酸棗仁皂苷A對(duì)糖尿病模型大鼠腎小球細(xì)胞凋亡的影響

司芹芹，牛曉紅，李俊巖，楊海卿

（山西省長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院附屬和濟(jì)醫(yī)院內(nèi)分泌科，山西長(zhǎng)治 046000）

酸棗仁皂苷A對(duì)糖尿病模型大鼠腎小球細(xì)胞凋亡的影響

司芹芹，牛曉紅，李俊巖，楊海卿

（山西省長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院附屬和濟(jì)醫(yī)院內(nèi)分泌科，山西長(zhǎng)治 046000）

目的研究酸棗仁皂苷A對(duì)糖尿病模型大鼠腎小球細(xì)胞凋亡的影響，并初步探討其可能的機(jī)制。方法SD大鼠ip給予鏈脲菌素100 mg·kg-1，空腹血糖＞16 mmol·L-1顯示造模成功。糖尿病模型大鼠ip給予酸棗仁皂苷A 10和20 mg·kg-1，共4周。酶聯(lián)免疫檢測(cè)法測(cè)定大鼠血液中糖化血紅蛋白（GHb）的含量，過(guò)碘酸雪夫（PAS）染色觀察腎小球組織形態(tài)，TUNEL法檢測(cè)腎小球細(xì)胞凋亡，免疫組化法檢測(cè)腎組織中Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)，Western蛋白印跡法檢測(cè)腎組織中活化的胱天蛋白酶3和活化的胱天蛋白酶9蛋白表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)腎組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）mRNA表達(dá)。結(jié)果與模型組相比，給予酸棗仁皂苷A10和20 mg·kg-1處理的大鼠血液中GHb含量均顯著下降（mmol·L-1：10.9±0.8vs17.5±1.5，P＜0.05；7.6±0.5vs17.5±1.5，P＜0.05），腎小球的PAS陽(yáng)性得分均明顯降低（26.8±3.2vs36.4±3.8，P＜0.05；18.4±2.1vs36.4±3.8，P＜0.05），腎小球細(xì)胞凋亡均減少〔（8.2±0.8）%vs（17.6±1.8）%，P＜0.05；（5.1± 0.5）%vs（17.6±1.8）%，P＜0.05〕，腎組織中Bcl-2蛋白表達(dá)均顯著增加（P＜0.05），而Bax（P＜0.05）、活化的胱天蛋白酶9（P＜0.05）和活化的胱天蛋白酶3（P＜0.05）蛋白表達(dá)均顯著降低，腎組織中TGF-β1mRNA明顯降低（P＜0.05）。結(jié)論酸棗仁皂苷A可以抑制糖尿病模型大鼠腎小球細(xì)胞凋亡，可能與內(nèi)源性線粒體通路和TGF-β1mRNA的表達(dá)有關(guān)。

糖尿病腎?。凰釛椚试碥誂；細(xì)胞凋亡；內(nèi)源性線粒體通路；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病最常見(jiàn)的微血管并發(fā)癥之一，主要特征表現(xiàn)為腎小球和腎小管的結(jié)構(gòu)與功能的改變，體現(xiàn)為高濾過(guò)、高灌注狀態(tài)與腎小球?yàn)V過(guò)屏障的改變［1］。由于DN的起病隱匿，早期無(wú)明顯臨床癥狀，但隨病情發(fā)展與病變程度加劇，是導(dǎo)致終末期腎病和患者死亡的主要原因。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球糖尿病患者中有20%～40%由于終末期腎病需要進(jìn)行換腎替代治療。DN的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，迄今尚未明確。

酸棗仁皂苷A（jujuboside A）是中藥酸棗仁的主要成分之一。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，酸棗仁皂苷具有鎮(zhèn)靜作用，減少小鼠的自發(fā)活動(dòng)，呈劑量依賴性拮抗苯丙胺的中樞興奮作用［2］。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，正常大鼠腹腔注射酸棗仁皂苷后，總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇的含量明顯降低，高密度脂蛋白膽固醇含量明顯升高，提示酸棗仁皂苷A具有調(diào)節(jié)血脂和膽固醇的作用［3］。尚無(wú)關(guān)于酸棗仁皂苷A對(duì)DN的相關(guān)研究，本研究通過(guò)制備糖尿病模型大鼠，觀察酸棗仁皂苷A對(duì)DN的影響，并初步探討可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和主要儀器

