CD29和EGFR在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義

邱立+柳玉紅+龔靜青+汪春福

【摘要】 目的：探討粘附因子CD29和表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）在乳腺癌中的表達(dá)情況和臨床意義。方法：收集乳腺癌標(biāo)本98例，腺病52例。利用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)CD29與EGFR的陽(yáng)性表達(dá)率，并分析兩者的相關(guān)性。結(jié)果：CD29和EGFR在腺病中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為5.8%（3/52）和3.8%（2/52），在乳腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.4%（69/98）和62.2%（61/98），在同一病種兩者的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但兩者在乳腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于腺病，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。浸潤(rùn)性癌陽(yáng)性表達(dá)率均高于原位癌（P<0.05），高級(jí)別癌的陽(yáng)性表達(dá)率均高于低級(jí)別癌（P<0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性表達(dá)率均高于無(wú)轉(zhuǎn)移（P<0.05）。結(jié)論：CD29和EGFR的高表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生、分化及轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，而且兩者表達(dá)均呈正相關(guān)，因此檢測(cè)乳腺癌的CD29和EGFR對(duì)治療及預(yù)后有指導(dǎo)作用。

【關(guān)鍵詞】 乳腺癌； 粘附因子CD29； 表皮生長(zhǎng)因子受體

Expression and Clinical Significance of CD29 and EGFR in Breast Cancer/QIU Li，LIU Yu-hong，GONG Jing-qing，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（12）：051-054

【Abstract】 Objective：To investigate the expression and clinical significance of CD29 and epidermal growth factor receptor （EGFR） in breast cancer.Method：Collected 98 cases of breast cancer specimens，52 cases of adenomyosis.The positive expression rates of CD29 and EGFR were detected by immunohistochemistry， and the correlation between them was analyzed.Result：The positive expression of CD29 and EGFR in adenosis rates were 5.8%（3/52） and 3.8%（2/52），the positive expression rate in breast cancer were 70.4%（69/98） and 62.2%（61/98），there were no significant differences in the positive expression rate of the same disease（P>0.05），but the positive expression both in breast cancer rates were significantly higher than those of adenosis，the differences were statistically significant（P<0.05）.The positive expression rate of invasive carcinoma was higher than that in situ carcinoma（P<0.05），and the positive expression rate of advanced carcinoma was higher than that of low grade carcinoma（P<0.05），the positive expression rate of lymph node metastasis was higher than that of non metastasis（P<0.05）.Conclusion：The high expression of CD29 and EGFR are correlated with the occurrence，differentiation and metastasis of breast cancer，and there is a positive correlation between them，therefore，the detection of CD29 and breast cancer has a guiding effect on the treatment and prognosis.

【Key words】 Breast cancer； Adhesion molecule CD29； Epidermal growth factor receptor

First-authors address：The Peoples Hospital in Baoan District of Shenzhen City，Shenzhen 518101，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.12.014

惡性腫瘤最重要的生物學(xué)特征是機(jī)體對(duì)自身細(xì)胞失去正常調(diào)控而呈克隆性增生，進(jìn)而出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞對(duì)周邊組織的侵犯和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。對(duì)周邊間質(zhì)失去粘附性以及新生血管的形成是腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的重要病理學(xué)基礎(chǔ)[1-2]。粘附因子CD29和表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）均可通過(guò)不同渠道參與腫瘤組織同細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的相互作用以及新生血管的形成，兩者的過(guò)表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、血管粘附及侵襲轉(zhuǎn)移都有著密切關(guān)系[3-4]，這對(duì)臨床治療及預(yù)后有重要指導(dǎo)意義。目前CD29、EGFR在乳腺癌中表達(dá)情況的相關(guān)性還鮮有報(bào)道。本研究通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)兩者的表達(dá)，分析其特點(diǎn)及相關(guān)性，尋求新的分子靶向治療途徑以及為預(yù)后評(píng)估提供依據(jù)的可能性，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年1月-2015年5月本院乳腺手術(shù)切除標(biāo)本150例，其中乳腺癌標(biāo)本98例，腺病標(biāo)本52例，所有患者均為女性。收集整理所有乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、病理類(lèi)型、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等臨床病理資料。

