肝癌患者血液中VEGF—C、VEGF—D和受體VEGFR—3的表達(dá)及意義

廖文勝+胡虞乾+何陽陽+李西融+唐澄海+杜延召+李江發(fā)

[摘要] 目的 探討肝細(xì)胞性肝癌患者血液中血管內(nèi)皮生長因子-C（VEGF-C）、血管內(nèi)皮生長因子-D（VEGF-D）和血管內(nèi)皮生長因子受體-3（VEGFR-3）的表達(dá)及意義。 方法 以2012年8月～2014年8月經(jīng)南溪山醫(yī)院病理科確診為肝細(xì)胞性肝癌的40例患者為肝癌組，以同期10例非肝癌患者為非肝癌組。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測患者外周靜脈血VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3的表達(dá)，統(tǒng)計分析VEGF-C、VEGF-D和受體VEGFR-3的表達(dá)與肝癌發(fā)生的關(guān)系。 結(jié)果 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在肝癌組術(shù)前血液中的表達(dá)顯著高于肝癌組術(shù)后和非肝癌組（P < 0.05），并且VEGFR-3的表達(dá)與VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r = 0.982、0.975，均P < 0.01）。 結(jié)論 VEGF-C、VEGF-D和受體VEGFR-3在肝細(xì)胞性肝癌患者血液中的表達(dá)明顯增高，其可能與肝癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 肝細(xì)胞性肝癌；血管內(nèi)皮生長因子-C；血管內(nèi)皮生長因子-D；血管內(nèi)皮生長因子受體-3

[中圖分類號] R735.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）03（b）-0099-03

Expression and significance of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 in the blood of patients with hepatocellular carcinoma

LIAO Wensheng1 HU Yuqian1 HE Yangyang1 LI Xirong1 TANG Denghai1 DU Yanzhao1 LI Jiangfa2

1.Department of Hepatopancreat Obliliary Surgery， Nanxishan Hospital， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Guilin 541000， China； 2.Department of Hepatopancreat Obliliary Surgery， Affiliated Hospital of Guilin Medical University， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Guilin 541000， China

[Abstract] Objective To explore the expression and significance of vascular endothelial growth factor-C （VEGF-C）， vascular endothelial growth factor-D （VEGF-D） and vascular endothelial growth factor receptor-3 （VEGFR-3） in the blood of patients with hepatocellular carcinoma. Methods Forty HCC patients diagnosed at the Department of Pathology of Nanxishan Hospital from August 2012 to August 2014 were selected as hepatoma group， and 10 non-hepatoma patients at the same time were selected as non-hepatoma group. The expression of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 in blood samples was determined by enzyme-linked immune-sorbent assay. The relationship between VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 with the occurrence of hepatocellular carcinoma was analyzed statistically. Results The expression of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 in the blood of pre-operative hepatoma group was significantly higher than those in the blood of post-operative hepatoma group and non-hepatoma group （P < 0.05）. The expression of VEGFR-3 showed a significant positive correlation with the expression of VEGF-C， VEGF-D （r = 0.982， 0.975， all P < 0.01）. Conclusion The expression of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 are increased in the blood of patients with hepatocellular carcinoma， which may be associated with the occurrence and development of hepatocellular carcinoma.

[Key words] Hepatocellular carcinoma； Vascular endothelial growth factor-C； Vascular endothelial growth factor-D； Vascular endothelial growth factor receptor-3