酸棗仁皂苷A購(gòu)自上海邦景實(shí)業(yè)有限公司；鏈脲菌素（streptozotocin，STZ）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司（配制溶液：將STZ溶于pH為4.2、檸檬酸/檸檬酸鈉0.1 mol·L-1緩沖液中）；糖化血紅蛋白（glycated hemoglobin，GHb）ELISA試劑盒購(gòu)自上海信裕生物科技有限公司；TUNEL試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。辣根過(guò)氧化酶（HRP）標(biāo)記Bcl-2兔單克隆IgG抗體、HRP標(biāo)記Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）和β肌動(dòng)蛋白兔單克隆IgG抗體購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司；HRP標(biāo)記活化的胱天蛋白酶9兔單克隆IgG抗體和HRP標(biāo)記活化的胱天蛋白酶3兔單克隆IgG抗體購(gòu)自美國(guó)Santa curz公司。Thermo scientific 3100二氧化碳培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo公司）；微注射儀器（美國(guó)，World Preci?sion Instruments，Sarasota）；熒光倒置顯微鏡（美國(guó)Evos FL，AMG，USA）；顯影儀（Thermo Fisher Scientific Inc.）。

1.2 動(dòng)物分組和糖尿病模型的制備

健康雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量200～220 g由長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK（晉）2013-0002，動(dòng)物合格證：0001152。飼養(yǎng)于室溫21～25℃，空氣流通，晝夜各12 h，進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，正常進(jìn)食飲水。

除正常對(duì)照組（n=10）外，其他大鼠造模前禁食18 h，ip給予STZ 100 mg·kg-1，注射后72 h眼內(nèi)眥靜脈取血測(cè)空腹血糖，若＞16 mmol·L-1則顯示造模成功。正常對(duì)照組ip給予等量的pH為4.2、檸檬酸/檸檬酸鈉0.1 mol·L-1緩沖液。造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、酸棗仁皂苷（ip）10和20 mg·kg-1組，每組10只，模型組給予等量的生理鹽水，共給藥4周。

1.3 血液中糖化血紅蛋白含量測(cè)定

嚴(yán)格按照GHb ELISA試劑盒進(jìn)行操作，測(cè)定各組大鼠血液中GHb的含量。

1.4 PAS染色觀察腎組織病理形態(tài)

給藥完成后，將大鼠處死，分離切除腎，用生理鹽水沖洗干凈，置于4%多聚甲醛溶液，制作石蠟切片，常規(guī)脫蠟，加入高碘酸染色10 min，蒸餾水沖洗，加Schiff氏液染色15 min，傾去液體，加偏重亞硫酸鈉2 min，共2次，自來(lái)水清洗10 min，顯示紅色后蒸餾水沖洗，蘇木素復(fù)染2 min，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)脂封片。腎小球內(nèi)紫紅色為PAS染色陽(yáng)性區(qū)，每組任選6張樣本計(jì)算腎小球的PAS陽(yáng)性得分平均值。

1.5 TUNEL法檢測(cè)腎小球細(xì)胞凋亡

取大鼠腎石蠟切片用PBS漂洗15 min，加入蛋白酶K 20 mg·L-1工作液，37℃孵育10 min，4%多聚甲醛固定5 min，加入100 μL平衡液10 min，滴加Tunel反應(yīng)液，并于濕盒中37℃避光孵育30 min，終止反應(yīng)，PBS漂洗3次，滴入DAPI染液，孵育15 min封片。將切片置于顯微鏡下觀察，細(xì)胞核中的棕黃色顆粒顯示為凋亡細(xì)胞。根據(jù)凋亡細(xì)胞分布情況在400倍光鏡下，每組任選6張樣本切片，每張切片拍攝7個(gè)陽(yáng)性視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，以凋亡細(xì)胞數(shù)所占百分比作為凋亡指數(shù)。

