大豆異黃酮脂質(zhì)體的包封率測(cè)定及其物理性質(zhì)檢測(cè)

何歡+陳惠杰+刁磊

摘要：目的：對(duì)制備的大豆異黃酮脂質(zhì)體進(jìn)行包封率測(cè)定，并對(duì)其物理性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。方法：采用透析法測(cè)定大豆異黃酮脂質(zhì)體的包封率，并對(duì)脂質(zhì)體的形態(tài)、pH值和穩(wěn)定性進(jìn)行觀察檢測(cè)。結(jié)果表明：大豆異黃酮脂質(zhì)體的包封率41.25%±0.30%，形態(tài)圓整，pH值為6.18，穩(wěn)定性良好。結(jié)論：大豆異黃酮脂質(zhì)體的包封率測(cè)定方法可行，脂質(zhì)體的基本物理性質(zhì)良好。

關(guān)鍵詞：大豆異黃酮；脂質(zhì)體；包封率

基金項(xiàng)目：吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院青年基金項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：吉農(nóng)院合字[2015]第231號(hào)）；吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院省級(jí)大學(xué)生科技創(chuàng)新科研項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：吉農(nóng)院合字[2015]第013號(hào)）

中圖分類號(hào)： R927 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A DOI編號(hào)： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.10.021

大豆異黃酮（soybean isoflavone）是從豆科植物大豆中提取的一類化學(xué)物質(zhì)，屬于黃酮類化合物中的異黃酮類成分，具有苦澀味和收斂性[1]。大豆異黃酮在常溫下性質(zhì)穩(wěn)定，可溶于醇類、酯類和酮類，難溶于石油醚、正己烷等[2]。大豆異黃酮與雌激素結(jié)構(gòu)類似，可與雌激素受體α、β結(jié)合，具有類雌激素活性和抗雌激素活性，可降低骨質(zhì)疏松發(fā)生，預(yù)防乳腺癌，預(yù)防心血管疾病，改善婦女絕經(jīng)期綜合癥的作用[3]。

脂質(zhì)體（liposome）是采用磷脂及膽固醇等原料，通過(guò)適宜的制備方法形成一種類似生物膜結(jié)構(gòu)的包裹藥物的雙分子小囊[4]。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)能夠降低藥物的消除速率，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，增加藥物的體內(nèi)外穩(wěn)定性，而且藥物被包封于脂質(zhì)體內(nèi)，能夠降低藥物毒性，增強(qiáng)藥理作用[5]。鑒于此，本實(shí)驗(yàn)選用脂質(zhì)體作為大豆異黃酮的載體，將其制備成脂質(zhì)體，從而發(fā)揮藥物的最佳治療作用。

1 材料

1.1藥品與主要試劑

大豆苷元標(biāo)準(zhǔn)品，純度98%（美國(guó)Sigma公司）。大豆異黃酮（含量為80%，大連綠峰食品有限公司）。高純度大豆磷脂（德國(guó)德固賽公司）。膽固醇（上海東尚實(shí)業(yè)有限公司）。乙醇（分析純）。

1.2主要儀器

SP-756P紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）。Scientz-ⅡD型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。Sartorius BT25S電子天平（德國(guó)Sartorius公司）。HJ-6A型數(shù)顯恒溫多頭磁力攪拌器（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）。TECNAIG2型透射電子顯微鏡（荷蘭飛利浦公司）。

2 方法

2.1 大豆異黃酮脂質(zhì)體的制備

稱取處方量的大豆磷脂、膽固醇和大豆異黃酮，置于燒杯中，加入乙醚溶液15.0毫升，攪拌使其溶解，最后加入pH值為7.4的PBS緩沖液3.0毫升，形成兩相系統(tǒng)。將燒杯放入超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)內(nèi)冰浴超聲7分鐘，倒入茄型瓶中，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，在水浴25℃環(huán)境下，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醚，再加入pH值為7.4的PBS緩沖液10.0毫升，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋轉(zhuǎn)2小時(shí)，以分散脂質(zhì)體，制得溶液用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾即可。

2.2 脂質(zhì)體粒子形態(tài)觀察

用pH值為7.4的PBS緩沖液將大豆異黃酮脂質(zhì)體稀釋50倍，然后滴加到有支持膜的銅網(wǎng)上，再用2%磷鎢酸進(jìn)行染色，晾干，用透射電子顯微鏡觀察粒子形態(tài)。

2.3 脂質(zhì)體pH值的測(cè)定

大豆磷脂為不飽和磷脂，易氧化水解，其氧化水解速率受pH值的影響較大，文獻(xiàn)報(bào)道磷脂成分均在pH值為6.5時(shí)最穩(wěn)定，用pH值測(cè)定儀測(cè)定大豆異黃酮脂質(zhì)體的pH值，評(píng)價(jià)其穩(wěn)定性。

