我國金銀花綠原酸含量及影響因子研究進(jìn)展

許蘭杰　梁慧珍　余永亮

摘要綠原酸在中藥金銀花中的含量較高，有較強(qiáng)的生理活性，是金銀花的主要有效成分之一。綜述金銀花綠原酸含量以及影響金銀花綠原酸含量的因子，為金銀花遺傳改良提供參考。

關(guān)鍵詞金銀花；綠原酸；含量；影響因子

中圖分類號R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼

A文章編號0517-6611（2017）30-0125-03

AbstractThe chlorogenic acid has strong physiological activity，which is one of the main effective elements of Lonicera japonica. The content and influencing factors of chlorogenic acid in Lonicera japonica were summarized simply in the paper，which providesd reference for genetic improvement of Lonicera japonica.

Key wordsLonicera japonica； Chlorogenic acid； Content； Influencing factor

金銀花為忍冬科植物中中醫(yī)的常用藥物，金銀花富含揮發(fā)油（芳樟醇和雙花醇等）、有機(jī)酸（綠原酸、異綠原酸、咖啡酸等）以及黃酮類和皂苷類等化學(xué)成分，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效[1]。我國主要金銀花種質(zhì)資源有忍冬屬植物98種、5亞種、18變種在全國分布較廣，可供藥用的達(dá)49種。我國是金銀花的主產(chǎn)國，2003年全國金銀花種植面積在0.2萬hm2以上，年產(chǎn)量8 000 t，而當(dāng)時(shí)國內(nèi)外市場需求量為20 000 t。2010年種植面積超過5.33萬hm2。金銀花壽命一般為10～20年，栽種3年后就可以產(chǎn)生效益，5年達(dá)到盛產(chǎn)。筆者對我國金銀花綠原酸含量分布情況以及影響金銀花綠原酸含量的因子進(jìn)行系統(tǒng)綜述，為金銀花高品質(zhì)栽培技術(shù)的制定奠定基礎(chǔ)。

1基因型差異對金銀花綠原酸含量的影響

根據(jù)不同研究者的研究結(jié)果，我國金銀花中綠原酸含量范圍為1.00%～9.03%。周日寶等[1]采用高效液相色譜法比較不同來源金銀花的綠原酸含量，發(fā)現(xiàn)湖南省隆回縣和新寧縣產(chǎn)的灰氈毛忍冬中綠原酸含量分別為4.00%和4.52%，山東省和河南省產(chǎn)的金銀花中綠原酸的含量分別為2.20%和2.46%。周鳳琴等[2]研究發(fā)現(xiàn)，10個(gè)不同種質(zhì)金銀花中綠原酸的含量為1.01%～2.36%，其中含量較高的為小雞爪花（2.03%）、細(xì)毛針（2.36%）、大毛花（1.95%）和小毛花（2.10%）；不符合國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的2個(gè)種質(zhì)為大麻葉2（1.01%）和紅梗子（1.11%）。林慧彬等[3]采用高效液相色譜法比較不同種質(zhì)金銀花中綠原酸的含量，發(fā)現(xiàn)10個(gè)種質(zhì)金銀花樣品中綠原酸的含量在1.94%～4.00%，符合藥典規(guī)定，其中亞特良種金銀花、亞特立本金銀花、山東平邑金銀花及“九豐一號”金銀花中綠原酸含量較高。馮彬彬等[4]采用HPLC測定不同產(chǎn)地金銀花與山銀花中綠原酸的含量，發(fā)現(xiàn)重慶秀山、重慶江津、重慶武隆和湖南隆回的山銀花中綠原酸含量分別為9.03%、8.62%、4.51%和3.71%，山東平邑和河南封丘2個(gè)產(chǎn)地金銀花中綠原酸的含量分別為4.08%和3.79%。

