反復(fù)自然流產(chǎn)患者血清檢測中孕激素誘導(dǎo)阻斷因子的表達(dá)意義

楊小芳+顧秀蘭

【摘要】 目的：通過檢測先兆流產(chǎn)患者體內(nèi)的血清孕酮誘導(dǎo)的封閉因子（progesterone-induced blocking factor，PIBF）在治療前后的表達(dá)水平變化，研究妊娠早期PIBF與先兆流產(chǎn)的可能的關(guān)聯(lián)，從而為臨床治療先兆性流產(chǎn)提供新的支持。方法：選擇2013年6月-2016年6月在本院婦產(chǎn)科門診治療的確診為早孕先兆流產(chǎn)患者40例作為試驗組，在孕期過程中給予相應(yīng)的治療，另外選擇正常健康的早孕婦女40例作為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附方法（ELISA）檢測兩組孕婦治療前后血清孕酮及PIBF水平，探討兩者可能的關(guān)系。結(jié)果：治療過程中兩組均未出現(xiàn)不全流產(chǎn)和完全流產(chǎn)病例。給藥治療前，試驗組的血清孕酮與PIBF水平均明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；之后給予黃體酮治療，試驗組的孕酮與PIBF水平隨著孕周的延長，而逐漸升高，從第8孕周起，PIBF水平逐漸升高，直至12孕周趨近于正常水平，孕9、10、12周的PIBF水平與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），但與試驗組治療前水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。對照組的血清孕酮及PIBF具有相關(guān)性，以血清孕酮水平做X軸，以血清PIBF水平為Y軸進(jìn)行相關(guān)性分析，得到相關(guān)曲線為：Y=1.789+1.897X（R2=0.954），該相關(guān)性在試驗組患者中不存在。結(jié)論：PIBF對于預(yù)測和診斷反復(fù)自然流產(chǎn)具有重要的意義，為臨床治療先兆性流產(chǎn)提供重要的價值。

【關(guān)鍵詞】 反復(fù)自然流產(chǎn)； 孕激素誘導(dǎo)阻斷因子； 孕酮

Expression of Progesterone Induced Blocking Factor in Serum of Patients with Recurrent Spontaneous Abortion/YANG Xiao-fang，GU Xiu-lan.//Medical Innovation of China，2017，14（09）：004-007

【Abstract】 Objective：To detect the expression level of serum progesterone induced blocking factor（PIBF） before and after treatment in patients with threatened abortion，to study the possible association between PIBF and threatened abortion in early pregnancy，so as to provide new support for clinical treatment of threatened abortion.Method：40 patients with threatened abortion in our hospital obstetrics and gynecology clinic from June 2013 to June 2016 were selected as the experimental group and were given corresponding treatment during pregnancy，another 40 cases in normal healthy pregnant women were selected as control group.The levels of progesterone and PIBF were detected by using enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） in these two groups and then explore the relationship between them.Result：There were no cases of incomplete abortion and complete abortion in the two groups.Before given treatment，the levels of serum progesterone and PIBF in experimental group were significantly lower than those in control group，the differences were statistically significant（P<0.05）；after treated with progesterone treatment，the progesterone and PIBF levels with the prolongation of gestation in experimental group，and gradually increased from eighth weeks of gestation，PIBF levels increased gradually，until 12 weeks of gestation was close to normal levels，compared to 9，10，12 gestational weeks PIBF levels compared with the control，there were no significant differences（P>0.05），but compared with the experimental group before treatment，the differences were statistically significant（P<0.05）.Correlation between serum progesterone and PIBF in control group，the serum progesterone levels in X axis，the level of serum PIBF was correlation analysis of Y axis，get the correlation curve：Y=1.789+1.897X（R2=0.954），the association between patients in the experimental group.Conclusion：PIBF plays an important role in the prediction and diagnosis of recurrent spontaneous abortion，it can provide important value for clinical treatment of threatened abortion.