1.6 免疫組化檢測(cè)腎小球Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)

嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作，將石蠟切片常規(guī)脫蠟，微波修復(fù)，滴入3%H2O2，室溫孵育15 min，加入封閉液，室溫靜置30 min，加入相應(yīng)一抗Bcl-2（1∶50）、Bax（1∶50），4℃孵育過(guò)夜，隨后加入HRP標(biāo)記羊抗兔二抗（1∶100），37℃孵育30 min，DAB顯色。光鏡下觀察，每組任選6張樣品切片，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率。評(píng)分方法：陽(yáng)性細(xì)胞率≤1%為0分，2%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；無(wú)染色為0分，弱強(qiáng)度染色為1分，中等強(qiáng)度染色為2分，強(qiáng)染色為3分；以陽(yáng)性細(xì)胞率和染色強(qiáng)度乘積進(jìn)行綜合判斷：0～1分為陰性（-）；2～4分為弱陽(yáng)性（+），5～8分為中等陽(yáng)性（++），9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.7 Western蛋白印跡法檢測(cè)活化的胱天蛋白酶3和活化的胱天蛋白酶9蛋白表達(dá)

每組任取6只大鼠腎組織，用RIPA細(xì)胞裂解液裂解，提取總蛋白后采用BCA法定量，調(diào)整蛋白質(zhì)濃度。取適量裂解產(chǎn)物，上樣，進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜，加入5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，加入抗活化胱天蛋白酶3（1∶2000）、活化胱天蛋白酶9（1∶1000）和β肌動(dòng)蛋白（1∶4000）抗體（一抗），4℃孵育過(guò)夜，洗膜，加入HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG抗體（二抗）（1∶2000）室溫孵育1 h，洗膜，使用化學(xué)發(fā)光法試劑盒對(duì)PVDF膜進(jìn)行曝光顯影，成像掃描分析系統(tǒng)測(cè)定目的和內(nèi)參條帶的積分吸光度值。

1.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β11（transforminggrowthfactor-β11，TGF-β11）mRNA表達(dá)

每組任取6只大鼠腎組織，按照Trizol說(shuō)明書提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，采用PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，所用引物：TGF-β1：上游：5’-GGACTACTAC?GCCAAAGAAG-3’，下游：5’-TCAAAAGACGC?CACTCAGG-3’；GAPDH：上游：5’-GGT?GAAGGTCGGTGTGAACG-3’，下游：5’-CTC?GCTCCTGGAAGATGGTG-3’。擴(kuò)增條件：93℃30 s，64℃40 s，73℃40 s，共31個(gè)循環(huán)，75℃延伸3 min。所得結(jié)果直接在熒光定量操作系統(tǒng)中進(jìn)行比較分析，目標(biāo)基因的相對(duì)定量用2-△△Ct計(jì)算。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)以x±s表示，組間差異采用Bonferroni校正的t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 酸棗仁皂苷A對(duì)糖尿病模型大鼠血液中糖化血紅蛋白含量的影響

表1結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠血液中GHb含量顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，酸棗仁皂苷A 10和20 mg·kg-1組大鼠血液中GHb含量明顯降低（P＜0.05）。

Tab.1 Effect of jujuboside A on content of glycosylat?ed hemoglobin in diabetic rats

2.2 酸棗仁皂苷A對(duì)糖尿病模型大鼠腎小球組織形態(tài)的影響

如圖1A所示，正常對(duì)照組腎小球均勻光滑；模型組腎小球體積增大，腎小球膜區(qū)增寬，基質(zhì)增厚，PAS染色明顯加深，腎小管無(wú)明顯改變；給予酸棗仁皂苷A后病變減輕。半定量數(shù)據(jù)結(jié)果顯示（圖1B），與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠腎組織中腎小球PAS陽(yáng)性得分顯著升高（36.4±3.8vs9.8±0.7，P＜0.05）；與模型組相比，分別給予酸棗仁皂苷A 10和20 mg·kg-1處理后，腎小球PAS陽(yáng)性得分降低（26.8±3.2vs36.4±3.8，P＜0.05；18.4±2.1vs36.4±3.8，P＜0.05），且20 mg·kg-1組分值降低幅度更大。

Fig.1 Effect of jujuboside A on changes of glomerular morphology in diabetic rats observed by PAS stain?ing（×400）.See Tab.1 for the treatment.B was the semi-quan?titative result of A.n=6.＊P＜0.05，compared with normal con?trol group；#P＜0.05，compared with model group.