1.2 方法與試劑 所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛常規(guī)固定，脫水石蠟包埋后，按4 μm厚度切片，分別進(jìn)行HE及免疫組化染色。免疫組化采用SP法，操作由專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員嚴(yán)格按試劑盒規(guī)程說(shuō)明進(jìn)行，陽(yáng)性對(duì)照采用已知CD29和EGFR陽(yáng)性的胃癌組織切片，陰性對(duì)照采用PBS液替代1抗[5]。鼠抗人CD29、EGFR單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.3 免疫組化結(jié)果判讀 CD29陽(yáng)性表達(dá)定位于腫瘤細(xì)胞漿和/或細(xì)胞膜，呈棕黃色。EGFR陽(yáng)性表達(dá)定位于腫瘤細(xì)胞漿，呈棕黃色。隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡（×400）視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞≥5%者為陽(yáng)性病例，≤5%者為陰性病例[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)資料采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 x2檢驗(yàn)；CD29與EGFR表達(dá)相關(guān)性研究采用Spearman秩和相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD29、EGFR的表達(dá)情況 CD29、EGFR在乳腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.4%（69/98）、62.2%（61/98），均明顯高于在腺病中的陽(yáng)性表達(dá)率5.8%（3/52）、3.8%（2/52），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。典型情況見(jiàn)圖1、2。

2.2 CD29、EGFR的表達(dá)情況與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 CD29、EGFR的表達(dá)與病理分型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均有相關(guān)性（P<0.05）；與患者的年齡、腫瘤大小均無(wú)關(guān)（P>0.05），見(jiàn)表1。

2.3 CD29、EGFR在乳腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 采用Spearman秩和相關(guān)分析數(shù)據(jù)顯示，CD29和EGFR在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)性（r=0.375，P<0.05）。

3 討論

乳腺癌目前是我國(guó)女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，且發(fā)病率仍有逐年增高的趨勢(shì)。雖然隨著新的治療手段特別是分子靶向藥物的出現(xiàn)，乳腺癌患者的生存率有了明顯上升，但目前只有約30%的患者可達(dá)到臨床治愈的效果得以長(zhǎng)期生存，而大部分患者在根治性手術(shù)治療后仍然會(huì)出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的情形。乳腺癌的治療效果及預(yù)后與很多因素有關(guān)，其中最重要的是癌組織的侵襲與轉(zhuǎn)移能力。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，CD29和EGFR在多種惡性腫瘤組織中出現(xiàn)過(guò)表達(dá)的情況，同時(shí)在腫瘤細(xì)胞表面的分布也發(fā)生改變，這與腫瘤細(xì)胞的增殖擴(kuò)散和新生血管的形成密切相關(guān)；而且兩者還存在相互協(xié)同作用，進(jìn)而影響腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[7]。本研究結(jié)果顯示，CD29和EGFR在乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于腺?。≒<0.05），說(shuō)明兩者對(duì)乳腺癌的發(fā)生起到一定作用。

整合素（Integrin）屬于細(xì)胞粘附分子家族，是由α和β兩個(gè)穿膜糖蛋白亞基非共價(jià)形成的跨膜異二聚體[8]。其胞外區(qū)與分布在相鄰細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)的分子配體相結(jié)合后，胞內(nèi)區(qū)與細(xì)胞骨架及多種信號(hào)分子相連，產(chǎn)生焦點(diǎn)粘合物，這樣不僅可以介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的相互黏附，而且可以介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的雙向信號(hào)傳導(dǎo)，進(jìn)而參與細(xì)胞的分化、增殖、遷移等多種生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)[9-10]。粘附因子CD29即整合素β1鏈，是在細(xì)胞表面分布最廣的整合素家族成員。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CD29抗體能抑制胚胎血管形成過(guò)程中管腔的形成[11]，因此CD29在乳腺癌中的過(guò)表達(dá)還有利于侵襲轉(zhuǎn)移病灶中新生血管的形成。近年研究也顯示CD29參與腫瘤血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移等病理過(guò)程，其表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲能力密切相關(guān)。但是，研究發(fā)現(xiàn)CD29在不同腫瘤中的表達(dá)情況差異較大[12]。本研究結(jié)果顯示，CD29在乳腺癌中的表達(dá)與患者的年齡、腫瘤大小均無(wú)顯著相關(guān)性（P>0.05），同時(shí)在浸潤(rùn)性癌、高級(jí)別癌、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中的陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于原位癌、低級(jí)別癌及無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例（P<0.05），說(shuō)明CD29的表達(dá)是隨著腫瘤的進(jìn)展、病理級(jí)別的增高及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)而升高的，說(shuō)明其在腫瘤的發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為中具有促進(jìn)作用，可以成為乳腺癌的一種預(yù)后指標(biāo)以及潛在的分子靶向作用靶點(diǎn)。