2不同組織部位對金銀花綠原酸含量的影響

現(xiàn)代藥理試驗(yàn)研究證明，金銀花具有抗菌、抗病毒、解毒、增強(qiáng)免疫力、止血、利尿和降低膽固醇等作用，其最初的藥用部位是莖葉，花的應(yīng)用從明朝開始受到重視。《本草綱目》記載“忍冬，莖葉及花，功用皆同”?！吨袊幍洹?005年版一部規(guī)定金銀花中綠原酸的量不得少于1%；張雁冰等[5]采用紫外分光光度儀測定密縣金銀花及其莖、葉中綠原酸含量，結(jié)果表明，金銀花、莖、葉中綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.25%、0.48%、1.75%。因此可以用其葉替代金銀花，能夠提高藥用價(jià)值，擴(kuò)大藥用資源。時(shí)軍波等[6]利用HPLC測定金銀花不同部位綠原酸含量，結(jié)果表明金銀花花和芽等部位的綠原酸含量較高，符合藥典規(guī)定。劉志陽[7]通過對秦嶺山區(qū)金銀花不同季節(jié)采收時(shí)期試驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)藥效成分綠原酸含量從大到小依次為花蕾、葉、嫩葉、老枝。蔣向輝等[8]分析了金銀花開花期綠蕾、白蕾、白花、黃花、幼葉、老葉、幼莖與莖皮中綠原酸含量，結(jié)果顯示，綠原酸含量最高的部位是綠蕾，為干重的2.95%，老葉、幼葉中綠原酸含量較低，分別僅為0.20%和0.41%。

總之，前人研究結(jié)果基本一致，具體表現(xiàn)為花蕾中綠原酸含量最高，當(dāng)花蕾用量不夠時(shí)，可以用葉和枝代替花蕾，這些研究結(jié)果為金銀花的應(yīng)用和推廣提供基礎(chǔ)。

3采收時(shí)期對金銀花綠原酸含量的影響

3.1不同生長階段金銀花中綠原酸的含量

目前關(guān)于金銀花生長階段的劃分及不同生長階段綠原酸含量的研究結(jié)果基本一致。金銀花藥材從幼蕾到開放分為幼蕾、三青、二白、大白、銀花、金花5個(gè)階段，隨著不同生長階段其綠原酸含量也有所變化。劉高峰等[9]采用HPLC法對山東平邑5個(gè)不同生產(chǎn)階段金銀花的綠原酸含量進(jìn)行測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其含量從高到低依次為三青期、二白期、大白期、銀花期、金花期，以花蕾階段為高，花開放后則含量降低。胡尚欽等[10]研究發(fā)現(xiàn)，金銀花由孕蕾到開放綠原酸含量發(fā)生由高到低的動(dòng)態(tài)變化，青蕾綠原酸含量高，但產(chǎn)量低，不宜做大宗產(chǎn)品的采收期，宜作為生產(chǎn)特殊用途金銀花的采收期；黃白蕾綠原酸含量有一定降低，但產(chǎn)量較高，是生產(chǎn)普通金銀花的適宜采收期；開放花綠原酸含量較大幅度降低，商品性狀差，應(yīng)避免花蕾開放后才采摘。劉偉等[11]采用HPLC法再次研究發(fā)現(xiàn)，良種金銀花中綠原酸在三青期、二白期和大白期含量較高，亞特紅金銀花中綠原酸含量在三青期、二白期和大白期含量較高，而亞特紅金銀花中綠原酸含量在三青期至銀花期逐漸升高，與其他品種相反，在金花期含量最低，含量從大到小依次為三青期、二白期、大白期、銀花期、金花期。

以上研究結(jié)果表明，不同基因型金銀花種質(zhì)其綠原酸含量不同，并且花絲不同生長階段其綠原酸含量表現(xiàn)不同。

3.2采收時(shí)間對金銀花綠原酸含量的影響

林登峰等[12]對不同采收期金銀花的綠原酸含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明，以采收二白期花蕾入藥較為適宜；一天之中，上午采摘的金銀花中綠原酸含量較下午的高，其中，11∶00左右達(dá)到4.51%，19∶00僅3.79%，相差0.72個(gè)百分點(diǎn)。因此，應(yīng)在11∶00左右采收金銀花二白期花蕾為最佳。

