分析HPLC—MS/MS法快速檢測(cè)中成藥及保健食品中6種減肥類非法添加化學(xué)成分

目的：通過(guò)HPLC-MS/MS法快速檢測(cè)中成藥及保健食品中6種減肥類非法添加化學(xué)成分。方法：將藥品與甲醇混合制備成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品，在工作條件下采用ESI電離源和MRM掃描方式進(jìn)行測(cè)定分析。結(jié)果：HPLC-MS/MS法可準(zhǔn)確檢測(cè)中成藥及保健食品中6種減肥類非法添加化學(xué)成分，檢測(cè)限為（0.1-1.0）ng。結(jié)論：HPLC-MS/MS法靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、快速，具有良好的適用性和有效性。

近年來(lái)，在具有減肥功效的中成藥物和保健品中發(fā)現(xiàn)非法添加化學(xué)成分的報(bào)道屢見(jiàn)不鮮。常見(jiàn)的添加成分有鹽酸西布曲明、鹽酸麻黃堿、鹽酸芬氟拉明、呋塞米、酚酞、咖啡因。這些藥物長(zhǎng)期服用會(huì)對(duì)消費(fèi)者的健康和生命造成威脅。因此，探索科學(xué)合理的檢測(cè)方法是十分必要的。本文建立HPLC-MS/MS法對(duì)中成藥及保健食品中這6種減肥類非法添加化學(xué)成分，取得良好的成果，現(xiàn)報(bào)道如下。

儀器與方法

儀器與試藥。研究采用的儀器包括美國(guó)Aglient 1200-G6410B三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀與ESI電離源。采用的藥品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，包括鹽酸西布曲明、鹽酸麻黃堿、鹽酸芬氟拉明、呋塞米、酚酞、咖啡因。研究中所用水為超純水、流動(dòng)相中所用甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。霧化氣和干燥氣為高純氮?dú)?。流?dòng)相分別為甲酸鈉-甲醇、甲酸-甲醇、甲酸-乙腈溶液、乙酸鈉-甲醇、甲酸銨-乙腈溶液、乙酸鈉-乙腈溶液、乙酸-甲醇、乙酸-乙腈。其中銨溶液濃度為（5-20）mmol/L，酸溶液濃度為（0.1-0.5）%。

方法。（1）工作條件：研究對(duì)呋塞米采取負(fù)離子模式監(jiān)測(cè)，對(duì)其余5種對(duì)照藥品均采用正離子模式監(jiān)測(cè)，色譜柱溫為30℃、進(jìn)樣量為10uL、流速為0.5ml/min、毛細(xì)管電壓為4.0kV、霧化氣壓力為20psi、干燥氣溫為350℃、干燥氣流量為12L/min。采取最高相對(duì)離子豐度的子離子作為檢測(cè)離子，采取MRM（多反應(yīng)監(jiān)測(cè)）模式，范圍為50-400。（2）制備實(shí)驗(yàn)溶液。①混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，將6種對(duì)照藥品分別取適量，與甲醇溶液進(jìn)行溶解和稀釋，制成10ug/ml的混合溶液。②供試品溶液：片劑、丸劑。細(xì)致研磨粉碎，取一次服用量。膠囊劑。去其內(nèi)容物，研細(xì)，稱取1次口服劑量?？诜骸Ａ咳?次口服劑量。軟膠囊。稱取軟膠囊總重，采用注射器抽出內(nèi)容為置于50ml量瓶。將藥品加入30ml甲醇渦旋處理10min，超聲提取10min，冷卻，以甲醇定容至刻度后搖勻，再將其以0.22um有機(jī)濾膜過(guò)濾，待用。

測(cè)定。取供試品，對(duì)照品溶液，以1.2.1所述工作條件進(jìn)行測(cè)定分析，確保色譜峰的保留時(shí)間、特征碎片離子與混合對(duì)照品一致，對(duì)供試品溶液進(jìn)行過(guò)多次反映離子監(jiān)測(cè)掃描。計(jì)算對(duì)照品和樣品的相對(duì)離子豐度比（在允許偏差范圍內(nèi)），則可判定供試品中是否含有非法添加化學(xué)成分。

結(jié)果分析

相對(duì)離子豐度最大容許誤差。相對(duì)離子豐度≤10%，最大允許偏差為（±50）%。 相對(duì)離子豐度>（10-20）%，最大允許偏差為（±30）%。 相對(duì)離子豐度>（20-50）%，最大允許偏差為（±25）%。 相對(duì)離子豐度>50%，最大允許偏差為（±20）%。

對(duì)照片、樣品離子流圖。筆者對(duì)市面上流通的42批減肥類中成藥及保健食品進(jìn)行，其中有11批檢出非法添加化學(xué)成分，添加種類多為咖啡因、酚酞、鹽酸西布曲明，對(duì)照品離子流圖如圖1、樣品離子流圖如圖2。

檢測(cè)限。研究采取甲醇溶液將對(duì)照品進(jìn)行逐步稀釋，以工作條件進(jìn)行測(cè)定，當(dāng)S：N（信噪比）為3：1時(shí)，化學(xué)成分檢出限均<1.5ng。

討論

中成藥及保健食品市場(chǎng)產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，監(jiān)督難度較大，不法分子受利益驅(qū)使添加化學(xué)成分。這些成分主要通過(guò)刺激腸壁、降低食欲、興奮中樞神經(jīng)、刺激新陳代謝的途徑達(dá)到快速減肥的目的，長(zhǎng)期服用會(huì)對(duì)消費(fèi)者的生命健康造成極大的威脅。

現(xiàn)行的檢測(cè)體系（多為多個(gè)流動(dòng)相體系檢測(cè)法）存在諸多缺陷，方法繁瑣、分離度差、耗時(shí)長(zhǎng)。研究構(gòu)建的HPLC-MS/MS法的原理為計(jì)算定性離子與定量離子豐度比，進(jìn)而來(lái)確認(rèn)樣品的陽(yáng)性結(jié)果。采取HPLC-MS/MS法能夠有效的避免日常檢驗(yàn)中出現(xiàn)假陽(yáng)性的判定結(jié)果，節(jié)省了檢驗(yàn)時(shí)間，提高了檢驗(yàn)的精準(zhǔn)度。筆者首先嘗試將流動(dòng)相比例進(jìn)行調(diào)整，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)1ml/L的甲酸-甲醇溶液進(jìn)行梯度洗脫能夠在較短時(shí)間內(nèi)分離，提高分離度（≥1.5）。這一比率能夠明顯改善其他體系運(yùn)行過(guò)程中出現(xiàn)的管道易堵塞、基線噪音較大、柱壓較高、峰重疊等問(wèn)題。其次，考慮到現(xiàn)行文獻(xiàn)中對(duì)LC-MS/MS法的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)中未討論到相對(duì)豐度比。筆者對(duì)HPLC-MS/MS法補(bǔ)充如下，對(duì)于同等實(shí)驗(yàn)條件下，樣品液與標(biāo)準(zhǔn)液中待測(cè)物質(zhì)的色譜峰相對(duì)保留時(shí)間≤2.5%，扣除背景色譜，目標(biāo)物離子與對(duì)照品的相對(duì)離子豐度在表1的誤差允許范圍內(nèi)（對(duì)均出線），則可判定樣品中存在目標(biāo)物品。