 1.3±0.5 0.0±0.0 1.9±0.4 0.0±0.0 2.7±0.6 0.0±0.0

2.5.3 雜質(zhì)D含量的變化取“2.2.1”項(xiàng)下配伍液各適量，在25℃未避光條件下，用流動(dòng)一稀釋成含Lev 2 000 μg/mL的供試品溶液，分別于配制后0、1、2、4、6、8、24 h時(shí)按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，按“2.3.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算雜質(zhì)D的含量。結(jié)果顯示，配制后24 h內(nèi)，各配伍液中雜質(zhì)D的含量無明顯變化，符合USP的限度要求（雜質(zhì)D限度為0.1%）[5]，詳見表4。

2.5.4 有關(guān)物質(zhì)的含量變化取“2.2.1”項(xiàng)下配伍液各適量，在25℃未避光條件下，用流動(dòng)二稀釋成含Lev 5 000 μg/mL的供試品溶液。分別于配制后0、1、2、4、6、8、24 h時(shí)按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，按“2.3.2”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的含量。結(jié)果顯示，配伍后24 h內(nèi)，各配伍液均未檢出雜質(zhì)B和雜質(zhì)C，2-羥基吡啶和雜質(zhì)A的含量符合國外各藥典的限度要求（2-羥基吡啶的限度為0.025%，雜質(zhì)A的限度為0.3%）[5，7-8]，詳見表5。

表4 各配伍液中雜質(zhì)D含量的測(cè)定結(jié)果（%%）Tab 4 Determination results of the content of impurity D in mixtures（%%）

表5 各配伍液中有關(guān)物質(zhì)含量的測(cè)定結(jié)果（%%）Tab 5 Determination results of the content of related substance in mixtures（%%）

2.5.5 Lev相對(duì)百分含量的變化取“2.2.1”項(xiàng)下配伍液各適量，在25℃未避光條件下，用流動(dòng)二稀釋成含Lev 100μg/mL的供試品溶液。分別于配制后0、1、2、4、6、8、24 h時(shí)按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，按“2.3.3”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算Lev的含量。以配制0 h時(shí)Lev的含量為100%，換算出其他時(shí)間點(diǎn)的相對(duì)百分含量。結(jié)果顯示，配制后24 h內(nèi)，各配伍液中Lev的相對(duì)百分含量無明顯變化（RSD＜1%，n＝7），詳見表6。

表6 各配伍液中Lev相對(duì)百分含量的測(cè)定結(jié)果（%%）Tab 6 Determination results of relative percentage contents of Lev in mixtures（%%）

3 討論

配制已知雜質(zhì)2-羥基吡啶、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D對(duì)照品混合溶液，分別在以1.96 g/L硫酸水溶液-乙腈（7∶93，V/V）和（4∶96，V/V）[《歐洲藥典》（EP）和《英國藥典》（BP）]為流動(dòng)相的正相色譜法[7-8]、以磷酸鹽溶液（取磷酸二氫鈉1.56 g和庚烷磺酸鈉1.01 g，加水1 000 mL，用氫氧化鈉試液調(diào)pH值至7.0）-乙腈（90∶10，V/V）為流動(dòng)相的離子對(duì)色譜法（USP）[5]和參考USP方法并優(yōu)化的反相色譜法（“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件二）等多種流動(dòng)相體系下進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示，本研究優(yōu)化的色譜條件二對(duì)已知雜質(zhì)和Lev的分離效果更好。因此，本研究選擇色譜條件二進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢查和Lev的含量測(cè)定。而雜質(zhì)D由于極性較大，在色譜條件二下保留時(shí)間短，與溶劑峰難以完全分離，故本研究建立了色譜條件一，使其分配系數(shù)增大，保留時(shí)間延長，有利于待測(cè)物的分離和定量，因此單獨(dú)采用色譜條件一測(cè)定雜質(zhì)D。

各國藥典對(duì)雜質(zhì)和有關(guān)物質(zhì)的含量作出了限度要求。其中，2-羥基吡啶、雜質(zhì)A在USP、EP和BP中限度分別為0.025%和0.3%，雜質(zhì)B在EP和BP中限度均為0.05%，雜質(zhì)C和雜質(zhì)D在USP中限度分別為0.05%和0.1%[5，7-8]。本課題組前期進(jìn)行的強(qiáng)制降解試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，Lev注射液中雜質(zhì)A和雜質(zhì)B為降解產(chǎn)生，雜質(zhì)C和雜質(zhì)D分別為合成Lev的中間體和起始原料，2-羥基吡啶為原料中引入的雜質(zhì)。因此，為全面了解Lev注射液與0.9%NS、5%GS和乳酸鈉林格注射液配伍液中的雜質(zhì)含量情況，本研究對(duì)雜質(zhì)D、2-羥基吡啶、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B和雜質(zhì)C的含量進(jìn)行了考察。