4栽培條件對金銀花綠原酸含量的影響

4.1氮磷鉀肥對金銀花綠原酸含量的影響

目前關(guān)于氮磷肥對金銀花中綠原酸含量影響的研究較為一致，施用一定量氮磷肥能夠增加金銀花中綠原酸含量；而鉀肥對金銀花中綠原酸含量影響的研究存在爭議。胡尚欽等[10]在南江縣三迭系須家河組母質(zhì)發(fā)育的冷沙黃泥土壤上研究施肥對川產(chǎn)金銀花中綠原酸含量的影響，結(jié)果表明，氮的影響呈負(fù)效應(yīng)，過量施氮或比例配合不當(dāng)將降低金銀花綠原酸含量；磷的影響呈正效應(yīng)，施磷肥可以增加金銀花綠原酸含量；鉀肥對綠原酸無顯著影響。馮海亭[13]研究發(fā)現(xiàn)，銨態(tài)氮有利于金銀花生長和干重的增加，硝態(tài)氮有利于金銀花中綠原酸和類黃酮的積累。翟彩霞等[14]研究表明，綠原酸含量隨施氮量的增加呈先增加后降低的趨勢，當(dāng)施氮量超過240 kg/hm2 時(shí)，隨著施氮量的增加而下降，但各處理間差異未達(dá)到顯著水平； 磷肥能有效地提高金銀花的產(chǎn)量，施P2O5量為360 kg/hm2 時(shí)單株產(chǎn)量最高， 施 P2O5 量在0～180 kg/hm2時(shí)，綠原酸隨著施磷量增加而增加，超過180 kg/hm2 時(shí)，綠原酸含量隨施磷量的增加而顯著下降；在施 K2O 量為0～300 kg/hm2時(shí)，金銀花產(chǎn)量隨著施鉀量的增加而增加，而綠原酸含量以施K2O量為225 kg/hm2 時(shí)最高。阮培均等[15]研究不同施氮量和采收期對金銀花中綠原酸含量的影響表明，施氮23 g/株可明顯提高綠蕾期、白蕾期、白花期和黃花期金銀花中綠原酸含量。

4.2土壤水分對金銀花綠原酸含量的影響

柯用春等[16]研究金銀花不同干旱程度處理的花內(nèi)綠原酸含量表明，隨著干旱程度的加深，金銀花內(nèi)綠原酸含量先迅速升高，而后不斷下降；在金銀花開花期間，保持土壤含水量在16.2%左右有利于金銀花內(nèi)綠原酸保持在較高的水平，有利于提高金銀花的品質(zhì)。

4.3氣候因子對金銀花綠原酸含量的影響

目前，關(guān)于氣候因子對金銀花中綠原酸含量的影響存在較大爭議。查菲娜等[17]分析了在金銀花規(guī)范化栽培條件下氣象因子對金銀花中綠原酸含量的影響，發(fā)現(xiàn)金銀花中綠原酸含量與日照時(shí)數(shù)呈極顯著正相關(guān)關(guān)系，即隨日照時(shí)數(shù)增加，綠原酸含量增加；而綠原酸含量與溫度的相關(guān)性都未達(dá)到顯著水平，表明該試驗(yàn)條件下，金銀花中綠原酸含量受溫度的影響不明顯。而張萍等[18]采用 HPLC 法測定了山東、河南、福建、上海、廣西和云南6個(gè)產(chǎn)地金銀花中綠原酸含量，闡釋了氣候因子對金銀花中綠原酸含量的影響，并對其與生態(tài)因子間的灰色關(guān)聯(lián)度進(jìn)行分析，結(jié)果表明，溫度是影響金銀花中綠原酸含量的主導(dǎo)因子，高溫脅迫對綠原酸含量的影響最為顯著，日照時(shí)數(shù)和降雨量的影響較小。

