實例說明如何做火焰原子吸收分光光度法的方法學(xué)確認(rèn)

丁 敏，王麗平，馬兆堂

（1.江蘇省泰州醫(yī)藥園區(qū)公共平臺中心，江蘇 泰州 2253002；2.江蘇省泰州醫(yī)藥園區(qū)新藥申報中心，江蘇 泰州 225300）

實例說明如何做火焰原子吸收分光光度法的方法學(xué)確認(rèn)

丁 敏1，王麗平1，馬兆堂2

（1.江蘇省泰州醫(yī)藥園區(qū)公共平臺中心，江蘇 泰州 2253002；2.江蘇省泰州醫(yī)藥園區(qū)新藥申報中心，江蘇 泰州 225300）

目的利用火焰原子吸收分光光度法測定碳酸鈣中鎘的方法學(xué)確認(rèn)的實例，直觀解說火焰原子吸收分光光度法的方法學(xué)確認(rèn)的方法。方法采用原子吸收分光光度法的標(biāo)準(zhǔn)加入法（第二法）測定碳酸鈣中鎘含量，并考察該方法的線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度（加標(biāo)回收率）、檢出限和定量限。結(jié)果該方法在鎘含量0.01～0.08 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9996），重復(fù)性RSD值為14.11%，加樣回收率為107.50%，方法確認(rèn)的各項指標(biāo)均合格。結(jié)論通過碳酸鈣中鎘含量的方法確認(rèn)，分析了火焰原子吸收分光光度法的方法確認(rèn)。

原子吸收分光光度法；方法確認(rèn)；碳酸鈣；鎘

方法確認(rèn)實驗室通過試驗，提供客觀有效證據(jù)證明特定檢測方法滿足預(yù)期的用途。方法確認(rèn)應(yīng)當(dāng)建立方法的性能特性和使用的限制條件，并識別影響方法性能的因素及影響程度，確定方法所適用的基體，以及方法的正確度和精密度[1]。適用范圍為原料及成品（藥品）中不需要進行驗證的檢驗方法以及各國藥典方法和其他已經(jīng)驗證的法定的標(biāo)準(zhǔn)，通過方法確認(rèn)來證明檢測方法在自己實驗室條件下的適用性。

火焰原子吸收分光光度法的方法確認(rèn)本文按照中國藥典四部的通則9101《藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則》[2]的內(nèi)容對線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度（加標(biāo)回收率）、檢出限和定量限進行考察。收載于《中國藥典》的碳酸鈣[3]，本文采用火焰原子吸收分光光度法測定碳酸鈣中鎘含量[4]，以該方法的方法確認(rèn)為實例，詳細(xì)呈現(xiàn)火焰原子吸收分光光度法的方法確認(rèn)的方法。

1 實驗儀器及耗材

1.1 實驗用儀器

電子分析天平METTLER XS105DU；原子吸收光譜儀ICE 3500（熱電公司）；Cu空心陰極燈（熱電公司）；純水機Milli-QAdvantage A10（默克密理博）。

1.2 實驗用試劑耗材

鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/mL（中國計量科學(xué)研究院GBW08612，批號12106）；硝酸（65～68%，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，優(yōu)級純，批號20130718）；實驗所用容量瓶（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，10%硝酸浸泡24小時，超純水洗凈晾干）；碳酸鈣（上海諾成藥業(yè)股分有限公司）。

2 實驗方法

2.1 溶液的制備

2.1.1 線性溶液的制備

用1%硝酸將鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成100 μg/mL，放置冰箱冷藏備用。取100 μg/mL鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液，以1%硝酸為稀釋液，制備成含鎘量為0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 μg/mL的一系列溶液。