2.3 酸棗仁皂苷A對(duì)糖尿病模型大鼠腎小球細(xì)胞凋亡的影響

如圖2A所示，模型組腎小球細(xì)胞TUNEL染色明顯加深，給予酸棗仁皂苷A后，TUNEL染色明顯變淺。半定量數(shù)據(jù)結(jié)果顯示（圖2B），與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠的腎小球細(xì)胞凋亡顯著增加〔（17.6±1.8）%vs（0.5±0.1）%，P＜0.05〕；與模型組相比，分別給予酸棗仁皂苷A 10和20 mg·kg-1處理后，大鼠的腎小球細(xì)胞凋亡明顯減少〔（8.2± 0.8）%vs（17.6±1.8）%，P＜0.05；（5.1±0.5）%vs（17.6±1.8）%，P＜0.05〕。

Fig.2 Effect of jujuboside A on apoptosis of glomer?ulus cells in diabetic rats observed by TUNEL stain?ing（×400）.See Tab.1 for the treatment.B was the semi-quan?titative result of A.n=6.＊P＜0.05，compared with normal con?trol group；#P＜0.05，compared with model group.

2.4 酸棗仁皂苷A對(duì)糖尿病模型大鼠腎組織Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的影響

如圖3所示，正常對(duì)照組腎組織Bcl-2染色最深，模型組腎組織Bcl-2染色最淺；給予酸棗仁皂苷A后，Bcl-2染色明顯變深正常對(duì)照組腎組織Bax染色最淺，模型組腎組織Bcl-2染色最深；給予酸棗仁皂苷A后，Bcl-2染色明顯變淺，Bax染色變深。半定量數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠腎組織Bcl-2（8.54±0.58vs2.54±0.21）的蛋白表達(dá)顯著減少（P＜0.05），Bax（4.36±0.38vs12.54± 0.78）的蛋白表達(dá)顯著增加（P＜0.05）；與模型組相比，給予酸棗仁皂苷A 10和20 mg·kg-1處理后，Bcl-2（4.73±0.35，6.98±0.42）的蛋白表達(dá)明顯增加（P＜0.05），Bax（8.96±0.58，5.76±0.42）的蛋白表達(dá)明顯減少（P＜0.05），且20 mg·kg-1劑量組較10 mg·kg-1劑量組變化更加明顯。

Fig.3 Effect of jujuboside A on Bcl-2 and Bax protein expressions detected by immunohistochemistry staining（×400）.See Tab.1 for the treatment.B was the semi-quantitative result of A.，n=6.＊P＜0.05，compared with normal control group；#P＜0.05，compared with model group.

2.5 酸棗仁皂苷A對(duì)糖尿病模型大鼠腎組織活化的胱天蛋白酶9、胱天蛋白酶9、活化的胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶3蛋白表達(dá)的影響

Western蛋白免疫印跡檢測(cè)結(jié)果（圖4）顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠腎組織活化的胱天蛋白酶9（0.68±0.04vs4.57±0.31）與活化的胱天蛋白酶3（0.98±0.07vs4.28±0.35）的蛋白表達(dá)顯著增加（P＜0.05）；而與模型組相比，給予酸棗仁皂苷A10和20 mg·kg-1處理后，活化的胱天蛋白酶9（3.87± 0.32，2.15±0.24）（P＜0.05）與活化的胱天蛋白酶3（3.04±0.25，1.21±0.11）（P＜0.05）的蛋白表達(dá)均明顯減少（P＜0.05），且20 mg·kg-1劑量組較10 mg·kg-1劑量組降低更加明顯。而各組大鼠腎組織的胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3蛋白表達(dá)無(wú)顯著變化。

Fig.4 Effect of jujuboside A on protein expressions of cleaved caspase 9，caspase 9，cleaved caspase 3 and caspase 3 detected by Western blotting.See Tab.1 for the treatment.B was the semi-quantitative result of A.x±s，n=6.＊P＜0.05，compared with normal control group；#P＜0.05，compared with model group.