2.4 包封率的測(cè)定

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制 取大豆苷元標(biāo)準(zhǔn)品6.0毫克，置于50毫升容量瓶中，用50%乙醇溶解并定容至刻度，得到濃度為120μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，備用。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 用移液管量取標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液0.5毫升、1.0毫升、1.5毫升、2.0毫升、2.5毫升、3.0毫升，分別置于10毫升容量瓶中，用50%乙醇稀釋并定容，得到濃度分別為6μg·mL-1、12μg·mL-1、18μg·mL-1、24μg·mL-1、30μg·mL-1、36μg·mL-1的溶液。用紫外分光光度計(jì)在260 nm波長(zhǎng)下[6]分別測(cè)其吸光度，以濃度（C）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.4.3 加樣回收率的測(cè)定 取大豆異黃酮樣品4.0毫克，置于100毫升容量瓶中，用50%乙醇溶解并定容至刻度。取1.0毫升該溶液置于10毫升容量瓶中，分別加標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液0.5毫升、1.0毫升、2.0毫升混勻后定容至刻度，在260nm下測(cè)定吸光度，計(jì)算加樣回收率。

2.4.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取大豆異黃酮樣品4.0毫克，置于100毫升容量瓶中，用50%乙醇溶解并定容至刻度。在260nm下測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算RSD。

2.4.5 脂質(zhì)體包封率測(cè)定 將大豆異黃酮脂質(zhì)體1.0毫升置于已處理過(guò)的透析袋中，封口，將其置于100毫升 pH值為7.4的PBS緩沖液中，室溫下磁力攪拌透析4.5小時(shí)，透析結(jié)束后，將透析袋內(nèi)樣品全部取出，轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶中，加入1.0毫升 10% Triton X-100乙醇溶液，充分震蕩，然后再加入50%乙醇定容至刻度，用紫外分光光度計(jì)測(cè)其吸光度，計(jì)算被包裹的大豆異黃酮含量。另取1.0毫升大豆異黃酮脂質(zhì)體，置于50毫升容量瓶中，加入1.0毫升10% Triton X-100乙醇溶液，充分震蕩，然后再加入50%乙醇定容至刻度，用紫外分光光度計(jì)測(cè)其吸光度，測(cè)定大豆異黃酮的投藥量。按計(jì)算大豆異黃酮的包封率。

計(jì)算公式：包封率%=被包裹大豆異黃酮含量/大豆異黃酮總投藥量×100%

2.5 穩(wěn)定性的測(cè)定

取大豆異黃酮脂質(zhì)體3批樣品，分別于4℃和25℃條件下保存30天，以包封率為主要指標(biāo)，同時(shí)觀察外觀狀態(tài)變化，考察大豆異黃酮脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。

3 結(jié)果

3.1 大豆異黃酮脂質(zhì)體的外觀形態(tài)

制備的大豆異黃酮脂質(zhì)體為乳白色的澄清液體，無(wú)沉淀及粒子存在，圖1為大豆異黃酮脂質(zhì)體的外觀。

3.2 大豆異黃酮脂質(zhì)體的粒子形態(tài)

用透射電子顯微鏡觀察制備的脂質(zhì)體，粒子為類球形，分布較為均勻，圖2為脂質(zhì)體顯微照片。

3.3大豆異黃酮脂質(zhì)體的pH值測(cè)定

測(cè)得大豆異黃酮脂質(zhì)體的pH值為6.18，基本符合要求。

3.4 大豆異黃酮脂質(zhì)體的包封率測(cè)定結(jié)果

3.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖3，經(jīng)計(jì)算得線性回歸方程A=0.0878C+0.2985，R2=0.9994表明大豆異黃酮在6～36μg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度具有良好的線性關(guān)系。

3.4.2 加樣回收率結(jié)果 經(jīng)測(cè)定平均回收率104.0%，RSD為2.84%，表明此方法可靠。

3.4.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 樣品中大豆異黃酮平均百分含量為78.76%，RSD為0.27%，表明對(duì)樣品中大豆異黃酮的測(cè)定方法穩(wěn)定。

3.4.4大豆異黃酮脂質(zhì)體的包封率測(cè)定結(jié)果 脂質(zhì)體的平均包封率為41.25%±0.30%。

3.5 大豆異黃酮脂質(zhì)體的穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果

脂質(zhì)體在30天內(nèi)外觀均勻，無(wú)絮凝和沉淀產(chǎn)生。在4℃和25℃條件下存放前15天，包封率幾乎沒(méi)有變化，15天以后包封率逐漸下降，30天內(nèi)4℃時(shí)脂質(zhì)體包封率累計(jì)下降10.72%，25℃時(shí)包封率累計(jì)下降14.81%。結(jié)果表明，大豆異黃酮脂質(zhì)體應(yīng)該在4℃時(shí)保存。

4 結(jié)論與討論

制得的大豆異黃酮脂質(zhì)體pH值為6.18，通過(guò)透射電子顯微鏡觀察，其粒子為類球形，分布較為均勻。其包封率為41.25%±0.30%，穩(wěn)定性考察結(jié)果良好，保證了脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。

參考文獻(xiàn)

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1（30）52.

作者簡(jiǎn)介：何歡，在讀本科生，研究方向：藥物制劑。

通訊作者：刁磊，講師，研究方向：制劑新技術(shù)的研究。