【Key words】 Recurrent spontaneous abortion； Progesterone induced blocking factor； Progesterone

First-authors address：Chen Xinghai Hospital in Zhongshan City，Zhongshan 528415，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.09.002

由于遺傳、環(huán)境及內(nèi)分泌等因素，在孕婦妊娠早期較易發(fā)生先兆流產(chǎn)，臨床表現(xiàn)主要為：妊娠12周前出現(xiàn)少量陰道流血、腰背痛及陣發(fā)性下腹痛等，但無妊娠物排出[1]。孕酮是妊娠過程的重要激素，其水平低于正常時，易誘發(fā)胎兒流產(chǎn)與畸形，即使給予相應(yīng)的臨床治療使用保胎藥物，但依然有潛在的風(fēng)險[2-3]。血清孕酮誘導(dǎo)的封閉因子（progesterone-induced blocking factor，PIBF）的表達(dá)水平，可以直接反映出孕酮的水平[4-5]，本研究通過檢測PIBF的表達(dá)水平，來間接探討血清孕酮水平與先兆性流產(chǎn)的關(guān)系，從而為臨床治療先兆性流產(chǎn)提供新的支持，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年6月-2016年6月在本院婦產(chǎn)科門診治療確診為早孕先兆流產(chǎn)患者40例作為試驗組，年齡（30.0±1.8）歲，平均孕次（1.5±0.3）次，停經(jīng)（7.8±1.2）周。另外選擇正常健康的早孕婦女40例作為對照組，年齡（31.0±1.3）歲，平均孕次（1.2±0.5）次，停經(jīng)（6.9±1.5）周。兩組的年齡、孕次及停經(jīng)等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.5），具有可比性。醫(yī)生詳細(xì)詢問每例患者病史并做詳細(xì)記錄，排除遺傳、解剖、自身免疫、內(nèi)分泌異常及感染性疾病。保證患者無自然流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)史，另外本次妊娠目前未出現(xiàn)陰道流血等先兆流產(chǎn)癥狀和體征，經(jīng)其他手段進(jìn)行診斷，例如B超等證實胚胎發(fā)育正常。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會同意，研究對象均已被告知相關(guān)的信息，簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 試驗組 患者同意試驗后，并在接受其他的藥物治療前，懷孕7周左右時，取空腹靜脈血4 mL，常溫分離血清，并置于-20 ℃保存。之后給予黃體酮治療，分別收集患者懷孕8、9、10和12周空腹靜脈血4 mL，常溫分離血清，同樣-20 ℃保存。采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法（ELISA）測定血清中孕酮及PIBF的含量[6]。檢測試劑盒購自南京建成生物試劑有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作和測定。

1.2.2 對照組 收集與試驗組患者的同期的正常健康早孕婦女孕周分別在7、8、9、10和12周取空腹靜脈血4 mL，常溫分離血清，同樣-20 ℃保存。采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法（ELISA）測定血清中孕酮及PIBF的含量。檢測方法及操作同上述試驗組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后血清中孕酮與PIBF水平變化比較 治療過程中兩組均未出現(xiàn)不全流產(chǎn)和完全流產(chǎn)病例。給藥治療前即孕7周，試驗組的血清孕酮與PIBF水平均明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；之后給予黃體酮治療，試驗組的孕酮與PIBF水平隨著孕周的延長，而逐漸升高，從第8孕周起，PIBF水平逐漸升高，直至12孕周趨近于正常水平，孕9、10、12周的PIBF水平與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），但與試驗組治療前水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 血清中孕酮及PIBF相關(guān)性分析 對照組血清孕酮與PIBF呈正相關(guān)關(guān)系，以血清孕酮水平做X軸，以血清孕酮誘導(dǎo)的封閉因子（PIBF）水平為Y軸進(jìn)行相關(guān)性分析，得到相關(guān)曲線為：Y=1.789+1.897X（R2=0.954）；但試驗組中血清孕酮與PIBF水平不具備顯著相關(guān)關(guān)系。見圖1、2。

3 討論

最早是Szekeres-Bartho在早期提出PIBF是一種調(diào)節(jié)妊娠免疫應(yīng)答的有效因子，它在妊娠保護(hù)作用機制中起重要作用[7-8]。另有學(xué)者認(rèn)為PIBF可能是一種孕激素調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)母胎界面的免疫微環(huán)境，達(dá)到保護(hù)胚胎正常免疫系統(tǒng)的形成，從而保護(hù)正常的妊娠[9]。有學(xué)者研究已經(jīng)表明：流產(chǎn)婦女血清中PIBF表達(dá)水平低于正常妊娠婦女，并發(fā)現(xiàn)此類患者尿液中的PIBF濃度也顯著低于正常妊娠婦女[10]。這些現(xiàn)有的研究都表明PIBF水平的異常與妊娠流產(chǎn)之間存在密切聯(lián)系。國內(nèi)也有較多研究已經(jīng)證明：先兆流產(chǎn)的原因主要表現(xiàn)為妊娠早期血清PIBF水平降低，黃體酮可以通過上調(diào)血清PIBF表達(dá)水平，保護(hù)胚胎降低先兆性流產(chǎn)的發(fā)生[11-13]?？傊?，PIBF的生物學(xué)效應(yīng)為維持正常妊娠，保護(hù)妊娠。妊娠婦女PIBF表達(dá)水平的變化可能部分的反映妊娠的病變情況，與妊娠的結(jié)局有關(guān)[14]。因此，檢測血清中PIBF的表達(dá)水平，可以預(yù)測胚胎發(fā)育情況，從而對于臨床使用黃體酮治療先兆流產(chǎn)具有重要的價值。