2.6 酸棗仁皂苷A對(duì)糖尿病模型大鼠腎組織TGF-β1mRNA表達(dá)的影響

qPCR結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組（1.02±0.03）相比，模型組大鼠腎組織TGF-β1mRNA表達(dá)顯著升高（5.76±0.78，P＜0.05）（圖5）；給予酸棗仁皂苷A10和20 mg·kg-1處理后，大鼠腎組織TGF-β1mRNA表達(dá)分別為3.64±0.41和2.12±0.23，與模型組相比均明顯下降（P＜0.05）。

Fig.5 Effect of jujuboside A on transforming growth factor- β11（TGF- β11）mRNA expressions detected by qPCR.See Tab.1 for the treatment.n=6.＊P＜0.05，compared with normal control group；#P＜0.05，compared with model group.

3 討論

Bcl-2家族構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的相互作用的控制細(xì)胞凋亡的網(wǎng)絡(luò)，主要參與線粒體凋亡信號(hào)通路，家族成員由抗凋亡蛋白（Bcl-2，Bcl-XL和Bcl-w）和促凋亡蛋白（Bax，Bak，Bad，Bim和Bit等）組成［4-5］，通過(guò)調(diào)節(jié)線粒體膜通透性起到雙向調(diào)節(jié)作用［6］?？沟蛲龅鞍譈cl-2與促凋亡蛋白Bax之間比例的改變，進(jìn)而影響下游蛋白的變化。國(guó)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病大鼠腎小球細(xì)胞的凋亡率顯著高于非糖尿病大鼠，且bcl-2和bax基因也有相應(yīng)變化［7-8］。當(dāng)Bcl-2蛋白表達(dá)下降而Bax蛋白表達(dá)上升，會(huì)促使線粒體中的凋亡因子釋放至細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中，激活胱天蛋白酶9，活化的胱天蛋白酶9進(jìn)一步激活其下游因子胱天蛋白酶3，隨后胱天蛋白酶3的切割底物PARP被切割激活后形成DNA碎片，稱為內(nèi)源性線粒體凋亡途徑［9］。糖尿病模型大鼠的腎小球凋亡顯著增加，給予酸棗仁皂苷A后，腎小球細(xì)胞凋亡明顯減少，同時(shí)腎組織的Bcl-2蛋白表達(dá)顯著增加，Bax、活化的胱天蛋白酶9和活化的胱天蛋白酶3蛋白表達(dá)顯著減少，提示酸棗仁皂苷A可能通過(guò)抑制凋亡蛋白Bax的活性和增強(qiáng)Bcl-2的活性；除此之外，通過(guò)抑制胱天蛋白酶9的活性，進(jìn)一步抑制胱天蛋白酶3的活性，抑制內(nèi)源性線粒體通路的激活，從而抑制腎組織細(xì)胞的凋亡，可能具有腎保護(hù)的作用。

