高爾基體蛋白73在甲胎蛋白陰性原發(fā)性肝癌患者中的診斷意義

馬 娟，張愛蕓，王 煜，張 旭，馬 燕，劉 鑫

·論 著·

高爾基體蛋白73在甲胎蛋白陰性原發(fā)性肝癌患者中的診斷意義

馬 娟1，張愛蕓1，王 煜1，張 旭2，馬 燕2，劉 鑫2

目的 探討高爾基體蛋白73(GP73)在甲胎蛋白(AFP)陰性的原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌(HCC)患者中的診斷意義。方法 依據(jù)研究對象的納排標(biāo)準(zhǔn)，將入組的112例HCC患者分組，其中乙肝相關(guān)性原發(fā)性肝癌患者(HBsAg陽性組)79例，非乙肝相關(guān)性原發(fā)性肝癌患者(HBsAg陰性組)33例；而APP陰性患者(AFP<20 μg/L)65例，AFP陽性患者(AFP>20 μg/L)47例。檢測112例入組患者的空腹血清GP73、AFP水平，對各組中二者水平是否陽性及HBsAg是否陽性進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果 比較112例肝癌患者HBsAg陽性和陰性的GP73表達(dá)，結(jié)果顯示，HBsAg陽性組與HBsAg陰性組血清GP73、AFP水平均明顯升高，但2組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。血清GP73單項檢測陽性患者74例，陽性率66.07%；血清AFP單項檢測陽性患者47例，陽性率41.96%；血清GP73及AFP聯(lián)合檢測陽性患者68例，陽性率60.71%，與血清AFP單項檢測陽性率、陰性率比較，血清GP73、血清GP73聯(lián)合AFP差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。65例血清AFP陰性患者，GP73檢測陽性患者39例，陽性率達(dá)60%，與血清AFP單項檢測相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 血清GP73在肝癌患者中表達(dá)與HBsAg是否陽性無相關(guān)性，對AFP陰性的肝癌患者，其對肝癌補(bǔ)充診斷方面具有一定臨床價值。

原發(fā)性肝癌；高爾基體蛋白73；甲胎蛋白

原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌(HCC)是一種多見、惡性程度高、進(jìn)展快、預(yù)后差的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類健康。在當(dāng)今全球，每年平均約25萬患者死于肝癌，其中我國患者占45%[1]，且HCC每年的發(fā)病率、死亡率均有所升高，其總體5年生存率<10%[2]，遠(yuǎn)期預(yù)后極差。研究表明，原發(fā)性肝癌缺乏早期特異性較高的診斷指標(biāo)及手段是其預(yù)后差的主要原因之一。甲胎蛋白(AFP)是目前臨床診斷HCC較為常用的血清學(xué)指標(biāo)，由于其診斷靈敏度不夠，部分HCC患者的AFP檢測結(jié)果呈陰性或低濃度，使其早期診斷頗感困惑，研究發(fā)現(xiàn)多種血清學(xué)指標(biāo)聯(lián)合檢測有望提高診斷效率[3]。本文通過檢測原發(fā)性肝癌患者血清中高爾基體蛋白73(GP73)和AFP兩種標(biāo)志物，探討檢測GP73在AFP陰性的HCC患者中診斷的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選擇2014年2月-2015年4月在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院感染疾病科門診及住院治療的首診原發(fā)性肝癌患者中符合標(biāo)準(zhǔn)的112例HCC患者為研究對象。其中乙肝相關(guān)性原發(fā)性肝癌患者(HBsAg陽性組)79例，非乙肝相關(guān)性原發(fā)性肝癌患者(HBsAg陰性組)33例，而AFP陰性患者(AFP<20 μg/L)65例，AFP陽性患者(AFP>20 μg/L)47例，各組間性別、年齡等差異無統(tǒng)計學(xué)意義。所有入組HCC患者均符合：①診斷標(biāo)準(zhǔn)符合第4屆全國肝癌學(xué)術(shù)大會討論通過的原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②均為首次確診、尚未接受規(guī)范抗病毒及任何抗腫瘤治療；③排除既往接受過抗病毒、放化療及手術(shù)治療者，排除合并妊娠、胃腸道其他部位腫瘤、生殖腺惡性腫瘤等情況。針對血清AFP水平、血清GP73水平，以目前文獻(xiàn)資料為依據(jù)設(shè)定，血清AFP水平<20 μg/L及血清GP73水平<45 ng/L為陰性，AFP水平>20 μg/L及血清GP73水平>45 ng/L為陽性。