2.1.2 重復(fù)性溶液的制備

精密稱取碳酸鈣樣品4.0 g、5.0 g及6.0 g，每個樣品設(shè)平行樣3份分別置于250 mL容量瓶中，以8%硝酸溶液為溶劑溶解稀釋至刻度，搖勻后作為供試品溶液。各取50 mL供試品溶液4份，分別置4個同體積的容量瓶中（標(biāo)號1～4號），除1號容量瓶外，其他容量瓶分別精密加入2 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)鎘溶液2、3、4 mL，再用8%硝酸溶液為溶劑稀釋至刻度，制備一系列溶液。

2.1.3 準(zhǔn)確度溶液的制備

精密稱取碳酸鈣樣品2.5 g，設(shè)平行樣3份分別置250 mL容量瓶中，加入8%硝酸溶液溶解，再分別加入0.2 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)鎘溶液3 mL，再分別加入8%硝酸溶液定容至刻度，搖勻后作為準(zhǔn)確度供試品溶液。取50 mL供試品溶液4份，分別置4個同體積的容量瓶中，按照2.1.2的方法制備準(zhǔn)確度一系列溶液。

2.1.4 檢出限和定量限溶液的制備（同2.1.1）

2.2 儀器條件

鎘燈：測定波長228.8 nm；開啟氘燈校正背景，通帶寬0.5 nm；燈電流50%；原子化方式為空氣-乙炔氣火焰法；測量時間為4.0 s。

3 實驗結(jié)果及分析

3.1 線性實驗

上述按2.1.1方法制備的供試品溶液，按2.2儀器條件測定，以吸光度（A）為縱坐標(biāo)、濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，軟件可得線性回歸方程（最小二乘法進行線性回歸）：Y=0.43131x+0.0008，r=0.9996?；鹧嬖游辗止夤舛确ㄒ话阋笙嚓P(guān)系數(shù)（r）＞0.998，越接近1相關(guān)性及線性越好。

3.2 重復(fù)性實驗

上述按2.1.2方法制備的供試品溶液，按2.2儀器條件測定，重復(fù)性結(jié)果見下表1。樣品中待測定成分含量和精密度RSD可接受范圍。見表2。

3.3 準(zhǔn)確度實驗

上述按2.1.3方法制備的供試品溶液，按2.2儀器條件測定，準(zhǔn)確度結(jié)果見下表3。樣品中待測定分成含量和回收率限度。見表2。

3.4 檢出限和定量限

根據(jù)3.1的所得線性回歸方程，確認(rèn)該定量方法在0.01～0.08 μg/mL范圍內(nèi)定量可靠。用火焰法連續(xù)測定空白溶液11次，求得空白溶液的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0003。計算得儀器檢出限為3SD/0.43131=0.0021μg/mL，儀器定量限為10SD/0.43131=0.0070 μg/mL，按取樣量1.0 g，定容體積100 mL計算，方法定量限為0.70 mg/kg。

表1 重復(fù)性實驗結(jié)果

表2 樣品中待測定成分含量對應(yīng)精密度RSD可接受范圍和回收率限度

表3 準(zhǔn)確度實驗結(jié)果

4 結(jié) 論

本文實例詳細(xì)說明火焰原子吸收分光光度法測定碳酸鈣中鎘含量的檢測方法的方法確認(rèn)。該方法鎘含量0.01～0.08 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9996），重復(fù)性RSD值為14.11%，加樣回收率為107.50%，檢出限為0.0021 μg/mL和定量限為0.70 mg/kg，試驗結(jié)果表明本方法的線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度（加標(biāo)回收率）均符合要求，并給出了該方法的線性范圍、檢出限及定量限，因此該方法適用于碳酸鈣中鎘含量的測定。

[1] ISO/IEC Guide 99:2007,國際計量學(xué)詞匯[S].2007,2.45.

[2] 國家藥典委員會編.中國藥典(2015年四部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:TZ9101.

[3] 國家藥典委員會編.中國藥典(2015年二部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:1500-1501.

[4] 國家藥典委員會編.中國藥典(2015年四部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:TZ41.

本文編輯：李 豆

O657.31

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ISSN.2095-8242.2017.14.2613.02