染色法、鹽水法及五聯(lián)檢法在陰道分泌物檢測(cè)中的對(duì)比分析

董林芳

（北京市羊坊店醫(yī)院婦科，北京 100102）

臨床采用陰道分泌物常規(guī)檢測(cè)（俗稱白帶常規(guī)）判斷女性生殖道健康，其中染色法和鹽水法是白帶常規(guī)檢測(cè)常用的方法，然而這兩種方法對(duì)檢查人員的經(jīng)驗(yàn)要求高，影響因素多，不易標(biāo)準(zhǔn)化且效率低[1]。近年來(lái)，五聯(lián)檢法在陰道分泌物檢測(cè)中的作用受到越來(lái)越廣泛的重視，該方法簡(jiǎn)單便捷，無(wú)需染色和顯微觀察，易于臨床推廣。為了探討五聯(lián)檢法的準(zhǔn)確性，本研究將其與染色法和鹽水法進(jìn)行了比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月～2016年12月于我院婦科門診就診，且因病情需要選擇進(jìn)行陰道分泌物檢測(cè)的338例患者作為研究對(duì)象，平均年齡（37.71±12.42）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①有白帶增多，陰部瘙癢，白帶有異味，尿頻尿急等癥狀的患者；②年齡15～60歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：在經(jīng)期、絕經(jīng)期、陰道用藥后及性生活后采集標(biāo)本的患者。本研究已經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且所有患者家屬均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 由我院婦科醫(yī)生采集，采用無(wú)菌專用棉拭子取患者陰道、宮頸及后穹隆處提取分泌物，將采集后的棉拭子放入試劑盒配套的潔凈無(wú)菌加樣試管中。將同一份標(biāo)本分成3分后立即送檢，分別用染色法、鹽水法及五聯(lián)檢法進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 染色法 用滅菌后的接種環(huán)從培養(yǎng)液中取一環(huán)標(biāo)本，均勻涂抹在載玻片上，用酒精燈微微加熱使其迅速干燥，待冷卻用結(jié)晶紫、碘液、沙黃及脫色液進(jìn)行染色，染色成功后用顯微鏡進(jìn)行觀察。

1.2.3 鹽水法 將標(biāo)本直接涂抹在載玻片上，滴入2滴濃度為0.9%的生理鹽水，混合均勻后用顯微鏡觀察。

1.2.4 五聯(lián)檢法 嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，將稀釋的陰道分泌物分別滴1滴至檢測(cè)板反應(yīng)孔中，再在唾液酸反應(yīng)孔中滴加唾液酸酶顯色液，將反應(yīng)板置于37℃恒溫箱15 min后取出，在乙酰胺基葡萄糖苷酶孔中滴加終止液，觀察并記錄結(jié)果。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

①染色法、鹽水法：乳酸桿菌以每高倍鏡下視野革蘭陽(yáng)性長(zhǎng)桿菌≥6個(gè)為陽(yáng)性；念珠菌以高倍鏡下看到孢子和菌絲為陽(yáng)性；白細(xì)胞以每高倍視野白細(xì)胞≥15個(gè)為陽(yáng)性；滴蟲(chóng)以顯微鏡下看到滴蟲(chóng)為陽(yáng)性；細(xì)菌性陰道病（BV）以顯微鏡發(fā)現(xiàn)線索細(xì)胞≥20%為陽(yáng)性。②五聯(lián)檢法：乳酸桿菌以過(guò)氧化氫不顯色或顯淡黃色為異常；白細(xì)胞以白細(xì)胞酯酶顯藍(lán)色為異常；BV以生唾液酸苷酶顯紅色或紫紅色，脯氨酸氨基肽酶顯黃色為異常；念珠菌和滴蟲(chóng)以乙酰胺基酶為指標(biāo)，顯黃色為異常，若pH≥4.8，表明滴蟲(chóng)感染；若pH≤4.6，則為念珠菌感染。③清潔度：染色法、鹽水法清潔度按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行劃分，五聯(lián)檢法按各指標(biāo)提示進(jìn)行綜合劃分，共I-IV度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料采用“±s”表示，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，采用t 檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各種方法診斷清潔度檢測(cè)結(jié)果比較