5加工方法和提取方法對金銀花綠原酸含量的影響

5.1不同加工方法對金銀花綠原酸含量的影響

目前，金銀花加工方法主要有陰干、硫薰法、蒸曬、曬干、微波干燥、殺青干燥法等，不同研究者針對部分加工方法進(jìn)行了比較研究，研究結(jié)果存在較大差異。郭宏濱等[19]研究發(fā)現(xiàn)，陰干和硫薰法比蒸曬和曬干花內(nèi)綠原酸含量高，以陰干為最高。霍文杰等[20]采用HPLC法比較微波干燥、自然晾曬、烤房干燥及硫磺熏蒸的金銀花中綠原酸含量，結(jié)果表明微波干燥的金銀花中綠原酸含量最高，自然晾干的最低。張慧芳等[21]分析發(fā)現(xiàn)，殺青干燥法、直接曬干法加工的山銀花中綠原酸含量較高，且兩者無明顯差異；殺青干燥法、直接曬干法對金銀花中綠原酸含量影響較小。張青松等[22]測定不同加工方法對金銀花中綠原酸含量的影響，發(fā)現(xiàn)硫磺、滾筒、蒸汽方法加工的金銀花中綠原酸提取率分別為4.09%、5.62%、4.35%，以滾筒加工綠原酸提取率最高。

5.2提取方法對金銀花綠原酸含量的影響

陳有根等[23]比較了水-醇法、石-硫法和改良石-硫法這3種方法提取金銀花中總綠原酸含量，發(fā)現(xiàn)3種提取物中綠原酸含量分別為5.03%、4.01%、5.68%，表明改良石-硫法生產(chǎn)的金銀花提取物中綠原酸最高。史克莉等[24]考察乙醇回流、水蒸氣蒸餾、超聲、微波等提取方法對金銀花中綠原酸含量測定結(jié)果的影響，結(jié)果表明，微波和超聲提取金銀花中綠原酸含量最高，且無明顯差異。王建舫等[25]研究發(fā)現(xiàn)，水提法提取的綠原酸含量為0.76%，50%甲醇超聲法提取的綠原酸含量為2.54%；50%甲醇超聲法提取的綠原酸含量為水提法的3.34倍。王麗慶[26]對比超濾法和水提醇沉法下綠原酸提取率發(fā)現(xiàn)，提取量由高到低依次為超濾法、80%乙醇沉淀、75%乙醇沉淀、85%乙醇沉淀，超濾法提取效率高于乙醇沉淀法。

6病蟲害及農(nóng)藥對金銀花綠原酸含量的影響

6.1病蟲害對金銀花綠原酸含量的影響

陳美蘭等[27]研究發(fā)現(xiàn)，白粉病輕度發(fā)病處理的樣品中綠原酸含量最高，達(dá)2.55%，比未發(fā)病處理（綠原酸含量為2.09%）高22.2%，比中度（1.60%）發(fā)病處理高59.0%，比重度（1.85%）發(fā)病處理高37.5%，表明發(fā)生輕度的白粉病能使金銀花藥材中綠原酸含量增加。