1.2 檢測方法:將112例入組肝癌患者統(tǒng)一空腹8 h以上，采集肘靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心8 min，血清置-70 ℃冰箱保存?zhèn)溆?，以測定血清GP73的水平。GP73測定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(定量)檢測，AFP測定采用電化學(xué)發(fā)光法檢測，試劑盒均訂購于北京熱景生物技術(shù)有限公司。

2 結(jié)果

2.1 肝癌患者中血清GP73、AFP與乙肝表面抗原(HBsAg)攜帶關(guān)系：112例入組肝癌患者中，HBsAg陽性79例，HBsAg陰性33例，比較2組患者血清GP73水平的表達(dá)。結(jié)果顯示，HBsAg陽性組與HBsAg陰性組血清GP73水平及血清AFP水平均明顯升高，但2組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示GP73與AFP水平的表達(dá)可能與HBsAg是否陽性無相關(guān)性，見表1。

表1 112例肝癌患者HBsAg與血清 GP73、AFP水平的關(guān)系

表2 112例肝癌患者血清GP73和AFP 單項及聯(lián)合檢測比較[n(%)]

注：*與AFP比較，P<0.05。

表3 65例AFP陰性肝癌患者GP73陽性率 與AFP陽性率比較[n(%)]

3 討論

近40年來，臨床上對肝癌高危人群的篩查主要依靠血清AFP檢測和影像學(xué)檢查，血清AFP升高對肝癌診斷的專一性僅次于肝組織病理檢查，其特異性較高,假陽性率較低,為目前臨床廣泛應(yīng)用、最有價值的早期篩查及診斷肝癌的血清學(xué)指標(biāo)，但其敏感性不高，有30%左右的HCC患者血清AFP表達(dá)呈陰性?？赡茉驗?AFP僅在腫瘤細(xì)胞周期某一時相合成，且肝癌細(xì)胞具有合成與不合成AFP的2種細(xì)胞成分,當(dāng)肝細(xì)胞出現(xiàn)癌變時,具備合成AFP的肝癌細(xì)胞在特定的細(xì)胞周期時，在低甲基化作用下開放AFP基因表達(dá),此時檢測血清AFP水平呈陽性，可將AFP可作為診斷肝癌的腫瘤標(biāo)志物;而當(dāng)AFP基因表達(dá)因某因素調(diào)控停止在轉(zhuǎn)錄后、翻譯前時,則檢測血清AFP水平呈陰性或低水平，這就在一定程度上限制了血清AFP在診斷中的臨床實用性[5]。

GP73是近年來研究火熱、臨床上值得期待的肝癌血清標(biāo)志物之一，它是一種整合膜蛋白，存在于高爾基體順面膜囊上，具有典型的Ⅱ型跨膜蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，主要在人體組織的上皮細(xì)胞中表達(dá)，而肝細(xì)胞中則幾乎測不到其表達(dá)[6]。有學(xué)者研究認(rèn)為，HCC患者GP73高水平表達(dá)因HBV感染后所引起，但也有學(xué)者持反對態(tài)度，他們認(rèn)為其在HCC患者肝細(xì)胞的高水平表達(dá)并非僅由病毒感染引起。