3種方法對(duì)陰道分泌物清潔度異常率的診斷，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各種方法診斷清潔度檢測(cè)結(jié)果比較

2.2 各種方法病原微生物檢出率比較

染色法及五聯(lián)檢法對(duì)念珠菌的檢出率顯著高于鹽水法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），五聯(lián)檢法對(duì)BV的檢出率顯著高于染色法及鹽水法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各種方法病原微生物檢出率比較 [n（%）]

3 討 論

陰道炎是婦女的一種常見(jiàn)疾病，主要由陰道黏膜及黏膜下結(jié)締組織發(fā)生炎癥引起，患者多伴外陰瘙癢、陰道分泌物增多等癥狀，對(duì)患者的生活和工作造成一定困擾[2]。傳統(tǒng)的染色法和鹽水法為手工操作，人為影響因素較大，標(biāo)準(zhǔn)不易統(tǒng)一，檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)，因此急需新的檢測(cè)方法提高檢測(cè)效率。五聯(lián)檢法是將過(guò)氧化氫濃度、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶連同pH值一起做成聯(lián)檢卡，檢測(cè)白帶中乳酸桿菌、白細(xì)胞、BV、念珠菌、滴蟲(chóng)及清潔度的方法，具有簡(jiǎn)單方便，結(jié)果易判斷等優(yōu)點(diǎn)，在臨床推廣中具有重要意義[3]。

本研究顯示，將染色法和鹽水法進(jìn)行比較時(shí)，鹽水法對(duì)念珠菌的檢出率較低，原因?yàn)辂}水法在實(shí)際操作過(guò)程中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)陰道上皮細(xì)胞核及細(xì)胞膜卷曲、有形成分重疊等現(xiàn)象，從而使鹽水對(duì)念珠菌的檢出率偏低，而染色法檢測(cè)將真菌的芽生孢子和假菌絲進(jìn)行染色，使真菌的典型形態(tài)更加突出，提高了念珠菌的檢出率[4]。

本研究中，五聯(lián)檢法對(duì)清潔度診斷與鹽水法及染色法保持較好的一致性，對(duì)滴蟲(chóng)、乳酸桿菌、白細(xì)胞的檢出率較高，與鹽水法及染色法比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），對(duì)BV的檢出率高于鹽水法及染色法，對(duì)念珠菌的檢出率高于鹽水法。原因?yàn)檫^(guò)氧化氫主要由乳酸桿菌產(chǎn)生，因此通過(guò)檢測(cè)過(guò)氧化氫含量指示乳酸桿菌的含量可保持較高的靈敏度和特異度；白細(xì)胞多為中性粒細(xì)胞，這類細(xì)胞中含白細(xì)胞酯酶，白細(xì)胞被細(xì)菌分解時(shí)，白細(xì)胞酯酶將被釋放出來(lái)，因此檢測(cè)白細(xì)胞酯酶含量可間接反應(yīng)白細(xì)胞含量，還能避免白細(xì)胞破碎導(dǎo)致的漏檢；BV中的各種細(xì)菌有的會(huì)產(chǎn)生唾液酸苷酶，有的會(huì)產(chǎn)生脯氨酸氨基肽酶，五聯(lián)檢法綜合利用了這兩種酶，克服了單一酶檢測(cè)帶來(lái)的靈敏度缺陷；念珠菌和滴蟲(chóng)均具有乙酰氨基葡萄糖苷酶，但感染念珠菌時(shí)pH≤4.6，感染滴蟲(chóng)時(shí)pH≥4.8，因此可以根據(jù)乙酰氨基葡萄糖苷酶和pH值聯(lián)合判斷[5]，而滴蟲(chóng)在傳統(tǒng)顯微鏡下觀察較為明顯，因此檢出率稍高于五聯(lián)檢法[6]。

綜上所述，五聯(lián)檢法在陰道分泌物檢測(cè)中具有直接、簡(jiǎn)單、快速的特點(diǎn)，便于臨床婦科普查，值得臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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