TGF-β是影響腎小管上皮細(xì)胞分化的最重要的一種調(diào)控因子，主要分為TGF-β1，TGF-β2和TGF-β33種亞型［10］。其中TGF-β1因子表達(dá)的變化對(duì)腎小管上皮細(xì)胞的分化具有重要的影響。還有研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1隨濃度增加，使NRK-52E細(xì)胞α-平滑肌激動(dòng)蛋白表達(dá)增加，上皮細(xì)胞的E-鈣黏蛋白表達(dá)降低［11］。TGF-β1/Smad通路是腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的主要途徑之一，TGF-β1與其相應(yīng)受體結(jié)合后，激活胞漿內(nèi)的Smad2和Smad3，與Smad4形成復(fù)合物進(jìn)入胞核，進(jìn)而調(diào)控一系列相關(guān)因子，從而調(diào)控腎小管上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化［12］。本研究結(jié)果顯示，酸棗仁皂苷A能夠降低糖尿病模型大鼠腎組織TGF-β1表達(dá)，提示酸棗仁皂苷A可能通過(guò)抑制TGF-β1的表達(dá)，從而阻斷TGF-β1誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化與纖維化，進(jìn)而減少腎小管間質(zhì)纖維化，從而可能具有抑制DN進(jìn)展為終末期腎功能衰竭的作用。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，酸棗仁皂苷A能夠抑制糖尿病大鼠腎小球細(xì)胞的凋亡，推斷可能是通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)因子Bcl-2以及Bax的表達(dá)，并調(diào)控腎小管上皮細(xì)胞分化的重要因子TGF-β1，從而在糖尿病中可能具有腎保護(hù)的作用。

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Effect of jujuboside A on glomerular cell apoptosis in diabetic model rats

SI Qin-qin,NIU Xiao-hong,LI Jun-yan,YANG Hai-qing
(Department of Endocrinology,Affiliated Heji Hospital of Changzhi Medical College, Changzhi 046000,China)

OBJECTIVETo investigate the effect of jujuboside A on glomerular cell apoptosis in diabetic rats,and to explore the possible mechanisms.METHODSSD rats were administered with streptozotocin 100 mg·kg-1to estabilish the diabetic model.Diabetic SD rats

jujuboside A 10 and 20 mg·kg-1daily for 4 weeks by lavage administration,respectively.The level of glycosylated hemoglobin(GHb)in the blood of each group was measured by fructosamine method.The morphological changes in glomerular cells were observed by PAS staining.Glomerular cell apoptosis was determined by TUNEL staining.The protein expression of Bcl-2 and Bax was detected by immunohistochemistry.The protein expression of cleaved caspase 9 and cleaved caspase 3 was detected by Western blotting.Trans?forming growth factor β1(TGF-β1)mRNA expression was analyzed by qPCR.RESULTSCompared with model group,jujuboside A 10 and 20 mg·kg-1treatment significantly reduced the level of GHb in blood (mmol·L-1:10.9±0.8vs17.5±1.5,P＜0.05;7.6±0.5vs17.5±1.5,P＜0.05),PAS positive score of glomerular cells(26.8±3.2vs36.4±3.8,P＜0.05;18.4±2.1vs36.4±3.8,P＜0.05)and the apoptosis of glomerular cells〔(8.2±0.8)%vs(17.6±1.8)%,P＜0.05;(5.1±0.5)%vs(17.6±1.8)%,P＜0.05〕.Moreover, Bcl-2 protein expression in kidney tissues was elevated(P＜0.05),whereas Bax(P＜0.05),cleaved caspase 9(P＜0.05)and cleaved caspase 3(P＜0.05)protein expression and TGF-β1mRNA(P＜0.05) expression were reduced after jujuboside A administration.CONCLUSIONJujuboside A can prevent glomerular cell apoptosis in diabetic rats,which may be associated with the regulation of mitochondrial apoptotic pathways and TGF-β1expression.

diabetic nephropathy;jujuboside A;apoptosis;mitochondrial apoptotic pathways; transforming growth factor β1

The project supported byScientific and Developing Research Project of Shanxi University and College(3012430)

SI Qin-qin,E-mail：czyxysqinqin@126.com;Tel：(0355)2093926

R285.5

：A

：1000-3002-（2017）05-0399-06

10.3867/j.issn.1000-3002.2017.05.004

2016-08-30 接受日期：2017-03-20）

（本文編輯：?jiǎn)?虹）

山西高等學(xué)?？萍佳芯块_(kāi)發(fā)項(xiàng)目基金（3012430）作者簡(jiǎn)介：司芹芹，女，講師，碩士研究生，主要從事糖尿病和骨代謝研究。

司芹芹，E-mail：czyxysqinqin@126.com，Tel：（0355）2093926