本研究結(jié)果顯示，給藥治療前即孕7周，試驗組的血清孕酮與PIBF水平均明顯低于對照組（P<0.05），之后給予黃體酮治療，試驗組的孕酮與PIBF水平隨著孕周的延長，而逐漸升高，從8孕周起孕酮與PIBF水平均逐漸升高，直至12孕周趨近于正常水平。這與已有的研究結(jié)果也是一致的：對于先兆性流產(chǎn)患者，給予黃體酮治療一定的療程后，能起到維持良好的妊娠發(fā)育與胎兒成長，改善孕婦正常的激素與內(nèi)分泌水平的作用[15-16]。也證明了PIBF及孕酮水平對于預(yù)測和診斷反復(fù)自然流產(chǎn)具有較大的參考意義。進(jìn)一步的，對于PIBF與孕酮之間的關(guān)系進(jìn)行探討，發(fā)現(xiàn)對照組血清孕酮及PIBF呈正相關(guān)關(guān)系，以血清孕酮水平做X軸，以血清孕酮誘導(dǎo)的封閉因子（PIBF）水平為Y軸進(jìn)行相關(guān)性分析，得到相關(guān)曲線為：Y=1.789+1.897X （R2=0.954）；但試驗組中血清孕酮與PIBF水平不具備顯著相關(guān)關(guān)系。這證明兩者之間的相關(guān)性的確存在[17]。在試驗組先兆性流產(chǎn)中兩者無相關(guān)性，說明體內(nèi)的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)的異常，可能導(dǎo)致了兩者水平的相對變化。

現(xiàn)在廣為接受的PIBF影響妊娠結(jié)局的機制主要是：妊娠過程中，父方基因胚胎抗原能夠刺激胎兒-母體之間的胎盤屏障區(qū)域，使相鄰界面部分蛻膜細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生PR，該受體可以與孕酮結(jié)合，并被激活，進(jìn)一步誘發(fā)免疫反應(yīng)，產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)蛋白PIBF，降低蛻膜淋巴細(xì)胞毒性，維持母體與胎兒的免疫微環(huán)境，改善胎兒的生活環(huán)境，有利于胚胎的免疫逃避[16-18]。而在先兆流產(chǎn)患者體內(nèi)，由于血中孕酮分泌不足、當(dāng)父方基因胚胎抗原刺激誘發(fā)免疫反應(yīng)，蛻膜細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生PR后，孕酮無法與其正常結(jié)合，或結(jié)合數(shù)量不足、結(jié)合后無法激活等原因而導(dǎo)致母體免疫系統(tǒng)的異常，胚胎可能受到細(xì)胞毒性損害[19]；另外可能會出現(xiàn)纖體分泌糖原不足，胚胎著床營養(yǎng)不足等癥狀。而經(jīng)黃體酮治療后，能夠誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答，與PR結(jié)合并激活PR，產(chǎn)生足夠有效的PIBF，提升先兆流產(chǎn)患者血清孕酮水平，維持胎兒的正常免疫環(huán)境，促使其正常發(fā)育，保護(hù)妊娠過程[20-21]。

隨著現(xiàn)代社會的發(fā)展，各種的刺激因素越來越多，先兆流產(chǎn)與反復(fù)自然流產(chǎn)的患者越來越多，臨床的傳統(tǒng)治療為根據(jù)妊娠早期的低水平的孕激素，給予適度甚至過度黃體酮進(jìn)行治療，這可能會產(chǎn)生嚴(yán)重后果，不能夠準(zhǔn)確判斷病理妊娠。本研究測定PIBF與孕酮，并納入常規(guī)指標(biāo)，在早孕患者中進(jìn)行定期檢測，從而為診斷病理妊娠和給予黃體酮治療提供更加準(zhǔn)確與可靠的判斷依據(jù)，更加準(zhǔn)確的預(yù)測妊娠結(jié)局，大大提高臨床治療先兆性流產(chǎn)的治療效果。

參考文獻(xiàn)

[1]晁遠(yuǎn)，翁立冬，曾嶸，等.基因組DNA甲基化水平與不明原因早期自然流產(chǎn)的相關(guān)性[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014，34（10）：1498-1502.