6.2施用農(nóng)藥對金銀花綠原酸含量的影響

目前防治金銀花害蟲的農(nóng)藥主要有噻蟲嗪、吡蟲啉、啶蟲脒、三唑酮。劉亞南[28]研究發(fā)現(xiàn)，噻蟲嗪對金銀花中綠原酸含量有一定的影響，且施藥后含量有所升高。陳美艷等[29]研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)吸性化學(xué)殺蟲劑吡蟲啉對金銀花中綠原酸含量有一定的影響，具體表現(xiàn)為施藥后綠原酸含量比對照增加，并且隨著施藥濃度增加，綠原酸含量增加，其中20%吡蟲啉可溶性液劑4 000倍液對金銀花中綠原酸含量的影響顯著。李嘉欣等[30]研究發(fā)現(xiàn)，噴施不同濃度吡蟲啉（30、90 g/hm2）與啶蟲脒（3.75、18.75 g/hm2）的金銀花樣品與空白組樣品相比，綠原酸含量增加，而噴施不同濃度三唑酮（114、342 g/hm2）的金銀花樣品中綠原酸含量則降低，各施藥組測得綠原酸含量均符合藥典要求；吡蟲啉、啶蟲脒促進(jìn)金銀花中綠原酸的積累，三唑酮?jiǎng)t抑制綠原酸的積累。

7其他因素對金銀花綠原酸含量的影響

7.1激素處理對金銀花綠原酸含量的影響

萬雪芹等[31]在金銀花現(xiàn)蕾初期進(jìn)行不同濃度赤霉素（GA3）和蕓苔素內(nèi)酯（BR）噴施試驗(yàn)，結(jié)果表明，GA3使金銀花始花期提前3～5 d，而BR使其延遲2～6 d；GA3和BR分別使千蕾重平均增加2.17、2.53 g；1 000 mg/L GA3和0.5 mg/L BR分別使金銀花花蕾綠原酸含量由3.38%（清水對照）提高至5.62%、4.90%。

7.2苯丙氨酸對金銀花綠原酸含量的影響

馮海亭[13]研究發(fā)現(xiàn)，葉面噴施一定量的苯丙氨酸能夠促進(jìn)金銀花中綠原酸含量的增加，說明苯丙氨酸作為綠原酸重要的中間代謝物質(zhì)，能夠起到調(diào)節(jié)金銀花中綠原酸的積累。

7.3微量元素對金銀花綠原酸含量的影響

蔣向輝等[8]對金銀花分別施加Fe、Mn、B、Zn、Mo等微量元素，發(fā)現(xiàn)土壤根施Fe、Mn、B、Zn和Mo對金銀花中綠原酸的積累具有明顯的促進(jìn)作用，其中施加Fe、B、Zn和Mo的效果極顯著。

7.4鹽脅迫對金銀花綠原酸含量的影響

劉文婷等[32]分別對藤本金銀花（金花1號）一年生苗在4個(gè)不同濃度（0、100、200、400 mmol/L）的NaCl脅迫下的葉片綠原酸含量變化進(jìn)行了測定和分析，發(fā)現(xiàn)金銀花葉片內(nèi)綠原酸的含量隨鹽濃度變化，短期內(nèi)呈現(xiàn)低鹽下降、高鹽上升的趨勢，但沒有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著水平，即短期的鹽處理不會(huì)對金銀花葉片的綠原酸含量造成顯著影響，但金銀花植株仍表現(xiàn)出對鹽環(huán)境的應(yīng)激性。

45卷30期許蘭杰等我國金銀花綠原酸含量及影響因子研究進(jìn)展

8結(jié)論

金銀花作為一種常用的中藥，在我國栽培歷史悠久，形成了以河南、山東等地為主的生產(chǎn)區(qū)域。綠原酸作為一種衡量金銀花藥用價(jià)值的指標(biāo)，對其開展研究意義重大。通過對我國不同產(chǎn)區(qū)和基因型金銀花綠原酸含量的研究，明確我國金銀花總體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。由于金銀花的基因型差異，施肥、氣候和灌溉等栽培條件，病、蟲和農(nóng)藥制劑等逆境條件，以及金銀花不同采收期和不同加工方法都會(huì)對金銀花中綠原酸含量產(chǎn)生一定的影響，因此評價(jià)金銀花中綠原酸含量應(yīng)綜合考慮多種因素，達(dá)到公正合理評價(jià)的目的。

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