本試驗(yàn)的目的是考察Lev注射液與3種注射液配伍的穩(wěn)定性，為其質(zhì)量管理和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。因此，配伍液均按臨床常用劑量、在25℃未避光條件下配制。在實(shí)際操作過程中，由于Lev注射液會(huì)因注射器的抽吸動(dòng)作而產(chǎn)生較多的氣泡，影響不溶性微粒的準(zhǔn)確測(cè)定。因此，本研究將配制后靜置20 min時(shí)的測(cè)定結(jié)果作為配制后0 h時(shí)的結(jié)果，以消除抽吸所致氣泡的干擾。

本試驗(yàn)參考了配伍穩(wěn)定性的相關(guān)研究[9-11]，將穩(wěn)定性考察時(shí)間延長至24 h。結(jié)果顯示，Lev注射液與0.9% NS、5%GS和乳酸鈉林格注射液配伍后24 h內(nèi)，各配伍液無色澄清，不溶性微粒數(shù)均符合2015年版《中國藥典》的規(guī)定，pH值無明顯變化。3種配伍液中雜質(zhì)D和雜質(zhì)A的含量遠(yuǎn)低于各國藥典的限度要求。雖然，Lev注射液與乳酸鈉林格注射液配伍24 h后2-羥基吡啶的含量從無增加至0.001 8%，但仍遠(yuǎn)低于各國藥典中0.025%的限度要求，故認(rèn)為是安全、合格的。Lev相對(duì)百分含量的RSD值均符合2015年版《中國藥典》（四部）通則中“待測(cè)成分含量為100%，測(cè)定結(jié)果的RSD值應(yīng)低于1%”的規(guī)定[6]，提示各配液中Lev的含量均無明顯變化。

綜上所述，在25℃未避光條件下，Lev注射液與0.9%NS、5%GS和乳酸鈉林格注射液配伍后24 h內(nèi)，穩(wěn)定性良好。但由于近年來隨著糖代謝異?；颊叩牟粩嘣黾?，木糖醇注射液、果糖注射液在臨床上也被廣泛應(yīng)用[12-14]，而本試驗(yàn)僅參照原研Lev注射液的藥品說明書，對(duì)其與0.9%NS、5%GS和乳酸鈉林格注射液的配伍穩(wěn)定性進(jìn)行考察，故該制劑與其他溶劑（如木糖醇注射液、果糖注射液等）的配伍穩(wěn)定性還有待進(jìn)一步研究。

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（編輯：張?jiān)拢?/p>

Compatible Stability of Levetiracetam Injection with Three Injections

HUANG Fengling，SONG Yanxia，LI Zhi，MA Xiaoli，YANG Mingbo，LI Bo（Sichuan Provincial Key Laboratory of Antibiotics Research and Re-evaluation/Sichuan Industrial Institute of Antibiotics，Chengdu University，Chengdu 610052，China）

OBJECTIVE：To investigate the compatible stability of Levetiracetam（Lev）injection with 3 injections.METHODS：Each Lev injection 1 000 mg mixed with 0.9%Sodium chloride injection 100 mL，5%Glucose injection 100 mL or Sodium lactate Ringer’s injection 100 mL respectively.Under the light condition，at 25℃，the color and clarification degree of mixtures were observed at different time points within 24 h after mixing；pH value and the number of insoluble particles were determined.The contents of related impurities（impurity A，B，C，D，2-hydroxypyridine）and Lev in mixtures were determined by HPLC.RESULTS：Under above condition，all mixtures were colorless clear liquid within 24 h；pH value had no significant change（RSD＜1%，n＝7）；the number of insoluble particles was no more than the range stated in Chinese Pharmacopeia（2015 edition）.Impurity B and C were not detected；the contents of other impurities were in line with the requirements of foreign pharmacopeia.No marked change was noted for relative content of Lev（RSD＜1%，n＝7）.CONCLUSIONS：After mixing with 0.9%Sodium chloride injection，5%Glucose injection or Sodium lactate Ringer’s injection，Lev injection keep stable at 25℃within 24 h under the light condition.

Levetiracetam injection；Sodium chloride injection；Glucose injection；Sodium lactate Ringer’s injection；Compatiblity；Stability；HPLC

R969.2；R971

A文章編號(hào)1001-0408（2017）14-1911-06

2016-05-30

2017-02-23）

＊碩士研究生。研究方向：藥品質(zhì)量控制。電話：028-84216020。E-mail：260396601@qq.com

#通信作者：研究員，碩士生導(dǎo)師。研究方向：藥品質(zhì)量控制。電話：028-84216020。E-mail：ckcdlibo@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.14.11