[2]范小靜，王維華，劉如如，等.藏族農(nóng)村育齡婦女自然流產(chǎn)的流行病學(xué)特征及其影響因素分析[J].中華流行病學(xué)雜志，2014，35（4）：401-405.

[3]賴有行，李正梅，詹新林，等.主動免疫聯(lián)合中藥治療封閉抗體不足性反復(fù)自然流產(chǎn)的臨床觀察[J].中國婦幼保健，2014，29（21）：3486-3488.

[4]賀美榮，樊衛(wèi)平，師偉，等.山西省215例自然流產(chǎn)患者心磷脂抗體及抗β2糖蛋白抗體分析[J].軍事醫(yī)學(xué)，2015，40（6）：512-514.

[5]黨一平.孕期大鼠EMMPRIN介導(dǎo)的子宮及血管組織基質(zhì)金屬蛋白酶對雌、孕激素反應(yīng)機制的相關(guān)性研究[D].武漢：華中科技大學(xué)，2013.

[6]魏萍，李運星，陳春，等.熒光原位雜交技術(shù)檢測自然流產(chǎn)組織染色體非整倍體[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2015，32（2）：229-232.

[7]楊小芳，彭君醒，葉國娟，等.孕激素對先兆流產(chǎn)患者血清PIBF水平變化及妊娠結(jié)局的影響[J].中國婦幼保健，2016，31（9）：1920-1922.

[8]梅冰，陳永玲，張水蓉，等.復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者M(jìn)ICA分子的表達(dá)及啟動子的甲基化[J].廣東醫(yī)學(xué)，2014，35（21）：3338-3341.

[9]楚偉，郭文潮，王方娜，等.石家莊地區(qū)1513對自然流產(chǎn)夫婦的細(xì)胞遺傳學(xué)分析[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2013，30（1）：121-122.

[10]宋芳，楊占君，何金鑫，等.孕酮對自然流產(chǎn)小鼠白細(xì)胞介素6表達(dá)的影響[J].解剖學(xué)雜志，2014，37（6）：747-750.

[11]范開蓉，李玉蘭，陳艷，等.復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者孕期的血液流變學(xué)變化及肝素治療效果[J].廣東醫(yī)學(xué)，2014，35（14）：2229-2231.

[12]劉玉昆，劉穎琳，杜濤，等.早期妊娠自然流產(chǎn)患者的超聲表現(xiàn)與絨毛染色體核型分析[J].中山大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2013，34（1）：94-98.

[13]陳一紅，胡繼芬.血管內(nèi)皮生長因子及其可溶性受體表達(dá)水平與復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)相關(guān)性研究[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2015，31（14）：1402-1404.

[14]任興斌，張偉.免疫治療不明原因反復(fù)自然流產(chǎn)患者群體反應(yīng)抗體、TGF-β和nTreg表達(dá)變化的研究[J].中國免疫學(xué)雜志，2015，31（6）：831-834.

[15]馬娟.地屈孕酮對習(xí)慣性流產(chǎn)孕婦血清PIBF及妊娠結(jié)局的影響[J].中國臨床研究，2015，28（4）：494-496.

[16]彭君醒，楊小芳，葉國娟，等.先兆流產(chǎn)孕婦血清PIBF（孕激素誘導(dǎo)的阻斷因子）水平的表達(dá)及黃體酮治療對其的影響[J].海峽藥學(xué)，2015，27（5）：86-88.

[17]易丹妮，陳愛蘭，鐘子健.廣州市區(qū)早期自然流產(chǎn)孕婦流產(chǎn)影響因素及現(xiàn)況分析[J].廣東醫(yī)學(xué)，2015，36（7）：1105-1109.

[18]梁穎莉.腦膜瘤中HER2、p-AKT、脂肪酸合酶及Ki-67的表達(dá)關(guān)系及其臨床意義[D].廣州：南方醫(yī)科大學(xué)，2015.

[19]王振榮，劉娜，杜潘艷，等.反復(fù)自然流產(chǎn)患者外周血白介素水平變化檢測的意義[J].中國婦幼保健，2013，28（12）：1932-1933.

[20]謝萍.黃體酮療法治療先兆流產(chǎn)對妊娠期合并癥及圍生兒結(jié)局的影響[J].醫(yī)學(xué)綜述，2016，22（2）：356-358.

[21]李光梅，鄧舒靜，蘇瑜，等.外周血凝血相關(guān)因子水平與不明原因反復(fù)自然流產(chǎn)的關(guān)系[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13（12）：1614-1616.