EGFR是上皮生長(zhǎng)因子（EGF）促使細(xì)胞增殖和進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)的受體，屬于酪氨酸激酶型糖蛋白受體。文獻(xiàn)[13]研究發(fā)現(xiàn)，在許多惡性腫瘤中存在EGFR的高表達(dá)或異常表達(dá)。文獻(xiàn)[14]研究表明，EGFR的過(guò)度激活能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的克隆性增殖，抑制細(xì)胞凋亡。其可能機(jī)制有：EGFR的高表達(dá)引起下游信號(hào)傳導(dǎo)的增強(qiáng)；突變型EGFR受體或配體表達(dá)的增加導(dǎo)致EGFR的持續(xù)活化；受體下調(diào)機(jī)制的破壞；異常信號(hào)傳導(dǎo)通路的激活等[15]。EGFR的配體還可以通過(guò)自分泌形式激活EGFR促進(jìn)細(xì)胞增殖。此外，研究發(fā)現(xiàn)EGFR可以通過(guò)Ang-1及VEGF等因子水平的調(diào)節(jié)而影響腫瘤血管生成，從而影響腫瘤的侵襲性及轉(zhuǎn)移能力[16]。通過(guò)本研究可以看出，EGFR在乳腺癌中的表達(dá)情況和CD29是相類(lèi)似的：其陽(yáng)性表達(dá)率也是隨著腫瘤的發(fā)展、分化程度的降低以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)而升高的，說(shuō)明EGFR對(duì)乳腺癌的惡性生物學(xué)行為起著重要的促進(jìn)作用，

文獻(xiàn)[17]研究發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展以至侵襲轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，整合素與EGFR之間的“協(xié)同效應(yīng)”起著重要作用。兩者的相互作用主要表現(xiàn)在以下幾方面：（1）整合素的交聯(lián)可以引起EGFR的聚集，進(jìn)而響應(yīng)表皮生長(zhǎng)因子（epidermal growth factor，EGF）信號(hào)途徑活化Rho因子，導(dǎo)致細(xì)胞骨架重排，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。而EGF的信號(hào)也可引起整合素的重新分布，促進(jìn)細(xì)胞偽足的生成，以利于腫瘤細(xì)胞對(duì)周邊組織的侵襲[18]。（2）整合素可以和神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1（Neurigulin 1，

NRG 1）的EGF結(jié)構(gòu)域結(jié)合形成三元復(fù)合物，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)[19]。（3）EGFR還能促進(jìn)整合素的表達(dá)，進(jìn)而激活Src蛋白，導(dǎo)致游離的腫瘤細(xì)胞對(duì)凋亡信號(hào)的抵抗。（4）有研究顯示單獨(dú)的整合素β1鏈即CD29可以與EGFR形成復(fù)合物，放大EGFR通路信號(hào)，活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖與侵襲[20]。

本研究結(jié)果顯示，EGFR和CD29在乳腺癌中的表達(dá)呈正相關(guān)性，說(shuō)明兩者的過(guò)表達(dá)在乳腺癌的發(fā)生進(jìn)展、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移等方面都存在著協(xié)同效應(yīng)。而且試驗(yàn)結(jié)果還顯示隨著乳腺癌的進(jìn)展，越是侵襲性強(qiáng)、分化差、轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)的病例，兩者的表達(dá)率均相應(yīng)增高，說(shuō)明CD29和EGFR的過(guò)表達(dá)對(duì)乳腺癌患者的預(yù)后可以起到一定的提示作用。同時(shí)針對(duì)CD29和EGFR在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的這種協(xié)同作用機(jī)制，也給腫瘤分子靶向治療提供了新藥的研究方向和治療靶點(diǎn)。

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