本研究分析了112例肝癌患者HBsAg攜帶情況與血清GP73的濃度關(guān)系，比較HBsAg陽性和陰性的肝癌患者血清GP73表達(dá)。結(jié)果顯示，HBsAg陽性組與HBsAg陰性組血清GP73水平及血清AFP水平均明顯升高，但2組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示血清GP73與AFP水平的表達(dá)可能與HBsAg是否陽性無相關(guān)性。臨床發(fā)現(xiàn)，在患有病毒性或非病毒性肝病者的血清GP73、AFP均有升高，提示二者的高表達(dá)是肝細(xì)胞損傷后的一個共同標(biāo)志，而并非僅由HBV感染所致。Iftikha[7]等用免疫組化及Westernblot等方法也證實，GP73表達(dá)在各類肝病中沒有明顯的差異性。Kladney等[8]研究發(fā)現(xiàn)，不論何病因的肝硬化患者中，肝細(xì)胞GP73表達(dá)均有明顯升高。他們研究證實，在HBV相關(guān)性肝硬化患者中，其肝細(xì)胞GP73表達(dá)明顯升高，與正常肝臟相比，有的升高可達(dá)70倍，但與酒精性肝硬化、自身免疫性肝硬化以及HCV相關(guān)的肝硬化比較，則其升高的幅度無明顯差異。

目前諸多研究表明，GP73在肝癌、肝硬化進(jìn)展期或急性肝炎時均呈高表達(dá)，并且隨著肝病的發(fā)展其表達(dá)逐步上調(diào)；隨著病情恢復(fù)，GP73的表達(dá)水平也可逐漸下降，GP73水平與疾病的發(fā)展階段有關(guān)。正常肝臟組織中，肝細(xì)胞幾乎不表達(dá)GP73，而在急性肝炎、較嚴(yán)重的肝纖維化時，GP73在肝細(xì)胞中表達(dá)明顯上調(diào)，肝硬化時其表達(dá)又進(jìn)一步提高，而發(fā)展到肝癌時，它的表達(dá)到高峰[9]。研究證實，GP73表達(dá)與肝癌的發(fā)生、病情發(fā)展及轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示112例肝癌患者，血清GP73單項檢測陽性率66.07%，血清AFP單項檢測陽性率41.96%，這就意味著AFP單項檢測時，將有近58%的原發(fā)性肝癌患者可能會被漏檢。進(jìn)一步探討血清GP73對AFP陰性肝癌患者的診斷價值，結(jié)果顯示，在65例AFP陰性的原發(fā)性肝癌患者中有39例GP73>45 ng/mL，陽性率達(dá)60%，提示血清GP73有助于AFP陰性肝癌患者的早期檢出。本研究結(jié)果顯示，血清GP73及AFP聯(lián)合檢測陽性率60.71%，與血清AFP單項檢測陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示兩者聯(lián)合檢測將有可能提高肝癌的檢出率。這與Riener[10]和Marrero[11]、毛一雷等[12]、鄭建建[13]等研究結(jié)論一致，他們一致認(rèn)為，GP73在肝細(xì)胞中高表達(dá)與肝細(xì)胞癌關(guān)系密切，具有比AFP更高的敏感性和特異性，可一定程度地提高AFP陰性肝癌患者的早期檢出率，在HCC早期診斷中，具有良好的臨床應(yīng)用前景。但由于本研究納入病例僅為確診肝癌患者，且病例數(shù)偏少，結(jié)果及結(jié)論均具有一定的局限性。

[1] 葛均波，徐永健.內(nèi)科學(xué)[M].第8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：429.

[2] Shariff MI,Cox IJ,Gomaa AI,et al.Hepatocellular carcinoma:current trends in worldwide epidemiology,risk factors,diagnosis and therapeutics[J].Expert Review of Gastroenterology & Hepatology,2009,3(4):353-367.

[3] 康從利，王艷，林雪，等.血清腫瘤標(biāo)記物聯(lián)合檢測診斷原發(fā)性肝癌的臨床應(yīng)用研究[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2014(13)：2408-2411.

[4] 中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會.原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中華肝臟病雜志，2000，8(3)：135.

[5] 趙斌，趙經(jīng)川，李昭宇.AFP聯(lián)合三項血清酶對原發(fā)性肝癌的診斷評價[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2010，32(1)：20-21.