肝細(xì)胞性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）在男性患者各種腫瘤的病死率中排列第2位[1]，HCC具有易轉(zhuǎn)移、預(yù)后差、易復(fù)發(fā)等特點，腫瘤組織所具有的侵襲轉(zhuǎn)移的特點正是肝癌預(yù)后差、易復(fù)發(fā)的病理學(xué)基礎(chǔ)，其轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制還不明確，研究原發(fā)性HCC的機(jī)制和轉(zhuǎn)移規(guī)律具有重要臨床價值。目前研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生進(jìn)展：生長、浸潤、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)都是依靠腫瘤新生血管和淋巴管的形成，如果控制腫瘤的新生血管的出現(xiàn)和淋巴管生成就能夠有效地控制腫瘤的生長及進(jìn)展[2]。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）通過促淋巴管及血管生長的作用，從而對肝癌的發(fā)生、發(fā)展產(chǎn)生影響。VEGF家族及其受體（VEGFR），通過與其受體結(jié)合發(fā)揮促淋巴管及血管生長的作用，在腫瘤中促進(jìn)新生毛細(xì)血管生成，介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞生成、增殖和遷移，并且誘導(dǎo)淋巴管生成，增加血管通透性，是腫瘤淋巴管和血管生成的重要因子[3]，與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。通過對肝癌患者及正常人群的肝臟組織中血管內(nèi)皮生長因子-C（VEGF-C）、血管內(nèi)皮生長因子-D（VEGF-D）和血管內(nèi)皮生長因子受體-3（VEGFR-3）的表達(dá)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)在肝癌中這些因子表達(dá)明顯高于非肝癌組[4-5]，它們的高表達(dá)有可能促進(jìn)了新生血管的形成和新生淋巴管的出現(xiàn)，進(jìn)而加快了腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移，從而影響HCC患者的預(yù)后[5-10]。同時，相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)，VEGF-C參與了肝惡性腫瘤轉(zhuǎn)移及淋巴轉(zhuǎn)移過程[11]。研究發(fā)現(xiàn)在HCC中可發(fā)現(xiàn)VEGFR-3顯著上調(diào)[12]。那么在患者血液中是否也存在這樣的情況，本研究對此進(jìn)行了相關(guān)研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2012年8月～2014年8月經(jīng)南溪山醫(yī)院病理科確診為HCC（診斷標(biāo)準(zhǔn)參見文獻(xiàn)[13]）的40例患者為肝癌組，以同期10例非肝癌患者為非肝癌組。肝癌組，男30例，女10例，平均年齡（52.5±11.5）歲；非肝癌組，男8例，女2例，平均年齡（54.0±11.6）歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。對所有受試者在試驗前履行知情同意告知并獲同意后入選本研究。肝癌組患者根據(jù)原發(fā)性肝癌TMN系統(tǒng)：Ⅰ期14例，Ⅱ期15例，ⅢA期11例。

1.2 方法

非肝癌組取一次外周靜脈血液。肝癌組分別于術(shù)前1 d和術(shù)后1周采取外周靜脈血，外周靜脈血于清晨空腹采集靜脈血10 mL，取5 mL注入加有10% EDTA Na2 30 μL和抑肽酶40 μL的試管中，混勻；另5 mL加入空白試管中。以上標(biāo)本均在10 min內(nèi)于4℃低溫情況下以離心半徑10 cm、3000 r/min離心10 min，取上清置于-78℃冰箱保存，待標(biāo)本收集完后行VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3檢測，并收集患者的一般臨床資料。

用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法嚴(yán)格按試劑盒（人VEGF-C ELISA測定試劑盒、人VEGF-D ELISA測定試劑盒、人VEGFR-3 ELISA測定試劑盒）說明書測定血清VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩樣本比較使用t檢驗；等級資料相關(guān)分析用Spearman等級相關(guān)性分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3在肝癌組、非肝癌組血液中的表達(dá)

肝癌組術(shù)前血液中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達(dá)顯著高于肝癌組術(shù)后和非肝癌組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3相關(guān)性分析

VEGFR-3的表達(dá)與VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r = 0.982、0.975，均P < 0.01）。

2.3 術(shù)前VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3與肝癌患者分期的關(guān)系

術(shù)前血液中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達(dá)與患者臨床分期相關(guān)（P < 0.05）。見表2。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)在肝癌組術(shù)前血清中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達(dá)顯著高于非肝癌組，與其他的研究結(jié)果一致[14-16]；Meta分析發(fā)現(xiàn)HCC患者組織中VEGF的表達(dá)明顯高于健康正常人，差異有統(tǒng)計學(xué)意義[17-20]；這意味著肝癌細(xì)胞分泌了大量的VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3，增進(jìn)了腫瘤血管的生成，進(jìn)而為腫瘤細(xì)胞生長提供所需的營養(yǎng)物質(zhì)，并且為腫瘤轉(zhuǎn)移提供了可能的條件[21-22]。張紹武等[15]研究發(fā)現(xiàn)肝癌患者血清VEGF水平顯著高于對照組血清（P < 0.01）。

本研究發(fā)現(xiàn)肝癌組術(shù)后血清中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達(dá)較術(shù)前顯著下降。介入栓塞可以降低肝癌患者血清VEGF，改善患者預(yù)后[23-26]。手術(shù)切除腫瘤后，解除了肝癌對機(jī)體及血管生成的影響，使得肝癌刺激新生血管生成也減少，在一定程度上抑制了腫瘤的進(jìn)展[14]。血液中這幾個因子的動態(tài)監(jiān)測有可能作為判斷手術(shù)療效及預(yù)后的指標(biāo)。

本研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達(dá)與患者臨床分期密切相關(guān)，結(jié)果與其他研究相似，有轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)的患者血清VEGF水平顯著高于無轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)的患者[15]。這提示可以通過對VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的檢測對患者是否有轉(zhuǎn)移進(jìn)行預(yù)判。

研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C、VEGF-D和受體VEGFR-3在肝癌患者血液中表達(dá)增高，表明VEGF與HCC可能存在的關(guān)系；術(shù)后表達(dá)較術(shù)前顯著降低，這幾個因子有可能用于判斷手術(shù)療效的監(jiān)測。

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