[6] 朱國民，周曉慶，林長青，等.新肝癌標(biāo)志物高爾基體蛋白73在肝癌血清學(xué)診斷中的應(yīng)用[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2010，20(15)：2350-2352.

[7] Iftikhar R,Kladney RD,Havlioglu N,et al.Disease and cell specific expression of GP73 in human liver disease[J].The American Journal of Gastroenterology,2004,99(6):1087-1095.

[8] Kladney RD,Cui X,Bulla GA,et al.Expression of GP73,a resident Golgi membrane protein,in viral and nonviral liver disease[J].Hepatology,2002,35(6):1431-1440.

[9] MAO Yilei,YANG Huayu,XU Haifeng,et al.Golgi protein 73(GOLPH2)is a valuable serum marker for hepatocellular carcinoma[J].Gut,2010,59(12):1687-1693.

[10] Riener MO,Stenner F,Liewen Heike,et al.Golgi phosphoprotein 2(GOLPH2)expression in liver tumors and its value as a serum marker in hepatocellular carcinomas[J].Hepatology,2009,49(5):1602-1609.

[11] Marrero JA,Romano PR,Nikolaeva O,et al.GP73,a resident Golgi glycoprotein is a novel serum marker for hepatocellular carcinoma[J].Journal of Hepatology,2005,43(6):1007-1012.

[12] 毛一雷，楊華瑜，徐海峰，等.新的肝癌血清標(biāo)記物GP73在肝癌診斷中的初步研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2008，88(14)：948-951.

[13] 鄭建建，錢瓊信，王斯璐，等.慢性乙型肝炎患者血清GP73與肝纖維化的相關(guān)性[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2012，22(2)：247-251.

Golgi protein 73 in AFP-negative diagnosis of primary liver cancer patients

MAJuan1,ZHANGAiyun1,WANGYu1,ZHANGXu2,MAYan2,LIUXin2.

1.DepartmentofInfectionDiseose,TheGeneralHospitalofNingxiaMedicalUniversity,Yinchuan750004,China;2.NingxiaMedicalUniversity,Yinchuan750004,China

WANGYu,Email:wangyu0127@163.com

Objective To discussed the diagnostic significance of Golgi protein 73 in AFP-negative patients with primary liver cancer.Methods According to the criterion of study,112 cases of Hepatocellular Carcinoma(HCC)patients were enrolled the group，including 79 cases of HBV-related HCC patients(HBsAg positive group)and 33 cases of non-HBV-related HCC patients(HBsAg negative group).AFP-negative patients(AFP<20 μg/L)were 65 cases and AFP-positive patients(AFP>20 μg/L)were 47 cases.112 patients were detected the fasting serum GP73 and AFP levels，which were analyzed.Results The levels of GP73 and AFP were significantly increased in HBsAg positive and HBsAg negative groups,there was no significant difference(P>0.05).Of the 112 patients with liver cancer，there were 74 patients tested the GP73 single,the positive rate was 66.07% and there were 47 patients tested the AFP single，the positive rate was 41.96%.There were 68 cases whose GP73 and AFP were all positive,the positive rate were 60.71%.Compared with the AFP positive rate and the negative rate，the GP73 and the joint of GP73 and AFP were statistically significant(P<0.05),65 cases of serum AFP negative patients，GP73 test positive in 39 patients，the positive rate was 60%，with serum AFP single detection contrast，the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion GP73 expression in the serum is not correlation with the HBsAg.It has some clinical value to the AFP-negative patients with liver cancer.

Hepatocellularcarcinoma;Golgiprotein73;Alpha-fetoprotein

10.13621/j.1001-5949.2017.04.0298

1.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院感染疾病科，寧夏 銀川 750004 2.寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏 銀川 750004

馬娟(1986-)，女，回族，碩士研究生，主要從事肝病的臨床診治工作。

王煜，Email：wangyu0127@163.com

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20170328.2051.006.html

R575

A

2016-09-17 [責(zé)任編輯]王凱榮